Drosophila Quantifizierung der neuromuskulären Junction (NMJ): Eine Methode zur Bewertung der synaptischen Morphologie und Funktion

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Castells-Nobau, A., et al. Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology. J. Vis. (2017).

Die Neuromuskuläre Schnittstelle Drosophila (NMJ) wird als Modell verwendet, um die Morphologie und Funktion von Synapsen zu studieren. Dieses Video beschreibt wichtige Funktionen, die Forscher quantifizieren, um das NMJ zu charakterisieren. Das Beispielprotokoll zeigt eine Software, die in der Lage ist, die Quantifizierung automatisch durchzuführen.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Castells-Nobau et al.,Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Anforderungen vor der Bildverarbeitung Führen Sie Drosophila offene Buchvorbereitungen der dritten instar wandernden Larven (L3), wie zuvor beschrieben. Co-Immunolabel Drosophila NMJ Terminals mit einer Kombination von zwei Marke…

Representative Results

Abbildung 1: Beispiele für unangemessene Makrosegmentierungsergebnisse. Ergebnisbilder nach dem Ausführen von “Drosophila NMJ Morphometrics” oder “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Teile der synaptischen Klemme sind nicht in der gelben Umrisslinie enthalten (A). Teile des Hintergrunds sind in der synaptischen Klemme durch die gelbe Umrisslinie enthalten (B). Blaue …

Materials

Immunostaining Dilution
Mouse anti-discs large 1 Developmental Studies Hybridoma Bank AFFN-DLG1-4D6 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidase Jackson IR 323-005-021 1/500
Rabbit anti-Synaptotagmin Gift from Hugo Bellen Jan-00
Mouse anti-Cysteine string protein Developmental Studies Hybridoma Bank DCSP-1(ab49) 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-Bruchpilot Developmental Studies Hybridoma Bank nc82 Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 Life technologies A11029 1/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 Life technologies A11011 1/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit ThermoFisher Z25006
ProLong Gold Antifade Mountant ThermoFisher P36930
Equipment
Confocal microscope or fluorescence microscope Leica SP5
Zeiss Axio imager
Computer Mac or Pc
Software
FIJI

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Citazione di questo articolo
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).

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