गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) संकल्प का आकलन करने के लिए चूहों में एक जीवित जिगर बायोप्सी प्रक्रिया का समावेश
Summary
नैदानिक सेटिंग्स में, एक जिगर बायोप्सी गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस के चरणों का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है (steatohepatitis, सूजन, hepatocyte गुब्बारों, और फाइब्रोसिस). यहां, हम चूहों में एक जीवित जिगर बायोप्सी वर्णन जो ऊतकीय विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है एक नैदानिक परीक्षणों के साथ और अधिक संरेखित तरीके से चिकित्सीय एजेंटों के आकलन को सक्षम करने के लिए ।
Abstract
नैदानिक परीक्षण गैर के उपचार के लिए चिकित्सा का आकलन-शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) एक आधार रेखा और अध्ययन के अंत जिगर बायोप्सी, और रोग अंतिमबिंदु में सुधार का आकलन शामिल, अक्सर प्रत्येक उपचार हाथ के एक प्रतिशत के रूप में परिलक्षित है कि सुधार, बिगड़ गया या अपरिवर्तित रहा । पारंपरिक पूर्व नैदानिक कृंतक अध्ययन के लिए ख्यात नैश उपचार अक्सर जिगर की बीमारी के स्तर को जानने के नहीं द्वारा सीमित कर रहे है/चिकित्सकीय हस्तक्षेप के शुरू में मौजूद नैश, बजाय आसानी से मापने योग्य अंतिमबिंदु पर उपचार समूहों randomizing के रूप में शरीर का वजन, चयापचय की स्थिति या इसी तरह । यहां, हम एक आहार में एक जिगर बायोप्सी तकनीक का वर्णन नैश माउस मॉडल, आधारभूत जिगर की बीमारी के आकलन के लिए आदेश में चूहों कि फाइब्रोसिस प्रदर्शन नहीं है और समान रूप से उपचार समूहों के बीच समान फाइब्रोसिस के साथ जानवरों को वितरित करने के लिए बाहर करने के लिए । इन स्तरों तो वीवो औषधीय प्रभाव में की एक सच्ची समझ के लिए टर्मिनल, बाद के हस्तक्षेप के स्तर की तुलना में किया जा सकता है और इस तरह और अधिक सही नैदानिक परीक्षण डिजाइन रणनीतियों को प्रतिबिंबित । माउस को ठीक से ऊपर और बाँझ शर्तों का उपयोग कर सर्जरी के लिए तैयार है । एक छोटा सा चीरा पेट के ऊपरी हिस्से में किया जाता है और जिगर के बाईं पार्श्व पालि उजागर होता है । जिगर की एक कील शल्य चिकित्सा से हटा दिया है, और एक समान-अवशोषण जिलेटिन का टुकड़ा आकार अपनी जगह में डाल दिया है किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए । माउस शल्य चिकित्सा से सिलाई है और बंद नत्थी और 1 दिन के भीतर सामांय करने के लिए वापस ठीक हो जाएगा । पूरी प्रक्रिया 5-10 मिनट प्रति माउस लेता है । यहां हम पूर्व अध्ययन बायोप्सी लाभ द्वारा इस प्रक्रिया की उपयोगिता उदाहरण के लिए ग्लूकागन के प्रभाव का आकलन पेप्टाइड की तरह-1 (जीएलपी-1) चूहों में नैश अंतिमबिंदु पर रिसेप्टर एगोनिस्ट liraglutide ।
Introduction
गैर शराबी स्टीटोहेपेटाइटिस (नैश) एक प्रगतिशील जिगर की बीमारी है, और nonalcoholic फैटी लीवर रोग (NAFLD), कि तेजी से मोटापे और टाइप 2 मधुमेह के साथ अपने सहयोग के कारण प्रचलित होता जा रहा है की एक अधिक गंभीर रूप है । वहां NAFLD के लिए कोई अनुमोदित उपचार/नैश, या बायोमार्कर को मंजूरी दी आसानी से रोग प्रगति का आकलन कर रहे हैं । नैश सूजन का आकलन करके histologically का निदान है, अतिरिक्त यकृत लिपिड (steatosis), हेपेटोसाइट गुब्बारों, और फाइब्रोसिस1,2,3,4। नैदानिक परीक्षणों में, इन अंतिमबिंदु एक जिगर नमूना बायोप्सी के माध्यम से एकत्र में अध्ययन करने से पहले मूल्यांकन कर रहे हैं, और एक निश्चित उपचार अवधि के बाद एक दूसरे जिगर बायोप्सी से. इस प्रकार, परीक्षण एजेंट की प्रभावशीलता पहले से पहचान के साथ विषयों में जिगर विकृति में परिवर्तन के माध्यम से मूल्यांकन किया जाता है/quantified (यानी, बायोप्सी-सिद्ध) नैश कि उपचार समूहों के लिए यादृच्छिक कर रहे हैं. ये एक ही ऊतकीय अंतिमबिंदु अक्सर पूर्व नैदानिक अध्ययन में संभावित नैश चिकित्सा विज्ञान का आकलन करने वाले रोडेंट मॉडल में उपयोग किया जाता है, लेकिन केवल euthanized चूहों से टर्मिनल के ऊतकों में और इस तरह आधार रेखा पर प्रभावकारिता की डिग्री की एक समझ के बिना और एक अक्षमता उपचार समूहों के बीच बेसलाइन रोग स्थिति में अंतर के लिए नियंत्रित करने के लिए ।
हालांकि nafld के साथ वयस्कों के 25% ऊंचा सीरम aminotransferase के स्तर के आधार पर नैश है माना जाता है, वहां कोई वैकल्पिक निश्चित तरीके है ऊतकीय सबूत4से अंय नैश की पुष्टि कर रहे हैं । इस तरह के रेडियोलॉजिकल तरीकों (अल्ट्रासाउंड, गणना टोमोग्राफी, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग) के रूप में नॉनइनवेसिव विधियों, यकृत steatosis का पता लगाने के लिए विकसित किया गया है, लेकिन उन तरीकों नैश निदान या फाइब्रोसिस की अवस्था का निर्धारण नहीं कर सकते । क्षणिक elastography जिगर कठोरता को मापने के लिए एक आशाजनक गैर इनवेसिव साधन प्रदान करता है । यह फिब्रोसिस चरणों फर्क में सटीक होना दिखाया गया है । हालांकि, सटीकता उच्च शरीर द्रव्यमान सूचकांक (बीएमआई) और वसा ऊतक के साथ कम हो जाती है । 5 यह समस्या का कारण है नाश के अधिकांश रोगियों मोटापे से ग्रस्त जा रहा है । इन दृष्टिकोणों की नैदानिक प्रासंगिकता के अलावा, इन पद्धतियों में से किसी को भी पूर्व नैदानिक अध्ययनों में उपयोग नहीं किया जाता है ।
इस पर काबू पाने के लिए, डॉ जोनाथन रोथ के अनुसंधान समूह amylin नैश (amln)6नैश,7,8के माउस मॉडल में एक जिगर बायोप्सी प्रक्रिया को लागू करने के लिए पहले थे । वे नैश रोग और चयापचय रोग के साथ संबंध की डिग्री के साथ बायोप्सी की भविष्यसूचक वैधता का वर्णन किया । यहां हम विस्तार से वर्णन NASH के AMLN मॉडल में जिगर बायोप्सी प्रक्रिया और एक चिकित्सीय सेटिंग में इसकी उपयोगिता, विशेष रूप से liraglutide की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए ।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां हम विस्तार से माउस जिगर बायोप्सी प्रक्रिया पहले clapper एट अल.10द्वारा वर्णित वर्णन है, और नैश के एक माउस मॉडल में अपनी उपयोगिता उदाहरण के लिए, पिछले6रिपोर्टों के समान,9। जिगर बायोप्सी प्रक्रिया नैश phenotype पूर्व और बाद उपचार का आकलन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण है, एक तरह से नैदानिक चिकित्सीय परीक्षणों में प्रदर्शन के समान. बायोप्सी प्रत्येक विषय के लिए प्रत्यक्ष तुलना के लिए अनुमति देता है, यानी एक ही चूहों दोनों समय अंक के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हम अपनी स्थानांतरीय क्षमता का भी प्रदर्शन करते हैं । बायोप्सी में एक नैदानिक परीक्षण में-सिद्ध नैश विषयों, liraglutide एक ३९% प्रतिक्रिया दर (सुधार के साथ रोगियों) NAS में हासिल, जबकि हमारे अध्ययन में हम सुधार nas के लिए एक ६६% उत्तरदाता दर मनाया । इसके अलावा, 26% रोगियों के साथ फाइब्रोसिस स्कोर में सुधार हुआ था 9% बिगड़ती, बनाम 14% और ३६% placebo बांह में, क्रमशः11। हमारे अध्ययन में, हम लिरगलुटाइड उपचार के साथ एक 17% सुधार दर मनाया । इन तुलना आधारभूत जिगर बायोप्सी की शक्ति पर प्रकाश डाला और संभावित शोधों समझ की पुष्टि, चिकित्सीय के इस वर्ग के लिए.
यह फसल के लिए महत्वपूर्ण है बायोप्सी प्रक्रिया के दौरान जिगर ऊतक का एक बड़ा टुकड़ा ठीक से ऊतकीय सुविधाओं का विश्लेषण करने के लिए, लेकिन यह भी जिगर के समारोह समझौता करने के लिए एक टुकड़ा के बहुत बड़े नहीं । हम इस सर्जरी के साथ एक शूंय मृत्यु दर मनाया, और पशुओं को पूरी तरह से सामांय खाने के व्यवहार की बहाली के साथ 1 दिन के भीतर बरामद दिखाई दिया । इस प्रकार, बायोप्सी और हस्तक्षेप अध्ययन की दीक्षा के बीच समय पशु वसूली द्वारा सीमित नहीं है, लेकिन नमूना प्रसंस्करण, विश्लेषण, और बाद randomization के लिए लिया समय से संभावना है ।
हस्तक्षेप से पहले फाइब्रोसिस की पुष्टि की एक विधि के रूप में जिगर बायोप्सी प्रक्रिया का उपयोग, हमारे अध्ययन में परिवर्तनशीलता को कम करने में मदद की, हमें चूहों कि पूरी तरह से अल्ली नैश का एक परिणाम के रूप में यकृत फाइब्रोसिस के कुछ डिग्री का विकास नहीं किया बाहर करने के लिए अनुमति-आहार inducing । इसके अलावा, यह हमारी क्षमता को बेहतर संभव नैश के प्रभाव को समझने के हस्तक्षेप में सुधार, के रूप में केवल एक टर्मिनल जिगर नमूना और नैश स्कोर होने का विरोध किया । जब तक नए गैर इनवेसिव तकनीकों और पता लगाया और व्यापक रूप से स्वीकार कर रहे हैं, जिगर बायोप्सी NASH निर्धारित करने के लिए ही सिद्ध तरीका है.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों आभार ऊतक प्रसंस्करण और immunohistochemistry में विशेषज्ञता के लिए सैली ली और होली Koelkebeck की सहायता स्वीकार करते हैं । लेखकों को भी धंयवाद डोना Goldsteen और प्रयोगशाला पशु संसाधन स्टाफ (MedImmune, गैथर्सबर्ग, एमडी) तकनीकी प्रक्रियाओं और पशुपालन और देखभाल के साथ उनकी सहायता के लिए ।
Materials
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| 5-0 suture | Ethicon | J834G | |
| 7mm Wound Clips | Reflex | 203-1000 | |
| Absorbable gelatin sponge (GelFoam) | Pfizer | 09-0353-01 | Compressed, Any Size |
| Alcohol Prep Pad | VWR | 75856-902 | |
| Animal Clippers | Oster | 78005010002 | Size 40 Blade |
| Artificial Tears | Henry Schein | 048272 | Tube |
| Buprenorphine (Buprenex) | Reckitt Benckiser | NDC 12496-0757-5 | |
| Iodine Prep Pads | Nice Pak Products | C12400 | |
| Sterile Drapes | Stoelting | 50981 | |
| Surgical Gloves | Medline | 54720 |
References
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