CRAF-14-3-3 Interaction Analysis in Live Cells Using a BRET-Based Approach

March 01, 2024

Биолюминесцентный резонансный перенос энергии (BRET) для измерения взаимодействий CRAF с белками 14-3-3 в живых клетках

01:07 min
•

Трансфекция клеток 293FT с помощью конструкций экспрессии pCMV5-NanoLuc-CRAF и pCMV5-14-3-3ζ-Halo

02:01 min
•

Получение клеток 293FT, трансфицированных pCMV5-NanoLuc-CRAF и pCMV5-14-3-3ζ-Halo, для эмиссионного анализа BRET

03:39 min
•
1Department of Cell and Molecular Pharmacology and Experimental Therapeutics,Medical University of South Carolina, 2Hollings Cancer Center,Medical University of South Carolina, 3Laboratory of Cell and Developmental Signaling, Center for Cancer Research,National Cancer Institute-Frederick

Summary

Traduzione automatica

Этот протокол описывает анализ на основе БРЭТ для измерения взаимодействий киназы CRAF с белками 14-3-3 в живых клетках. В протоколе изложены шаги по подготовке ячеек, считыванию излучений BRET и анализу данных. Также представлен пример результата с идентификацией соответствующих элементов управления и устранением неполадок для оптимизации анализа.

Article