Summary

कीड़े में एकल Sensillum रिकॉर्डिंग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae</em

Published: February 17, 2010
doi:

Summary

Odorants घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स के electrophysiological प्रतिक्रियाओं एकल sensillum रिकॉर्डिंग का उपयोग कीड़े में मापा जा सकता है. हम इस वीडियो लेख में प्रदर्शन होगा कि कैसे सिरका मक्खी के एंटीना में एक sensillum रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए (<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em>) और मलेरिया के मच्छर के दाढ़ की हड्डी का palps (<em> एनोफ़ेलीज़ gambiae</em>).

Abstract

गंध की भावना के कीड़ों के लिए आवश्यक खाद्य पदार्थ, साथी, शिकारियों, और oviposition 3 साइटों को खोजने. कीट घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) संवेदी sensilla नामक बाल, जो घ्राण अंगों की सतह को कवर में संलग्न हैं. प्रत्येक sensillum की सतह छोटे pores के साथ कवर किया जाता है, जिसके माध्यम से odorants पास बुलाया sensillum लसीका तरल पदार्थ है, जो एक दिया sensillum में रखे OSNs का संवेदी dendrites bathes में भंग. OSN dendrites odorant रिसेप्टर प्रोटीन (या) एक्सप्रेस, जो गंध gated आयन चैनल 4, 5 के रूप में कीड़े समारोह में. अन्य रैंकों या तो बढ़ जाती है के साथ odorants की बातचीत या OSN के बेसल फायरिंग दर घट जाती है. कार्रवाई क्षमता के रूप में इस neuronal गतिविधि गुणवत्ता, तीव्रता, और odorant 6, 7 के लौकिक विशेषताओं की पहली प्रतिनिधित्व का प्रतीक हैं.

इन संवेदी बाल करने के लिए आसान पहुँच को देखते हुए, यह संभव है sensillum लिम्फ में एक रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड शुरू, जबकि संदर्भ इलेक्ट्रोड या कीट की आंख और शरीर के लिम्फ में रखा गया है द्वारा एकल OSNs से कोशिकी रिकॉर्डिंग प्रदर्शन है. प्रत्येक OSN ड्रोसोफिला, एक और चार OSNs के बीच sensilla घर, लेकिन आम तौर पर एक विशेषता स्पाइक आयाम प्रदर्शित करता है. स्पाईक छँटाई तकनीक यह व्यक्तिगत OSNs spiking प्रतिक्रियाओं असाइन करने के लिए संभव बनाते हैं. यह एकल sensillum रिकॉर्डिंग तकनीक (SSR) sensillum लसीका और बिजली spikes है कि OSNs 1, 2, 8 पर रिसेप्टर गतिविधि द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं के रूप में संदर्भ इलेक्ट्रोड के बीच क्षमता में अंतर पर नज़र रखता है. Spikes के संख्या में odorant के जवाब में परिवर्तन कीड़ों में कोडन गंध के सेलुलर आधार का प्रतिनिधित्व करते हैं. यहाँ, हम तैयारी वर्तमान में हमारी प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और एनोफ़ेलीज़ gambiae SSR प्रदर्शन विधि का वर्णन है, और प्रतिनिधि sensillum विशेष तरीके में odorants द्वारा प्रेरित निशान दिखाने.

Protocol

1. गंध dilutions अधिकांश odorants आयल के तेल में घुलनशील हैं. हालांकि, DMSO या इथेनॉल भी विशेष रूप से odors के लिए वैकल्पिक सॉल्वैंट्स के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. कांच की शीशियों में शुद्ध odorants से:;: उचित dilutions (ध् ध्…

Discussion

घ्राण cues जीवों द्वारा उपयोग किया जाता है खाद्य स्रोतों, संभावित साथियों, और शिकारियों की पहचान कर रहे हैं. घ्राण संवेदी न्यूरॉन्स (OSNs) बाह्य stimuli और मस्तिष्क जहां जानकारी संसाधित है आगे की उच्चतर केन्द्रो…

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Paraffin oil Odors Fluka 76235  
High purity odors (>98%) Odors Sigma-Aldrich   Methyl acetate
#296996
1-octen-3-ol
#74950
Filter paper strips Odors Fisherbrand 05-714-1 Chromatography paper
Connectors Odors Cole-Parmer EW-06365-40 1/16×1/8″
Glass vials Odors Agilent Technologies 5182-0556  
Air line plastic tubing Odor Delivery Python Products 500PAL  
1 serological pipette Odor Delivery Corning 4101 10 mL
Plastic tubing Odor Delivery Cole-Parmer EW-06418-0 0.050″x0.090″OD
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes Odor Delivery FisherBrand 13-678-20A 5-3/4 inches
Programmable stimulus controller Odor Delivery Syntech CS-55  
Anti-vibration table Electrophysiology Equipment TMC 63533 36”Wx30”Dx29”H
Faraday cage Electrophysiology Equipment TMC MI8133303  
Inverted microscope Electrophysiology Equipment Nikon E600FN ECLIPSE Recording microscope
10x and 100x objectives Electrophysiology Equipment Nikon 10x Plan Fluor 100x L Plan  
Dissecting microscope Electrophysiology Equipment Nikon EZ645 electrode sharpening/insect prep microscope
Magnetic stands Electrophysiology Equipment Newport MODEL 150  
IDAC Electrophysiology Equipment Syntech IDAC-4  
Acquisition software Electrophysiology Equipment Syntech Autospike  
1 macromanipulator Electrophysiology Equipment NARISHIGE MN-151 Joystick manipulator
Used for positioning reference electrode
1 micromanipulator Electrophysiology Equipment EXFO PCS-6000 Used for positioning recording electrode
Crocodile clip Electrophysiology Equipment Pomona AL-B-12-0  
Electric cable Electrophysiology Equipment Pomona B-36-0 Test Cable Assembly
2 electrode holders Electrophysiology Equipment Syntech N/A Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode
AC probe Electrophysiology Equipment Syntech N/A Universal single ended probe (10xAC)
Tungsten electrodes Electrophysiology Equipment Microprobes M210 straight tungsten rods, 0.005“x3“
Potassium hydroxide Electrophysiology Equipment Sigma-Aldrich 221473  
Syringe Electrophysiology Equipment BD 301625 20 mL
Power supply Electrophysiology Equipment WILD HEERBRUGG 6V 40W e.g MTR32  
Vertical puller Insect prep Narishige PB-7  
Razor blade Insect prep VWR 55411-050  
Dental wax Insect prep Patterson 091-1503  
Microscope slide Insect prep FisherBrand 12-550A  
Cover glass Insect prep FisherBrand 12-541A 18X18 #1.5
Polypropylene mesh Insect prep Small Parts inc. CMP-0500-B  
Glass electrode Insect prep Frederick Haer & Co. 27-32-0-075 Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm
Double-sided tape (3M) Insect prep 3M MMM6652P3436 Double-sided tape (3M)
Forceps Insect prep Fine Science Tools 021×0053 Dumont #5 Mirror Finish Forceps
Small plastic cup Insect prep VWR 89009-662 7 x 5.7 (23/4 x 21/4)
Electric aspirator Insect prep Gempler’s RHM200  

Riferimenti

  1. Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
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Citazione di questo articolo
Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725, doi:10.3791/1725 (2010).

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