Avcellulariserande fettkuddar från mammary: Härleda extracellulära matrishydrogeler från mammary fettkuddar
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Alves et. al., Studerar normala vävnadsstrålningseffekter med hjälp av extracellulära Matrishydrogeler. J. Vis. Exp. (2019).
Denna video beskriver en teknik för att härleda extracellulära matris hydrogeler genom att avcellularisera murin mammary fettkuddar efter ex vivo bestrålning för in vitro studier. Denna hydrogel hjälper till att efterlikna in vivo bröstvävnad miljö efter strålning behandling för att studera tumör cell beteende.
Protocol
1. Avcellulering OBS: Detta förfarande anpassades från tidigare publicerade metoder fokuserade på fettdecellularisering, som inkluderade natrium deoxycholate joniska tvättmedel snarare än natrium dodecyl sulfat att ta bort DNA effektivt. På dag 1, ta bort frysta Mammary Fettkuddar eller MFPs från -80 °C och tina vid rumstemperatur. När de tinat, torka MFPs kort på en delikat uppgiftsservett. Väg MFP:erna med hjälp av en …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Citazione di questo articolo
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).