सेप्सिस के सेकल लिगेशन और पंचर-प्रेरित माउस मॉडल में एक विश्वसनीय बायोमार्कर का मूल्यांकन
Summary
यह प्रोटोकॉल सेप्सिस के माउस मॉडल में सेकल लिगेशन और पंचर (सीएलपी) के ऑपरेटिव विवरण प्रस्तुत करता है। सीएलपी सेप्सिस के पशु मॉडल को बनाने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकों में से एक है। इसलिए, विश्वसनीय अनुसंधान परिणामों की प्राप्ति के लिए एक मानकीकृत सीएलपी प्रोटोकॉल की आवश्यकता होती है।
Abstract
सेप्सिस एक गंभीर जीवन-धमकाने वाली और तेजी से विकसित होने वाली बीमारी है जो दुनिया भर में सालाना लाखों मौतों का कारण बनती है। शोधकर्ताओं ने विभिन्न पशु मॉडल का उपयोग करके सेप्सिस के पैथोफिज़ियोलॉजी को स्पष्ट करने के लिए जबरदस्त प्रयास किए हैं; सेकल लिगेशन और पंचर (सीएलपी) द्वारा प्रेरित सेप्सिस का माउस मॉडल व्यापक रूप से प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है। सीएलपी मॉडल की गंभीरता और प्रतिकृति को प्रभावित करने वाले तीन तकनीकी पहलू सेकुम लिगेट का प्रतिशत, सेकल पंचर के लिए उपयोग की जाने वाली सुई का आकार और पेट की गुहा में निचोड़े गए मल की मात्रा हैं। सेप्सिस का तेजी से और विशिष्ट निदान एक महत्वपूर्ण कारक है जो परिणाम को प्रभावित करता है। सेप्सिस निदान के लिए स्वर्ण मानक माइक्रोबियल संस्कृति है; हालाँकि, यह प्रक्रिया समय लेने वाली है और कभी-कभी गलत होती है। सेप्सिस-विशिष्ट बायोमाकर्स का पता लगाना तेज है, लेकिन मौजूदा बायोमाकर्स एक छोटे आधे जीवन, गैर-विशिष्टता और अपर्याप्त संवेदनशीलता के कारण असंतोषजनक हैं। इसलिए, शुरुआती चरणों में सेप्सिस के एक विश्वसनीय बायोमार्कर की तत्काल आवश्यकता है। पिछले प्रकाशनों से पता चलता है कि सेप्सिस में अत्यधिक न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एनईटी) होते हैं। साइट्रूलिनेटेड हिस्टोन एच 3 (CitH3), एक नेट घटक के रूप में, सेप्टिक जानवरों और रोगियों दोनों में ऊंचा है, और CitH3 की उपस्थिति सेप्सिस का एक विश्वसनीय नैदानिक बायोमार्कर है। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य सीएलपी-प्रेरित सेप्सिस के एक मानकीकृत माउस मॉडल का वर्णन करना और सेप्सिस का एक विश्वसनीय रक्त बायोमार्कर स्थापित करना है। हमारा काम भविष्य में सेप्सिस के प्रारंभिक और सटीक निदान में योगदान कर सकता है।
Introduction
सेप्सिस को संक्रमण 1 के लिए एक अनियमित मेजबान प्रतिक्रिया के कारण जीवन-धमकाने वाले अंग की शिथिलता के रूप में परिभाषित कियागया है, और सेप्टिक शॉक सेप्सिस2 के गंभीर मामलों में मृत्यु का प्रमुख कारण है। सेप्सिस और सेप्टिक शॉक हर साल दुनिया भर में लाखों मौतों का कारण बनताहै। सेप्सिस वाले रोगियों के परिणाम में सुधार करने की कुंजी एंटीबायोटिक दवाओं जैसेउपचारों की शीघ्र शुरुआत है। सेप्सिस के निदान के लिए स्वर्ण मानक विधि माइक्रोबियल संस्कृति है; हालांकि, माइक्रोबियल संस्कृति समय लेने वाली है और गलत-सकारात्मक और गलत-नकारात्मक परिणामों को जन्म दे सकती है, जो नैदानिक महत्व को बहुत सीमित करतीहै। इस प्रकार, सेप्सिस के रक्त बायोमार्कर की पहचान करना अत्यधिक वांछनीय है। प्रोकैल्सीटोनिन को एक आदर्श सेप्सिस बायोमार्कर के रूप में मान्यता प्राप्त है, लेकिन सीमित नैदानिक प्रभावकारिता है क्योंकि यह बाँझरोगों से सेप्सिस को अलग करने में असमर्थ है।
माउस सेकल लिगेशन एंड पंचर (सीएलपी) का उपयोग आमतौर पर वैज्ञानिक अनुसंधान में सेप्सिस का एक मॉडल बनाने के लिए किया जाता है। सीएलपी सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किए जाने वाले सेप्सिस मॉडल में से एक है क्योंकि यह पॉलीमाइक्रोबियल पेरिटोनिटिस की नकल करता है, जो प्रोइन्फ्लेमेटरी और विरोधी भड़काऊ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं दोनों को सक्रिय करताहै। यह अच्छी तरह से स्वीकार किया जाता है कि सीएलपी वैकल्पिक तकनीकों की तुलना में अधिक चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक सेप्सिस मॉडल बनाता है, जैसे कि बैक्टीरियल एंडोटॉक्सिन का इंजेक्शन। इसलिए, सीएलपी को अनुसंधान में उपयोग के लिए शास्त्रीय सेप्सिस मॉडल माना जाताहै। हालांकि, सीएलपी का एक बड़ा नुकसान इसकी प्रजनन क्षमता है, क्योंकि मॉडल की गंभीरता कई कारकों से प्रभावित होती है जैसे कि सेकम लिगेट का प्रतिशत, सुई का आकार, पंचर की संख्या और लैप्रोटॉमी तकनीक। इसलिए, सीएलपी-प्रेरित सेप्सिस मॉडल को मानकीकृत करने की आवश्यकता है। वर्तमान अध्ययन मानकीकृत प्रक्रिया को दिखाने और इसकी प्रजनन क्षमता बढ़ाने के लिए सीएलपी-प्रेरित सेप्सिस मॉडल के प्रोटोकॉल विवरण का वर्णन करता है।
भड़काऊ प्रतिक्रिया सेप्सिस के शुरुआती चरण में होती है, जिसमें न्यूट्रोफिल अत्यधिक मात्रा में ऑक्सीडेंट और प्रोटीज जारी करते हैं जोअंग क्षति का कारण बनते हैं। सेप्सिस के पैथोफिज़ियोलॉजी में एक महत्वपूर्ण कारक न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एनईटी) का गठन है, जो डीएनए, सिट्रूलिनेटेड हिस्टोन और रोगाणुरोधी प्रोटीन जैसे परमाणु और साइटोसोलिकघटकों को छोड़ता है। हाल के अध्ययनों से पता चलता है कि एनईटी की अत्यधिक पीढ़ी सेप्सिस की विकृति की मध्यस्थता करती है; इस बीच, वाईडब्ल्यू 3-56 या सीएल-एमिडाइन जैसे रसायनों द्वारा पेप्टिडिल आर्जिनिन डीमिनेज (पीएडी) के एंजाइमेटिक अवरोध के माध्यम से एनईटी की कमी, सेप्सिस10,11 के माउस मॉडल में एक प्रो-सर्वाइवल प्रभाव डालती है। सिट्रूलिनेटेड हिस्टोन एच 3 (CitH3) को 201112 में सेप्सिस-विशिष्ट प्रोटीन के रूप में पहचाना गया था, और बाद के प्रकाशनों से पता चला है कि परिसंचारी CitH3 एकाग्रता सेप्सिस13,14 का एक विश्वसनीय नैदानिक बायोमार्कर है। CitH3 को प्रोकैल्सीटोनिन की तुलना में अधिक संवेदनशील और लंबे समय तक चलने वाला बायोमार्कर माना जाता है, और भड़काऊ साइटोकिन्स13 की तुलना में सेप्सिस को अलग करने में अधिक विशिष्ट है।
इस अध्ययन में, हमने सेप्सिस के सीएलपी-प्रेरित माउस मॉडल में सेप्सिस के एक विश्वसनीय नैदानिक बायोमार्कर का मूल्यांकन किया है।
Protocol
Representative Results
Discussion
सीएलपी सेप्सिस के प्रीक्लिनिकल मॉडल बनाने के लिए पेट में रोगजनकों का परिचय देता है। सीएलपी करते समय, बहिर्जात बैक्टीरिया के हस्तक्षेप को खत्म करने और एनेस्थेटिक्स16 की सटीक खुराक का उपयोग कर?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम प्रयोगों में मदद करने के लिए प्रोफेसर वांग वेई और डॉक्टर लियू शुआई को धन्यवाद देते हैं। इस काम को जियांग्या अस्पताल, सेंट्रल साउथ यूनिवर्सिटी (नंबर 2019 क्यू 10), हुनान प्रांत के राष्ट्रीय और विज्ञान फाउंडेशन (नंबर 2020जेजे 4902) और चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (नंबर 82202394) के युवा अनुसंधान फंडिंग से अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| 21G needle | |||
| 3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine | R&D Systems Inc | DY999 | |
| anti-CitH3 monoclonal antibody | laboratory self developed | ||
| anti-CitH3 polyclonal antibody | Abcam | ab5103 | |
| anti-rabbit secondary antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-035-003 | |
| C57BL/6 mice | Xiangya School of Medicine, Central South University | ||
| Cl-amidine | Sigma Aldrich | SML2250 | |
| depilatory cream | |||
| Dnase I | Sigma Aldrich | 11284932001 | |
| isoflurane | Sigma-Aldrich | 26675-46-7 | |
| ketoprofen | Sigma Aldrich | PHR1375 | |
| silk sutures (4-0 & 6-0) | |||
| surgical instruments | |||
| YW3-56 | GLPBIO | GC48263 |
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