Histonas são proteínas que ajudam a organizar o DNA em núcleos eucarióticos, servindo como “andaimes” em torno dos quais o DNA pode ser embrulhado, formando um complexo chamado “cromatina”. Essas proteínas podem ser modificadas através da adição de grupos químicos, e essas alterações afetam a expressão genética. Os pesquisadores usam uma técnica chamada imunoprecipitação de cromatina (ChIP) para entender melhor quais regiões de DNA associam a modificações específicas de histona ou outras proteínas regulatórias genéticas. Anticorpos são usados para isolar a proteína do interesse, e o DNA vinculado é extraído para análise.
Aqui, o JoVE apresenta os princípios por trás do ChIP, discutindo modificações específicas de histona e sua relação com a expressão genética e organização do DNA. Em seguida, revisamos como executar um protocolo ChIP e exploramos as maneiras como os cientistas estão usando essa técnica atualmente.
Procédure
A imunoprecipitação de cromatina, ou “ChIP”, é uma técnica usada por pesquisadores para avaliar interações proteína-DNA. Os fatores proteicos desempenham papéis importantes na regulação genética; não só organizam DNA em cromossomos, mas também se ligam a sequências específicas de DNA — chamados de sites regulatórios — para ativar ou reprimir a expressão. Durante o ChIP, a cromatina — que consiste em DNA e suas proteínas associadas — é “imunoprecipitada”, o que significa que é isolada através d…