تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد
Summary
توضح هذه المقالة إجراءات لتشكيل والتصور لبيوفيلم البكتيريا نما داخل الشريحة الغرفة 8 جيد
Abstract
ويعزى لطبيعة كثير من الأمراض المزمنة إلى تشكيل الأغشية الحيوية البكتيرية التي المعاند للعلاج بالمضادات الحيوية التقليدية. الأغشية الحيوية والمجتمع المرتبطة البكتيريا تعلق على السطح والمغطى في المصفوفة. دور المصفوفة خارج الخلية متعددة الأوجه ، بما في ذلك تسهيل الحصول على المواد الغذائية ، ويوفر حماية كبيرة ضد الضغوط البيئية (مثل المضيف الاستجابات المناعية). في محاولة لاكتساب فهم أفضل لكيفية البكتيريا داخل بيوفيلم الاستجابة للضغوط البيئية التي استخدمناها بروتوكولا حيث تصور لنا الأغشية الحيوية البكتيرية التي شكلت في الشريحة الغرفة 8 أيضا. تم صبغ والأغشية الحيوية مع BacLight لايف / الميت وصمة عار وفحصت باستخدام المجهر مبائر لتوصيف حجم بيوفيلم النسبية ، وهيكل تحت ظروف مختلفة الحضانة. جمعت Z – المكدس الصور عن طريق المجهر وتحليلها بواسطة مبائر COMSTAT. ويمكن استخدام هذا البروتوكول للمساعدة في توضيح آلية وحركية الذي شكل الأغشية الحيوية ، وكذلك تحديد المكونات التي تعتبر هامة لهيكل بيوفيلم والاستقرار.
Protocol
Discussion
فهم الآلية التي شكل الأغشية الحيوية ، فضلا عن المكونات التي تميز بها المصفوفة ، وهي منطقة شديدة الأهمية. ويمكن استخدام هذا البروتوكول للمساعدة في تحديد البروتينات أو المكونات الأخرى التي تساهم في السلامة الهيكلية للبيوفيلم ، فضلا عن المساعدة في تحديد واستهداف البروتينات التي قد تصلح لتطبيق العلاجية.
وقد تم تأسيس حضانة مرات والتخفيفات في البروتوكول الموصوفة أعلاه المثلى لتشكيل بيوفيلم التي nontypeable المستدمية النزلية (NTHI). قد تكون هناك حاجة إلى بعض الأعمال التمهيدية لتحسين هذه الخطوات بالنسبة للأنواع البكتيريا الأخرى (أي تخفيف الأولي وفترة حضانة اللازمة لتحقيق منتصف سجل النمو التدريجي). وقد تم تأسيسها في تخفيف 1:2500 لبذر الأولي للدوائر لضمان أن بيوفيلم قوية من شأنها تطوير الشرائح في الغرفة التي يسببها حسب هذا الكائن وداخل الحضانة وذكرت مرات ، من دون بيوفيلم overgrowing غرفة و / أو استنفاد المواد المغذية المتوفرة . وبالتالي يجوز التخفيف الأولية والحضانة أو أوقات الحاجة الى تعديلها لأنواع البكتيريا الأخرى.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم تمويل العمل من قبل NIDCD / NIH R01DC003915 لBakaletz LO.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chocolate II agar | Fisher | B21267X | ||
| 8-well chamber slides | Fisher | 12-656-18 | ||
| BacLight Live/Dead bacterial viability kit | Fisher | NC9439023 | ||
| BHI | Fisher | 211059 | ||
| Hemin | Sigma | H5533 | ||
| β-NAD | Sigma | N7004 | ||
| Permaslip mounting media | Fisher | NC9693613 |
Riferimenti
- Bakaletz, L. O. Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance. Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).
- Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT. Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).
