نمو وتمايز الخلايا القطب الشمالي الأرضي الكبار السنجاب الجذعية العصبية الحصين
Summary
وأعدت خلايا جذعية عصبية من الحصين غير أخلاقي السبات رضيع أبن سنة السناجب البرية في القطب الشمالي (AGS). ويمكن توسيع هذه الخلايا الجذعية العصبية من خلال ممرات عديدة ، متباينة ، والحفاظ على الخلايا العصبيه 50:50 تقريبا لثقافة الدبقية.
Abstract
السناجب البرية في القطب الشمالي (Urocitellus parryii ، AGS) هي فريدة من نوعها في قدرتها على السبات مع درجة حرارة الجسم الأساسية القريب أو ما دون درجة التجمد 1. هذه الحيوانات كما تقاوم الإصابة الدماغية الى الدماغ في الجسم الحي و2،3 الأوكسجين الجلوكوز الحرمان 4،5 في المختبر. وفرت هذه الصفات الفريدة دافعا لعزل الخلايا العصبية لدراسة خصائص AGS العصبية الكامنة التي يمكن أن تشكل قدرة على مقاومة الخلايا العصبية AGS الإصابات والوفيات الناجمة عن نقص التروية الخلية ودرجات حرارة شديدة البرودة. ويمكن التعرف على البروتينات أو أهداف الجينات التي تسمح للخصائص المميزة لهذه الخلايا تساعد في اكتشاف علاجات فعالة لعدد من المؤشرات ونقص تروية لدراسة التسامح الباردة. الكبار AGS الحصين يحتوي على خلايا الجذعية العصبية التي لا تزال تتكاثر ، مما يسمح للتوسع سهل من هذه الخلايا الجذعية في الثقافة. نحن هنا وصف الأساليب التي يمكن للباحثين الاستفادة من هذه الخلايا الجذعية العصبية ومتمايزة عن أي عدد من الأغراض. ويمكن باتباع هذه الخطوات بشكل وثيق يمكن توسيع الخلايا الجذعية العصبية AGS من خلال اثنين من الممرات أو أكثر ومن ثم كانت متباينة إلى ثقافة عالية في TUJ1 إيجابية الخلايا العصبية (~ 50 ٪) دون اللجوء إلى استخدام المواد الكيميائية السامة إلى تقليل عدد الخلايا المنقسمة. الإسكيمية يدفع الخلايا العصبية (6) وتكوين الخلايا العصبية التي العائدات عبر مجاهدي خلق / إرك ومسارات بقاء PI3K/Akt يشير يساهم في مقاومة نقص التروية في الجسم الحي في المختبر 7 و 8 (كيليهر اندرسون ، ودرو وآخرون ، قيد الإعداد). ويمكن توصيف هذه الخلايا مزيد من العصبية فريدة من نوعها تقدم على جبهات عديدة ، وذلك باستخدام بعض أو كل من هذه الأساليب.
Protocol
Discussion
AGS خلايا البالغين الجذعية العصبية هي قوية ويمكن توسيعها لفقرات عديدة مما يجعلها مصدرا ممتازا للخلايا الجذعية العصبية لدراسة الخصائص الأساسية في الخلايا الجذعية العصبية. معدل التوسع هو واحد تقريبا يتضاعف كل 24 ساعة ، ولكن يجب أن تكون هذه الخلايا passaged قبل الوصول إلى نق…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق البحث الطبي التابع للجيش الأميركي والعتاد منح قيادة # 05178001 و06 – NS041069 من المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية. نشكر جويل Vonnahme لتعليقات مفيدة على البروتوكول.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
Riferimenti
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia. Stroke. 37, 1261-1265 (2006).
- Dave, K. R. Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel. J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).
- Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).
- Christian, S. L. Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).
- Jin, K. Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).
- Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).
- Sung, S. M. Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells. Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).
- Brewer, G. J. Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons. J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).
- Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells. Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).
