Tamponi grassi mammari decellulari: derivazione di idrogel a matrice extracellulare da cuscinetti grassi mammari
Published: April 30, 2023
Abstract
Questo video descrive una tecnica di derivazione degli idrogel a matrice extracellulare decellularizzando i cuscinetti di grasso mammario murino a seguito dell’irradiazione ex vivo per studi in vitro. Questo idrogel aiuta a imitare l’ambiente del tessuto mammario in vivo dopo il trattamento con radiazioni per studiare il comportamento delle cellule tumorali.
Protocol
1. Decellularizzazione NOTA: Questa procedura è stata adattata da metodi precedentemente pubblicati incentrati sulla decellularizzazione adiposa, che includeva il detergente ionico deossicolato di sodio piuttosto che il solfato di dodecil di sodio per rimuovere il DNA in modo efficiente. Il primo giorno,rimuovere i cuscinetti di grasso mammario congelato o gli MFP da -80 °C e scongelare a temperatura ambiente. Una volta scongelati…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 10% Neutral Buffered Formalin, Cube with Spigot | VWR | 16004-128 | |
| 2-methylbutane | Alfa Aesar | 19387 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A1933-25G | |
| Dulbecco's phosphate-buffered saline | Gibco | 14040133 | |
| Fisher Healthcare Tissue-Plus O.C.T. Compound | Fisher Scientific | 23-730-571 | cryostat embedding medium |
| Kimtech Science Kimwipes | Kimberly Clark | delicate task wipes | |
| n-Propanol (Peroxide-Free/ Sequencing), Fisher BioReagents | Fisher Scientific | BP1130-500 | |
| PBS (10X), pH 7.4 | Quality Biological, Inc. | 119-069-151 | Phosphate-buffered saline |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Peracetic acid | Sigma-Aldrich | 77240-100ML | |
| Triton x-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ML | t-Octylphenoxypolyethoxyethanol |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Gibco | 25200-056 | |
| Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211 | Richard-Allan Scientific | 7211 | |
| Whatman qualitative filter paper, Grade 4 | Whatman | 1004-110 | grade 4 qualitative filter paper |
| Xylenes (Certified ACS), Fisher Chemical | Fisher Scientific | X5-5 |
Citazione di questo articolo
Decellularizing Mammary Fat Pads: Deriving Extracellular Matrix Hydrogels from Mammary Fat Pads. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20229, doi: (2023).