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Identificazione delle impronte di RNA:Complessi proteici tramite l'immunoprecipitazioni dell'RNA in Tandem seguita dal sequenziamento (RIPiT-Seq)
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Identification of Footprints of RNA:Protein Complexes via RNA Immunoprecipitation in Tandem Followed by Sequencing (RIPiT-Seq)
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Identificazione delle impronte di RNA:Complessi proteici tramite l'immunoprecipitazioni dell'RNA in Tandem seguita dal sequenziamento (RIPiT-Seq)

DOI:
10.3791/59913-v

•

09:26 min

•

July 10, 2019

•

, ,
1Department of Molecular Genetics, Center for RNA Biology,The Ohio State University

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:40Cell Harvesting and Formaldehyde Treatment
  • 02:50FLAG Immunoprecipitation and RNase I Digestion
  • 04:09Affinity Elution and Magnetic Bead-antibody Conjugation
  • 05:14Second Immunoprecipitation
  • 06:12RNA Extraction and Analysis
  • 07:51Results: RNA and Protein Yields
  • 08:38Conclusion

Summary

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Qui, presentiamo un protocollo per arricchire i siti endogeni di legame dell'RNA o "impronte" di nasi: proteine (RNP) complessi da cellule di mammiferi. Questo approccio comporta due immunoprecipitazioni di sottounità RNP ed è quindi soprannominato immunoprecipitazioni di RNA in tandem (RIPiT).

Tags

RNA ImmunoprecipitationRIPiT-SeqRNA-protein ComplexesEpitope-tagged ProteinCRISPRImmunoprecipitationRNA ExtractionHEK293 CellsRNA Binding ProteinsRNA ProcessingDiseasesNeuropathiesCancer

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