Summary

تصور من خلايا خلالية لشبكة (ICC) في الفئران كاجال

Published: July 27, 2011
doi:

Summary

الخلايا من خلالي كاجال (ICC) هي خلايا تنظيم ضربات القلب من الجهاز (GI) الهضمي. انهم يشكلون شبكات معقدة بين خلايا العضلات الملساء وبعد العقدية الألياف العصبية لتنظيم انقباض الجهاز الهضمي. هنا ، نقدم أساليب المناعي مستعرضة وكله يشن التصور شبكات المحكمة الجنائية الدولية الفئران.

Abstract

الخلايا من خلالي كاجال (ICC) هي مشتقة الوسيطة "خلايا تنظيم ضربات القلب" من الجهاز (GI) التي تولد موجات الهضمي بطيء العفوية المطلوبة لالتمعج والتوسط من المدخلات العصبية system1 العصبي المعوي. فرعية مختلفة من المحكمة الجنائية الدولية شكل شبكات متميزة في العضلية والجهاز الهضمي 2،3. ويرتبط فقدان أو ضرر وقع على هذه الشبكات مع عدد من اضطرابات حركية 4. المحكمة الجنائية الدولية تعبر عن الخلايا مستقبلات كيناز التيروزين KIT على غشاء البلازما وكيت وقد استخدمت immunostaining على مدى السنوات ال 15 الماضية لتسمية شبكة 5،6 المحكمة الجنائية الدولية. الأهم من ذلك ، مطلوب النشاط العادي للمحكمة الجنائية الدولية من أجل التنمية KIT 5،6. رمي تحول الخلايا نتائج المحكمة الجنائية الدولية في الورم انسجة الجهاز الهضمي (GIST) ، التي تؤوي كثيرا الطفرات KIT اكتساب وظيفة من بين 7،8. نحن أظهرت مؤخرا أن ETV1 عامل بقاء النسب المحددة التي أعرب عنها في النسب للمحكمة الجنائية الدولية / GIST والمنظم الرئيسي الترانسكربتي المطلوبة لكل من الطبيعي تشكيل شبكة من المحكمة الجنائية الدولية وتكون الأورام GIST 9. نظهر أيضا أنها تتعاون مع تفعيل الطفرات في KIT تكون الأورام. هنا ، نحن تصف أساليب التصور شبكات المحكمة الجنائية الدولية في الفئران ، ويعتمد بشكل كبير على البروتوكولات التي تم نشرها مسبقا 10،11. في الآونة الأخيرة ، تم أيضا القناة كلوريد anoctamin 1 (ANO1) التي توصف بأنها علامة غشاء محددة من المحكمة الجنائية الدولية 11،12. لما لها من البلازما توطين الغشاء ، يمكن استخدام كل من البروتينات المناعي لتصور شبكات المحكمة الجنائية الدولية. هنا ، نحن تصف تصور من قبل المحكمة الجنائية الدولية الشبكات الثابتة والمجمدة cyrosections الاستعدادات لشن كله.

Protocol

1. تشريح الجهاز الهضمي المسالك الماوس الموت الرحيم الفئران قبل الإرشادات IUCAC المحلية دبوس كل طرف على سطح الستايروفوم وشطف السطح البطني مع الايثانول 70 ٪. فتح التجويف البطني مع شق خط الوسط طويلة من الحجاب الحاجز لالعانة. جعل واحدة في قطع المريء القاصي وخفض ثان في الأمعاء الكبيرة القاصي وإزالة الجهاز الهضمي من المعدة إلى فتحة الشرج ان الكتلة ، وقطع بعناية الأربطة في العفج والأعور باستخدام مقص صغير. مكان غي المسالك في طبق بتري مع برنامج تلفزيوني. تشريح بعيدا مساريق باستخدام الملقط (الشكل 1). لفصل المعدة والأمعاء الدقيقة والأمعاء الغليظة ، وقطع على بوابة المعدة وتقاطع اللفائفية. شطف لمعة من كل جزء من الجهاز الهضمي مع برنامج تلفزيوني باستخدام حقنة 5ml المرفقة إبرة التغذية (أقدم الفئران) أو إبرة حادة (الفئران الأصغر سنا). فتح المعدة والأمعاء الدقيقة والأمعاء الغليظة على طول الحدود المساريقي. قطع قطعتين لكل جزء من الجهاز الهضمي ، واحدة لرؤية جبل بأكمله واحد لcryosection. 2. كله إعداد العينات وجبل immunostaining ضع قطعة كاملة من كل جزء من الجهاز الهضمي في أنبوب الطول 1.5 microfuge مليئة 1.0 مل من الاسيتون وعينات الجليد الباردة إصلاح ما لا يقل عن 1 ساعة بمعدل 4 درجات مئوية. قد يتم تخزين العينات لمدة تصل إلى 1 في الاسبوع -20 درجة مئوية. نحن عادة تخزين العينات في الأسيتون ، والشروع في إعداد cyrosections. 2X غسل العينة مع برنامج تلفزيوني. عينة مكان في طبق بتري مع برنامج تلفزيوني. تحت تشريح miscroscope ، كشط الطبقة المخاطية بعناية قبالة مع مشرط من خلال عقد واحد نهاية مع زوج من ملاقط ، وترك العضلية. ويمكن خفض العضلات الى قطع 5mm لتلطيخ مع الأجسام المضادة المختلفة. لا تقم بتخزين أكثر من 2 في برنامج تلفزيوني قبل أيام تلطيخ. ويمكن أن يتم منع وحضانة الخطوات في بئر واحدة من 24 لوحة جيدا أو في أنبوب microfuge 1.5ml. كتلة مع 0.5 مل من حجب العازلة (5 ٪ مصل الماعز ، و 0.1 ٪ تريتون X – 100 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة بمعدل 4 درجات مئوية). احتضان مع الأجسام المضادة الأولية مخففة في حجب العازلة وتناوب بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. وقد استخدمنا بنجاح ACK – 2 المضادة للمجموعة الفئران والأرانب مكافحة Ano1 ، والأرانب لمكافحة الأجسام المضادة للPgp9.5 immunostaining جبل بأكمله. ليغسل 2X 5 دقائق مع برنامج تلفزيوني على محور دوار في درجة حرارة الغرفة. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية مخففة في المخزن حظر لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة على محور دوار. نستخدم عادة اليكسا فلور 488 المضادة للأرنب وفلور اليكسا 594 مكافحة الفئران الأضداد. يغسل لمدة 15 دقيقة مع برنامج تلفزيوني على 3X المدورة في درجة حرارة الغرفة. جبل على الشريحة ، جنبا مصلوي على رأس لضمان توجيه الأنسجة خلال الفحص المجهري. وسوف يضمن هذا التوجه الجانب مصلوي لمواجهة ساترة ويكون واجه أول ما ركز المرء في الشريحة على المجهر. نفعل ذلك على مجهر تشريح. في بعض الأحيان ، نقوم بدراسة لفترة وجيزة في النسيج تحت المجهر مضان لتوجيه صحيح. تحت المجهر مضان لتصور مجموعة أو Ano1 ، ينبغي للمرء أن تواجه ICC – MY أول شبكة من جانب ساترة. المقبل ، نضح PBS أكبر قدر ممكن من دون تجفيف تماما. إضافة 50 ميكرولتر مجموعة من وسائل الإعلام من الصعب تركيب (نستخدم إطالة الذهب) ، وبلطف مكان زلة تغطية على رأس الأنسجة. يسمح وضع تصاعد بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة والشرائح في مخزن -80 درجة مئوية. للفحص المجهري ، استخدمنا المجهر حقل واسع مع Z – محرك الأقراص. سواء كنا هدفا الهواء 20X (NA 0.75 ، لامزيغ الخطة) أو 60X الهدف النفط (NA 1.4 ، لامزيغ الخطة) واستغرق 2 ميكرومتر أو 1 ميكرون Z – المقاطع التي تغطي كامل العضلية. وكان في وقت لاحق deconvoluted الصور باستخدام برنامج Autoquant deconvolution. بدلا من ذلك ، وقد استخدمت العديد من الآخرين المجهري متحد البؤر بدلا من ذلك مع نتائج مماثلة. 3. إعداد وCryosection immunostaining وضع كل جزء من الجهاز الهضمي ، جنبا مصلوي أسفل ، مسطحة على ورق التصفية. قطع ورقة تصفية حول الانسجة. نسيج مكان على ورقة تصفية في بارافورمالدهيد 4 ٪ (PFA) في برنامج تلفزيوني (ونحن تمييع بارافورمالدهيد 32 ٪ في قنينة مغلقة في برنامج تلفزيوني قبل استخدام الحق) لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ويمكن أن يتم التثبيت في 6 — 12 أو إضافة لوحة اعتمادا على حجم الأنسجة ، أو في أنبوب 1.5 مل microfuge. إذا فعلت في لوحة ، parafilm لتقليل التعرض PFA. أوقات أطول قد يؤدي إلى تثبيت اخفاء مستضد ، لا سيما بالنسبة للأجسام المضادة لمكافحة كيت ACK – 2. إزالة الأنسجة من PFA ومكان في السكروز 30 ٪ في برنامج تلفزيوني. تسمح الأنسجة لتغرق بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. تتوازن مع الأنسجة نسبة 1:1 من السكروز 30 ٪ و أكتوبر لمدة 1 ساعة. ثم يشن الأنسجة عموديا في cryomold مليئة أكتوبر المحور الطولي للالجهاز الهضمي وينبغي بالتوازي مع cyrosections. عند دراسة الفئران مع المورثات مختلفة أو مع علاجات مختلفة ، قد يكون من المفيد لتركيب الأنسجة المختلفة من الفئران على نفس cryomold لضمان المعالجة المتوازية. تجميد الثلج الجاف ووضعه في الثلاجة -80 درجة مئوية للتخزين. 10 ميكرومتر قطع cryosectionsعلى الشريحة وتخزينها في الفريزر -80 درجة مئوية. نقطع عادة قسمين لكل شريحة. علينا أيضا أن أداء عادة H & E تلون cryosection شريحة واحدة. لالمناعي ، يوازن first الشريحة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. ثم رسم دائرة حول الأنسجة باستخدام القلم PAP. كتلة مع 150 ميكرولتر من حجب العازلة (نفس لimmunostaining جبل بأكمله) لمدة 1 ساعة. نضح عازلة تمنع وإضافة 150 الضد الأولية ميكرولتر المخفف في منع احتضان العازلة والمبيت في غرفة 4 في ترطيب درجة مئوية. 5 غسل 2X دقيقة مع برنامج تلفزيوني. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية المخفف في عرقلة العازلة لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. نستخدم عادة اليكسا 488 المضادة للأرنب واليكسا 594 أضداد الفئران. يغسل لمدة 15 دقيقة 3X مع برنامج تلفزيوني. نضح الشريحة دون تجفيف تماما الأنسجة. إضافة قطرة من الصعب ضبط وسائل الاعلام مع تصاعد دابي (نستخدم إطالة الذهب) ومكان # 1.5 ساترة. الشريحة مكان في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها لتعيين وتخزينها في الفريزر -80 درجة مئوية. الحصول على صور ثلاثية مضان به دابي ، FITC ، وتكساس الأحمر مجموعات التصفية. 4. ممثل النتائج : هنا ، فإننا نستخدم الأمعاء الغليظة كمثال على ذلك. H & E وصمة عار على السكروز المحمية ثابتة القسم المجمدة المستخدمة لالمناعي تظهر بعض القطع الأثرية مقارنة مع مرجع القسم البارافين (الشكل 2) ، حيث الخط الأصفر demarks الضفيرة العضلية المعوية بين طبقات العضلات الدائرية والطولية وdemarks الخط الأخضر الحدود بين الغشاء المخاطي وmuscularlis. دراسة cryosection ، من الغشاء المخاطي لالمصلية ، كنت أول لقاء للأرق العضلات الطولية (LM) تليها طبقة أكثر سمكا من طبقة دائرية (CM) في العضلات. وينبغي أن يكون في المقطع بالتوازي مع العضلات الطولية لذلك ينبغي أن يكون نوى LM ممدود إلى حد ما في حين أن من نوى CM ينبغي أن تكون صغيرة ومستديرة. وبين LM CM هي plexi العضلية المعوية مصنوعة من الخلايا العصبية التي صمة عار مع Pgp9.5. Pgp9.5 أيضا البقع العمليات العصبية في جميع أنحاء CM. والمحكمة الجنائية الدولية العضلية المعوية الشبكة (ICC – MY) تحيط الضفيرة العضلية المعوية ومصنوعة من خلايا متعدد الأقطاب. داخل طبقة العضلات الطولية ، وهناك غرفة التجارة الدولية نادرة العضلي (ICC – IMS) التي تعمل في خلايا القطبين بالتوازي مع العضلات. داخل الطبقة العضلية الدائرية ، وهناك وفرة ICC – الرسائل الفورية التي هي أيضا خلايا ثنائية القطب التي تعمل بالتوازي مع العضلات الدائرية وعبر مقطوع مع هذا الخفض. عند تقاطع للالعضلية وتحت المخاطية ، وشبكة تتألف من المحكمة الجنائية الدولية تحت المخاطية ICC – SMPS هو عبارة عن شبكة مسطحة من غرفة التجارة الدولية متعدد الأقطاب. دراسة مجموعة كاملة تحميل immunostaining من الأمعاء الغليظة ، وينبغي للمرء أن يتوقع أن تواجه المحكمة الجنائية الدولية ، أول شبكة MY ، ثم ICC – IM من CM ، وشبكات ICC – SMP ، باعتبارها واحدة من يركز ساترة (Figure. 3) . وقد وصفت قياس الحجمي الشبكات باستخدام المحكمة الجنائية الدولية لإعادة الإعمار 3D كله يشن الصور 10. باستخدام المجهر حقل واسع ، ليس هناك كبير خارج الطائرة مضان في الصور الخام التي يمكن إزالتها بعد deconvolution (الشكل 3). سوف ناقصة تجريد الغشاء المخاطي في مضان الخلفية نتيجة عالية. ANO1 آخر هو علامة على المحكمة الجنائية الدولية ، وشارك في immunostaining من كيت وANO1 يظهر التداخل الكامل للتلوين للمحكمة الجنائية الدولية (الشكل 4). الشكل 1. الممثل تشريح الجهاز الهضمي الماوس ، وأعيد طبعه بإذن 13. الشكل 2 ألف) الممثل H & E تلطيخ من الأمعاء الماوس كبيرة من cryosections استعداد كما هو موضح جزءا لا يتجزأ من البارافين ومرجعية المقطع تظهر بعض القطع الأثرية انكماش cryosections. وdemarks الخط الأصفر الضفيرة العضلية المعوية والخط الازرق الفاصل بين الغشاء المخاطي من العضلية. ب) الممثل كيت (أحمر ، ACK – 2) وPgp9.5 (الخضراء) المناعي مزدوجة مع counterstaining (الأزرق) دابي من الأمعاء الماوس كبيرة. LM : طولية CM العضلات : العضلات الدائرية. مقياس شريط 20 ميكرون. الشكل 3. الممثل كيت (أحمر ، ACK – 2) كله يشن المناعي من نفس الحقل على ثلاث طائرات التنسيق ، وICC – MY الطائرة على الحدود LM / CM ، الطائرة ICC – IM في CM ، والمحكمة الجنائية الدولية. SMP الطائرة على الحدود CM / مخاطية. وتظهر الصور والصور deconvoluted الخام. مقياس شريط 20 ميكرون. الشكل 4. الممثل المزدوج المناعي من Ano1 (الخضراء) وكيت (أحمر ، ACK – 2) في الأمعاء الغليظة. مقياس شريط 20 ميكرون.

Discussion

وتميزت في البداية الخلايا الخلالي من كاجال بواسطة y سانتياغو كاجال Ramóón احد بالضبط منذ القرن باستخدام كرومات الميثيلين البقع الزرقاء والفضية والعضلية المعوية. كاجال كان يعتقد في البداية كانت المحكمة الجنائية الدولية استنادا إلى عمليات الخلايا العصبية التي هي تذكرنا المحاور والتشعبات. على مدى العديد من السنوات التي تلت ذلك ، كان محدودا دراسة البيولوجيا المحكمة الجنائية الدولية بسبب الافتقار إلى علامات معينة حتى اكتشاف أن KIT ليس فقط هو المعبر عنها في المحكمة الجنائية الدولية ، ولكن مطلوب أيضا من أجل تنميتها 6. منذ ذلك الحين ، كيت المناعي تستخدم على نطاق واسع في دراسة علم الأحياء للمحكمة الجنائية الدولية ، وأدى أيضا إلى تقدير المحكمة الجنائية الدولية في أجهزة أخرى مثل تقلص المثانة البولية. مؤخرا ، تم التعرف ANO1 كمؤشر موثوق بها المحكمة الجنائية الدولية الثانية.

كانت هناك العديد من المنشورات على مدى السنوات ال 15 الماضية المناعي باستخدام المحكمة الجنائية الدولية لتحديد التثبيت باستخدام تقنيات مختلفة ومتزايدة. يعمل أفضل مقارنة بين أيدينا "ثابتة المجمدة" cryosections التي تم مسبوقة مع بارافورمالدهيد والسكروز المحمية لالأسيتون أو بارافورمالدهيد بعد التثبيت بعد cryosectioning. ليتصاعد كله ، وجدنا أن التثبيت الأسيتون تليها تشريح المخاطية يعطي نتائج أكثر قوة.

تاريخيا ، كان ACK – 2 على الضد من أدوات الاختيار للماوس للمحكمة الجنائية الدولية تحديد الهوية. وهو فأر وحيدة النسيلة التي تعترف المجال خارج الخلية ، وإنما هو أيضا الأجسام المضادة التي تسبب عرقلة علوص عندما تعطى للعيش الفئران. ومع ذلك ، هو تدمير ببطء حاتمة ACK – 2 قبل تثبيت بارافورمالدهيد وليس انقاذ القياسية أساليب استرجاع مستضد. لقد وجدنا أن حاتمة ACK – 4 وأكثر مقاومة للبارافورمالدهيد التثبيت. بالمقارنة مع الكتل المجمدة الثابتة والمقاطع ، وكتل البارافين وجزءا لا يتجزأ من أفضل المقاطع يحفظ التشكل وأكثر استعدادا للأرشفة على المدى الطويل (الشكل 4). وقد لا ACK – 2 أو 4 – ACK استخدمت بنجاح في أقسام البارافين. اتسمت أننا D13A2 ، وهو جسم الأرنب جديدة وحيدة النسيلة ، ويعمل جيدا بصورة استثنائية في كل من الأبواب الثابتة والمجمدة البارافين من الجهاز الهضمي.

وأعرب عن عدة في العديد من أنواع الخلايا الأخرى ، بما فيها الخلايا الصباغية ، والخلايا المكونة للدم ، والخلايا الجرثومية ، وخاصة في الخلايا البدينة والتي توجد أيضا في الجهاز الهضمي. لحسن الحظ ، وجدت معظم الخلايا البدينة والغشاء المخاطي وليس في العضلية. يمكن تلوين مزدوجة مع الأرنب Ano1 المضادة للطائرات ومضادة للمجموعة الفئران القضاء غير محددة تلطيخ كل الأضداد (الشكل 4). ومن الجدير بالذكر أيضا أن التعبير النسبية لكيت وAno1 بين الفئات الفرعية للمحكمة الجنائية الدولية يبدو مختلفا. على سبيل المثال ، في الأمعاء الدقيقة ، وتلطيخ كيت هو أكثر من ذلك بكثير مكثفة في المحكمة الجنائية الدولية العضلية المعوية بالمقارنة مع المحكمة الجنائية الدولية من الضفيرة العضلية العميقة في حين Ano1 تلطيخ مشابه.

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للسرطان (K08CA140946 ، لYC) ، (5F32CA130372 ، لPC) ، (وR01CA102774 R01HL055748 لPB) ، وزارة الدفاع (PC094302 لYC) ، وصندوق عائلة شومان للبحوث GIST (ل PC) ، واتحاد السرطان ستار (لأجهزة الكمبيوتر ، البطاقة الصفراء ، وCLS PB). نود أن نشكر كاتيا MANOVA ، فان نينغ ، وMesurh تركيكول من MSKCC الجزيئية علم الخلية الأساسية للحصول على مساعدة مرفق مع cryosectioning وimmunostaining.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
rat anti-Kit antibody (clone ACK-2) eBioscience 14-1172 Use at 2μg/ml. Epitope is lost with overfixation.
rat anti-Kit antibody (clone ACK-4) Cedarlane CL8936AP Use at 2μg/ml.
rabbit anti-KIT antibody (clone D13A2) Cell Signaling 3074 Use at 1:100 dilution. Only antibody listed here that works well in paraffin sections.
rabbit anti-Pgp9.5 antibody Abcam ab10404 Labels neuronal cell cytoplasm. Useful for marking neurons of the myenteric plexus. Use at 1:1000 dilution.
rabbit anti-Ano1 antibody Abcam ab53212 Use at 2μg/ml
Alexa Fluor 594 goat anti-rat IgG Invitrogen A-11007 Use at 2μg/ml
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG Invitrogen A-11008 Use at 2μg/ml
Animal Feeding Needle Fisher 01-208-87 Silicon tipped needle useful for flushing GI tract of adult mice
Blunt Needle Becton Dickison 305180 Blunt needle useful for flushing GI tract of pre-weaned pups
ProLong Gold antifade reagent with DAPI Invitrogen P-36931 May use alternative hard-setting mounting media with DAPI
Tissue-Tek Cryomold Tissue-Tek 4557  
Tissue-Tek O.C.T. Tissue-Tek 4583  
32% Paraformaldehyde (10ml sealed ampoule) EM Sciences 15714 Open sealed ampoule and dilute to 4% just before use
Blocking buffer     5% Goat serum, 0.1% Triton X-100 in PBS

Riferimenti

  1. Sanders, K. M. A case for interstitial cells of Cajal as pacemakers and mediators of neurotransmission in the gastrointestinal tract. Gastroenterology. 111, 492-515 (1996).
  2. Ward, S. M., Sanders, K. M. Physiology and pathophysiology of the interstitial cell of Cajal: from bench to bedside. I. Functional development and plasticity of interstitial cells of Cajal networks. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 281, 602-611 (2001).
  3. Komuro, T. Structure and organization of interstitial cells of Cajal in the gastrointestinal tract. J Physiol. 576, 653-658 (2006).
  4. Sanders, K. M., Ordog, T., Koh, S. D., Torihashi, S., Ward, S. M. Development and plasticity of interstitial cells of Cajal. Neurogastroenterol Motil. 11, 311-338 (1999).
  5. Ward, S. M., Burns, A. J., Torihashi, S., Sanders, K. M. Mutation of the proto-oncogene c-kit blocks development of interstitial cells and electrical rhythmicity in murine intestine. J Physiol. 480, 91-97 (1994).
  6. Huizinga, J. D. W/kit gene required for interstitial cells of Cajal and for intestinal pacemaker activity. Nature. 373, 347-349 (1995).
  7. Rubin, B. P., Heinrich, M. C., Corless, C. L. Gastrointestinal stromal tumour. Lancet. 369, 1731-1741 (2007).
  8. Hirota, S. Gain-of-function mutations of c-kit in human gastrointestinal stromal tumors. Science. 279, 577-580 (1998).
  9. Chi, P. ETV1 is a lineage-specific survival factor in Gastrointestinal Stromal Tumour (GIST). Nature. , (2010).
  10. Kwon, J. G. Changes in the structure and function of ICC networks in ICC hyperplasia and gastrointestinal stromal tumors. Gastroenterology. 136, 630-639 (2009).
  11. Hwang, S. J. Expression of anoctamin 1/TMEM16A by interstitial cells of Cajal is fundamental for slow wave activity in gastrointestinal muscles. J Physiol. 587, 4887-4904 (2009).
  12. Gomez-Pinilla, P. J. Ano1 is a selective marker of interstitial cells of Cajal in the human and mouse gastrointestinal tract. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296, G1370-G1381 (2009).
  13. Sommer, G. Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 6706-6711 (2003).

Play Video

Citazione di questo articolo
Chen, Y., Shamu, T., Chen, H., Besmer, P., Sawyers, C. L., Chi, P. Visualization of the Interstitial Cells of Cajal (ICC) Network in Mice. J. Vis. Exp. (53), e2802, doi:10.3791/2802 (2011).

View Video