Spinal Cord Elettrofisiologia II: extracellulare fabbricazione di elettrodi di aspirazione
Summary
Una dimostrazione della fabbricazione e l'uso di un elettrodo extracellulare di aspirazione utilizzata per misurare le registrazioni elettrofisiologiche delle corde roditori neonatale vertebrale<em> In vitro</em
Abstract
Sviluppo della circuiteria neurale e locomozione possono essere studiate usando neonatale roditori midollo spinale centrale pattern generator (CPG) comportamento. Dimostriamo un metodo per fabbricare elettrodi di aspirazione che sono utilizzati per esaminare l'attività CPG, o locomozione fittizia, in cordoni roditori sezionato spinale. I cavi roditori spinale sono posti in artificiale liquido cerebrospinale e le radici ventrali sono trascinati nella elettrodo di aspirazione. L'elettrodo è costruito modificando un elettrodo di aspirazione disponibile in commercio. Un filo d'argento pesante viene usato al posto del filo standard assegnato da l'elettrodo disponibili in commercio. La punta di vetro sull'elettrodo commerciale viene sostituito con una punta di plastica per una maggiore durata. Prepariamo mano elettrodi disegnate e elettrodi in dimensioni specifiche di tubi, permettendo coerenza e riproducibilità. I dati vengono raccolti con un amplificatore e acquisizione di software neurogram. Le registrazioni vengono effettuate su un tavolo d'aria all'interno di una gabbia di Faraday per evitare interferenze meccaniche ed elettriche, rispettivamente.
Protocol
Discussion
Sviluppo del sistema nervoso possono essere studiate usando cavi isolati spinale di roditori. In presenza di neurotrasmettitori, locomozione fittizia possono essere generati dal midollo spinale sotto forma di attività elettrica fantasia 1,3. Queste esplosioni ritmiche sono prodotti a 0,2-0,5 Hz e sono modellati in alternanza destra-sinistra e flessori-estensori. A diversi stadi di sviluppo, la robustezza ed i modelli di questa attività varia a 1. Mutazioni genetiche possono anche disturbare il mo…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Samuel L. Pfaff è docente nei Laboratori di espressione genica presso il Salk Institute for Biological Studies e un investigatore della Howard Hughes Medical Institute. Questo lavoro è stato sostenuto dal Christopher e Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Kent Schnoeker e Mike Sullivan in Risorse Multimediale presso il Salk Institute ha fornito assistenza con la fotografia e montaggio.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” | |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | Clay Adams Brand Intramedic Becton Dickinson and Company | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) | |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | ||
| Adhesive | JB Weld | |||
| Adhesive: Silicone caulk | ||||
| Solder and soldering iron | ||||
| Bleach | ||||
| Xylene | ||||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | |||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| Magnetic Stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
| Miniboard (Headstage) | Grass Industries | F-15EB/B1 | ||
| Polyview Adaptor Unit | Grass Industries | PVA 8 | ||
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Industries | 15LT | ||
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | ||
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
Riferimenti
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
- Gallarda, B. W. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, 233-236 (2008).
- Landmesser, L. The development of motor projection patterns in the chick hind limb. J Physiol. 284, 391-414 (1978).
- Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
- Chanin, M. The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode. Science. 119, 323-324 (1954).
- Goulding, M. Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction. Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).
