Summary

昆虫における単一感覚子録音キイロショウジョウバエハマダラカ</em

Published: February 17, 2010
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Summary

臭気物質の嗅覚ニューロンの電気生理学的応答は、単一感覚子記録を使って昆虫で測定することができます。このビデオの記事では、ショウジョウバエの触角の単一感覚子記録を実行する方法を紹介します(<em>キイロショウジョウバエ</em>)とマラリアの蚊(の上顎palps<em>ハマダラカ</em>)。

Abstract

嗅覚は、食品、仲間、捕食者、および産卵部位3を見つけるために昆虫のために不可欠です。昆虫嗅覚神経細胞は(OSNs)嗅覚器官の表面を覆う感覚器と呼ばれる感覚毛、で囲まれています。各感覚子の表面は、経由する付臭剤が通過すると、特定の感覚子に収容OSNsの感覚樹状突起をbathes感覚子リンパと呼ばれる液体に溶解、小さな孔で覆われている。 OSNの樹状突起は、その昆虫の機能の臭気依存性イオンチャネル4、5として、嗅覚受容体(OR)タンパク質を発現。論理和のいずれかが増大したり、OSNの基礎発火率を減少させると匂い物質の相互作用。活動電位の形でこのニューロン活動は、品質、強度、そして匂い6,7の時間特性の最初の表現を体現しています。

これらの感覚毛への容易なアクセスを考えると、それは、参照電極は、昆虫の目や身体のリンパ節に置かれている間、感覚子リンパに記録電極を導入することにより、単一OSNsから細胞外記録を行うことが可能である。一から四OSNs間ショウジョウバエ 、感覚器家の中で、しかしそれぞれのOSNは、通常、特徴的なスパイクの振幅が表示されます。スパイクソーティングの技術は個々のOSNsにスパイク応答を割り当てることが可能となります。この単一感覚子記録(SSR)技術は、感覚子リンパとOSNs 1、2、8の受容体活性によって生成される電気的なスパイクのような参照電極間の電位差を監視します。匂い物質に対する応答のスパイク数の変化は、昆虫でコーディング匂いの細胞学的根拠を示している。ここで、我々は現在、 キイロショウジョウバエハマダラカにSSRを実行するために私たちのラボで使用される調製法を説明し、感覚子特異的に着臭剤により誘導される代表的なトレースを示しています。

Protocol

1。臭気の希釈ほとんどの臭気物質は、パラフィン油に可溶である。しかし、DMSOまたはエタノールはまた、特定の臭気のための代替溶媒として使用することができます。ガラスバイアルに純粋なニオイから:;:適切な希釈液を(V Vボリュームなど1時10ボリューム)を用意します。最も臭気の希釈液は、室温で安定ですが、非常に揮発性化合物のためにそれが週単位で作業希釈をする?…

Discussion

嗅覚手がかりは、食料源、潜在的な仲間、そして捕食者を識別するために、生物によって使用されます。嗅覚ニューロン(OSNsは)外部からの刺激や情報が処理される脳の高次中枢との間の最初のリレーの中心です。 キイロショウジョウバエハマダラカでは、OSNsは簡単にアクセス可能であり、臭気のパフで刺激しながら、その電気的活動をモニターすることができます。

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Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Paraffin oil Odors Fluka 76235  
High purity odors (>98%) Odors Sigma-Aldrich   Methyl acetate
#296996
1-octen-3-ol
#74950
Filter paper strips Odors Fisherbrand 05-714-1 Chromatography paper
Connectors Odors Cole-Parmer EW-06365-40 1/16×1/8″
Glass vials Odors Agilent Technologies 5182-0556  
Air line plastic tubing Odor Delivery Python Products 500PAL  
1 serological pipette Odor Delivery Corning 4101 10 mL
Plastic tubing Odor Delivery Cole-Parmer EW-06418-0 0.050″x0.090″OD
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes Odor Delivery FisherBrand 13-678-20A 5-3/4 inches
Programmable stimulus controller Odor Delivery Syntech CS-55  
Anti-vibration table Electrophysiology Equipment TMC 63533 36”Wx30”Dx29”H
Faraday cage Electrophysiology Equipment TMC MI8133303  
Inverted microscope Electrophysiology Equipment Nikon E600FN ECLIPSE Recording microscope
10x and 100x objectives Electrophysiology Equipment Nikon 10x Plan Fluor 100x L Plan  
Dissecting microscope Electrophysiology Equipment Nikon EZ645 electrode sharpening/insect prep microscope
Magnetic stands Electrophysiology Equipment Newport MODEL 150  
IDAC Electrophysiology Equipment Syntech IDAC-4  
Acquisition software Electrophysiology Equipment Syntech Autospike  
1 macromanipulator Electrophysiology Equipment NARISHIGE MN-151 Joystick manipulator
Used for positioning reference electrode
1 micromanipulator Electrophysiology Equipment EXFO PCS-6000 Used for positioning recording electrode
Crocodile clip Electrophysiology Equipment Pomona AL-B-12-0  
Electric cable Electrophysiology Equipment Pomona B-36-0 Test Cable Assembly
2 electrode holders Electrophysiology Equipment Syntech N/A Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode
AC probe Electrophysiology Equipment Syntech N/A Universal single ended probe (10xAC)
Tungsten electrodes Electrophysiology Equipment Microprobes M210 straight tungsten rods, 0.005“x3“
Potassium hydroxide Electrophysiology Equipment Sigma-Aldrich 221473  
Syringe Electrophysiology Equipment BD 301625 20 mL
Power supply Electrophysiology Equipment WILD HEERBRUGG 6V 40W e.g MTR32  
Vertical puller Insect prep Narishige PB-7  
Razor blade Insect prep VWR 55411-050  
Dental wax Insect prep Patterson 091-1503  
Microscope slide Insect prep FisherBrand 12-550A  
Cover glass Insect prep FisherBrand 12-541A 18X18 #1.5
Polypropylene mesh Insect prep Small Parts inc. CMP-0500-B  
Glass electrode Insect prep Frederick Haer & Co. 27-32-0-075 Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm
Double-sided tape (3M) Insect prep 3M MMM6652P3436 Double-sided tape (3M)
Forceps Insect prep Fine Science Tools 021×0053 Dumont #5 Mirror Finish Forceps
Small plastic cup Insect prep VWR 89009-662 7 x 5.7 (23/4 x 21/4)
Electric aspirator Insect prep Gempler’s RHM200  

Riferimenti

  1. Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
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Citazione di questo articolo
Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725, doi:10.3791/1725 (2010).

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