Summary

משלוח תרופות מבוסס משאבה אוסמוטי למחקר רמיאלינציה In Vivo על מערכת העצבים המרכזית

Published: December 17, 2021
doi:

Summary

Demyelination מתרחשת במחלות מרובות של מערכת העצבים המרכזית. טכניקה אמינה של אספקת תרופות vivo נחוצה לבדיקות רמיאלין של תרופות. פרוטוקול זה מתאר שיטה מבוססת משאבה אוסמוטית המאפשרת אספקת תרופות לטווח ארוך ישירות לתוך parenchyma המוח ומשפר את הזמינות הביולוגית של התרופה, עם יישום רחב במחקר רמיאלינציה.

Abstract

Demyelination זוהה לא רק טרשת נפוצה (טרשת נפוצה), אלא גם מחלות אחרות של מערכת העצבים המרכזית כגון מחלת אלצהיימר ואוטיזם. כמו ראיות עולה כי remyelination יכול ביעילות לשפר את תסמיני המחלה, יש התמקדות גוברת בפיתוח תרופות כדי לקדם את תהליך התחדשות המיאלין. לכן, טכניקת אספקת תרופות הניתנת לבחירה ותוצאה אמינה באזור נדרשת כדי לבדוק את היעילות והספציפיות של תרופות אלה ב vivo. פרוטוקול זה מציג את שתל המשאבה האוסמוטי כגישה חדשה להעברת תרופות במודל העכבר demyelination המושרה lysolecithin. המשאבה האוסמוטית היא מכשיר מושתל קטן שיכול לעקוף את מחסום הדם – מוח (BBB) ולספק תרופות בהתמדה וישירות לאזורים ספציפיים של מוח העכבר. זה יכול גם לשפר ביעילות את הזמינות הביולוגית של תרופות כגון פפטידים וחלבונים עם זמן מחצית חיים קצר. לכן, שיטה זו היא בעלת ערך רב לתחום של מערכת העצבים המרכזית מיאלין התחדשות המחקר.

Introduction

המשאבה האוסמוטית היא מכשיר קטן ומושתל לשחרור פתרונות. זה יכול לשמש למסירה מערכתית כאשר מושתל תת עורית או בחלל הבטן. פני השטח של המשאבה האוסמוטית הם קרום חדיר למחצה, והצד הפנימי שלה הוא שכבה חדירה. המשאבה האוסמוטית פועלת באמצעות הפרש הלחץ האוסמוטי בין השכבה האוסמוטית לסביבת הרקמה שבה המשאבה מושתלת. האוסמולליות הגבוהה של השכבה האוסמוטית גורמת למים ברקמה לזרום לשכבה האוסמוטית דרך הממברנה החדירה למחצה על משטח המשאבה. השכבה האוסמוטית מרחיבה ודוחסת את המאגר הגמיש בתוך המשאבה, ובכך מוציאה את הפתרון מהמאגר הגמיש בקצב מסוים למשך זמן ארוך1. המשאבה כוללת שלושה נפחי מאגר שונים, 100 μL, 200 μL, ו 2 מ”ל, עם שיעורי המסירה שלהם משתנים מ 0.11 μL / h ל 10 μL / h. בהתאם לסוג המשאבה שנבחר, ההתקן יכול לפעול מיום אחד עד 6 שבועות2. בפרוטוקול זה, משאבה אוסמוטית 100 μL עם קצב העברה של 0.25 μL / h שיכול לפעול במשך 14 ימים משמש.

בשנות ה-70, המשאבה האוסמוטית שימשה במחקר מדעי המוח 3,4. לדוגמה, וויי ואח ‘ אימץ את גישת המשאבה האוסמוטית להזריק פפטידים אופיואידים לחדר במחקר של התמכרות לסמים3. לאחר שיפור מתמשך, המשאבה האוסמוטית שימשה כעת במחקר של משלוח מבוקר של אלפי תרופות, כולל פפטידים, גורמי גדילה, תרופות ממכרות, הורמונים, סטרואידים, נוגדנים, וכן הלאה. בנוסף, עם צנתרים מיוחדים (ערכות עירוי המוח) מחוברים, זה יכול לשמש עירוי ממוקד לרקמות או איברים ספציפיים, כולל חוט השדרה, המוח, הטחול, הכבד 5,6,7.

במחקר של רמיאלינציה, תרופות רבות הוכחו לקדם התחדשות מיאלין במבחנה, אבל רובם לא השיגו השפעות משמעותיות vivo, אולי בשל היעדר שיטת ניהול מתאימה. שיטות ניהול מסורתיות כגון הזרקה תוך-פריטונית, הזרקה תת עורית, וניהול תוך-גסטרי יש מגבלות הזמינות הביולוגית של התרופות. בנוסף, כמה תרופות יש חדירות מחסום דם – מוח לקוי, אשר מערער את הגישה שלהם parenchyma המוח. יחד, מגבלות אלה דורשות שיטת אספקה יעילה חדשנית. בשילוב עם ערכות עירוי המוח, משאבות אוסמוטיות יכולות לעקוף את מחסום הדם – מוח ולספק תרופות ישירות לקורפוס קאלוזום, אשר משפר ביעילות את הזמינות הביולוגית של תרופות, במיוחד עבור כמה תרופות פוליפפטיד וחלבון עם מחצית חיים קצרה. לכן, המשאבה האוסמוטית כטכניקת אספקת תרופות חדשה היא בעלת ערך רב לתחום של מערכת העצבים המרכזית מיאלין התחדשות המחקר. היישום של טכניקה זו יוצג בפירוט להלן.

Protocol

כל ההליכים בבעלי החיים נערכו תחת הנחיות ופרוטוקולים מוסדיים שאושרו על ידי ועדת הרווחה והאתיקה של בעלי החיים של האוניברסיטה הצבאית השלישית לרפואה. 1. הקמת מודל העכבר demyelination המושרה על ידי ליזולציתין הכן 1% lysolecithin (נקרא גם L-α-Lysophosphatidylcholine) פתרון עם PBS סטרילי. <li…

Representative Results

כדי לאמת את ההשפעה של המשאבה האוסמוטית במחקר התחדשות המיאלין, מודל demyelination המושרה lysolecithin נוצר בעכברים P56, ואחריו השתלה של משאבות אוסמוטיות המכילות UM206 (1 מ”ג ב 1.5 מ”ל 0.9% מלוחים), פפטיד עם מחצית חיים קצרה וחדירות BBB עניים שדווח לאחרונה כדי לקדם רמיאלינציה10 . 0.9% תמיסת מלח שימשה כבקרה….

Discussion

פרוטוקול זה מתאר את המשאבה האוסמוטית כטכניקת אספקת תרופות חדשנית למחקר התחדשות מיאלין, אשר יכול לספק תרופות ישירות לאתר הטיפול ולאפשר אספקת תרופות עקבית לתקופה ממושכת, יצירת ריכוז תרופות יציב בסביבה מיקרו של מערכת העצבים המרכזית בכל משך הניסוי. בהשוואה לשיטות אחרות להעברת תרופות, המשאבה…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC 32070964, 31871045) ל- J.N. ולקרן המחקר הבסיסית של שנזן (JCYJ20210324121214039) ל- Y.S.

Materials

Anesthesia Air Pump RWD R510-29 E05818-006
Brain Infusion kit 3 ALZET 0008851 1-3 mm
Carprofen Macklin C830557-1g 5 mg/kg every 24 h
Erythromycin eye ointment Along technology YCKJ-RJ-024780 Cover the surface of the eyeballs during anesthesia
Erythromycin ointment pythonbio RG180
Gas Evacuation Apparatus RWD R546W E05518-002
L-α-Lysophosphatidylcholine Sigma L0906 Dissolve at 1% with sterile PBS
Microliter Syringe Hamilton 65460-05 Syringe Series:1700, 10 µL, 33 gauge
Micro-smotic pump model 1002 ALZET 0004317 0.25 µL per hour, 14 days
PBS (pH = 7.3) ORIGENE ZLI-9061
Pentobarbital sodium Shanghai Civi CAS NO: 57-33-0 150-200 mg/kg intraperitoneal injection for euthanasia
Small Animal Anesthesia Machine RWD R520IE E05807-006 M
Stereotaxic Equipment RWD E06382
STERI 250 sterilizer Keller 31101 Rapid sterilization of surgical instruments
Surgical sutures Shanghai jinhuan F504 5-0
Syringe needle (1 mL) Shanghai KDL 6930197811018 26 gauge (0.45 mm x 16 mm)
Testing drug and solvent Experiment dependent N/A
ThermoStar Homeothermic Monitoring System RWD 69026 Maintain body temperature during anesthesia
Vetbond Tissue adhesive 3M 1469SB Secure the brain infusion cannula , Adhere the skin incision

References

  1. Theeuwes, F., Yum, S. I. Principles of the design and operation of generic osmotic pumps for the delivery of semisolid or liquid drug formulations. Annals of Biomedical Engineering. 4 (4), 343-353 (1976).
  2. Herrlich, S., Spieth, S., Messner, S., Zengerle, R. Osmotic micropumps for drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. 64 (14), 1617-1627 (2012).
  3. Wei, E., Loh, H. Physical dependence of opiate-like peptides. Science. 193 (4259), 1262-1263 (1976).
  4. Pettigrew, J. D., Kasamatsu, T. Local perfusion of noradrenaline maintains visual cortical plasticity. Nature. 271 (5647), 761-763 (1978).
  5. Wang, Y., et al. Reduced oligodendrocyte precursor cell impairs astrocytic development in early life stress. Advanced Science (Weinheim). 8 (16), 2101181 (2021).
  6. Tang, C., et al. Neural stem cells behave as a functional niche for the maturation of newborn neurons through the secretion of PTN. Neuron. 101 (1), 32-44 (2019).
  7. Watanabe, S., Komine, O., Endo, F., Wakasugi, K., Yamanaka, K. Intracerebroventricular administration of Cystatin C ameliorates disease in SOD1-linked amyotrophic lateral sclerosis mice. Journal of Neurochemistry. 145 (1), 80-89 (2018).
  8. DeVos, S. L., Miller, T. M. Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system. Journal of Visualized Experiments: JoVE. , e50326 (2013).
  9. Tang, C., Guo, W. Implantation of a mini-osmotic pump plus stereotactical injection of retrovirus to study newborn neuron development in adult mouse hippocampus. STAR Protocols. 2 (1), 100374 (2021).
  10. Niu, J., et al. Oligodendroglial ring finger protein Rnf43 is an essential injury-specific regulator of oligodendrocyte maturation. Neuron. 109 (19), 3104-3118 (2021).
  11. Breitschopf, H., Suchanek, G., Gould, R. M., Colman, D. R., Lassmann, H. In situ hybridization with digoxigenin-labeled probes: sensitive and reliable detection method applied to myelinating rat brain. Acta Neuropathologica. 84 (6), 581-587 (1992).
  12. Cree, B. A. C., et al. Clemastine rescues myelination defects and promotes functional recovery in hypoxic brain injury. Brain. 141 (1), 85-98 (2018).
  13. Eckenhoff, B., Yum, S. I. The osmotic pump: novel research tool for optimizing drug regimens. Biomaterials. 2 (2), 89-97 (1981).
  14. Thoenen, H., Sendtner, M. Neurotrophins: from enthusiastic expectations through sobering experiences to rational therapeutic approaches. Nature Neuroscience. 5, 1046-1050 (2002).
  15. Hagg, T. Intracerebral infusion of neurotrophic factors. Methods in Molecular Biology. 399, 167-180 (2007).
  16. Bittner, B., Thelly, T., Isel, H., Mountfield, R. J. The impact of co-solvents and the composition of experimental formulations on the pump rate of the ALZET osmotic pump. International Journal of Pharmaceutics. 205 (1-2), 195-198 (2000).
  17. Arnot, M. I., Bateson, A. N., Martin, I. L. Dimethyl sulfoxide/propylene glycol is a suitable solvent for the delivery of diazepam from osmotic minipumps. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 36 (1), 29-31 (1996).
  18. Gullapalli, R., et al. Development of ALZET osmotic pump compatible solvent compositions to solubilize poorly soluble compounds for preclinical studies. Drug Delivery. 19 (5), 239-246 (2012).
  19. White, J. D., Schwartz, M. W. Using osmotic minipumps for intracranial delivery of amino acids and peptides. Methods in Neurosciences. 21, 187-200 (1994).

Play Video

Citer Cet Article
Wang, X., Su, Y., Hu, X., Niu, J. Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelination Research on the Central Nervous System. J. Vis. Exp. (178), e63343, doi:10.3791/63343 (2021).

View Video