무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의
Summary
간 생 검 임상 설정에서 무알코올 steatohepatitis (steatosis, 염증, 열기구, hepatocyte 및 섬유 증)의 단계를 평가 하는 데 사용 됩니다. 여기, 우리는 평가 방식으로 더 많은 치료제의 임상 시험 정렬 있도록 조직학 분석을 위해 사용 될 수 있는 쥐에 지속 가능 간 생 검을 보여 줍니다.
Abstract
무알코올 steatohepatitis (NASH)의 치료에 대 한 치료를 평가 하는 임상 시험 관련 기준 및 연구 간 생 검, 그리고 질병 끝점, 종종 개선, 각 치료 팔의 %로 반영에 있는 개선의 평가의 끝 악화 또는 변하지 않게 남아 있었다. 상 상속 내 쉬 요법에 대 한 전통적인 전 임상 설치류 연구 종종 모르고 간 질환/내 쉬 존재 같이 쉽게 측정 가능한 끝점에 치료 그룹 randomizing 대신 치료 개입의 시작의 수준에 의해 제한 됩니다. 몸 무게, 신진 대사 상태 또는 유사한. 여기, 다이어트 유발 된 내 쉬 마우스 모델에서 섬유 증을 전시 하지 않는 마우스를 제외 처리 그룹 사이 유사한 섬유 증과 동물 동등 하 게 배포 하 고 초기 간 질환의 평가 대 한 간 생 검 기술을 설명 합니다. 이 수준은 다음 vivo에서 약리 효과 대 한 진정한 이해에 대 한 터미널, 사후 개입 수준 비교 될 수 있다 따라서 더 정확 하 게 임상 시험 디자인 전략을 반영 하 고. 마우스는 제대로 취 하 고 살 균 조건을 사용 하 여 수술에 대 한 준비. 작은 절 개는 복 부 상단에 고 간 왼쪽된 측면 엽 노출. 간의 수술로 제거 하 고 비슷한 크기의 조각을 흡수 젤라틴의 어떤 출혈을 멈추게 하는 그 자리에 들어가게 된다. 마우스는 수술 봉합 하 고 붙인 폐쇄 하 고 1 일 이내 다시 정상으로 회복 됩니다. 전체 프로세스는 마우스 마다 5-10 분 걸립니다. 여기 우리는 글 루카 곤 같은 펩 티 드-1 (GLP-1) 수용 체 주 작동 근 liraglutide 쥐에 내 쉬 끝점에의 영향을 평가 하기 위해 사전 연구 생을 활용 하 여이 절차의 유틸리티를 예증.
Introduction
무알코올 steatohepatitis (NASH) 진보적인 간 질병, 그리고 무 알콜 지방 간 질병 (NAFLD), 비만과 2 형 당뇨병의 그것의 협회 때문에 점점 유행 되 고 있는의 더 심각한 형태 이다. NAFLD/NASH, 또는 승인 된 생체 쉽게 질병의 진행을 평가에 대 한 승인된 없는 요법이 있다. 내 쉬 진단 조직학 염증, 평가 하 여 간 지질 (steatosis), 열기구, hepatocyte 및 섬유 증1,2,,34를 초과. 임상 시험에서 이러한 끝점 간 샘플 수집, 생 검을 통해 두 번째 간 생 검에서 일정 치료 기간 후에 연구 전에 평가 됩니다. 따라서, 테스트 에이전트의 효율성 평가 과목에 간 병리학에서 변화를 통해 이전 식별 계량 (즉, 생 검-입증 된) 치료 그룹에 무작위로 내 쉬. 이 같은 더 끝점은 잠재적인 내 쉬 치료제 전 임상 연구, 하지만 안락사 쥐에서 그리고 이렇게 효능 기준선 및 무 능력의 정도 대 한 이해 없이 터미널 조직에만 평가 하는 설치류 모델에서 자주 사용 제어 하려면 초기 질병 상태 치료 그룹 간의 차이 대 한.
NAFLD와 성인의 25% 상승된 한 혈 청 aminotransferase 레벨에 따라 내 쉬를 추정은, 비록 조직학 증거4이외의 내 쉬를 확인 없습니다 대체 확실 한 방법이 있다. 비 침 투 적인 방법, 방사선 modalities (초음파, 컴퓨터 단층 촬영 및 자기 공명 영상) 등 간 steatosis 감지 하도록 개발 되었습니다 하지만 그 방법을 내 쉬를 진단 하거나 섬유 증의 결정 수 없습니다. 일시적인 elastography는 유망한 비-침략 적 형식 간 강성을 측정 하기 위한 제공 합니다. 그것은 차별화 섬유 증 단계에서 정확 하 게 표시 되었습니다. 그러나, 정확도 더 높은 몸 질량 색인 (BMI)와 지방 조직 감소합니다. 5 이것은 NASH 환자 비만의 대다수 때문에 문제 이다. 이러한 방법의 임상 관련성 넘어 이러한 형식은 전 임상 연구에 활용 됩니다.
이 극복 하기 위해 닥터 조나단 로스의 연구 그룹 내 쉬6,,78의 Amylin 내 쉬 (AMLN) 마우스 모델에서 간 생 검 절차를 구현 하는 첫번째 이었다. 그들은 내 쉬 질병의 학위와 함께 생 검 및 대사 질환의 예측 타당성을 설명합니다. 내 쉬의 AMLN 모델에서 간 생 검 절차 및 치료 설정에서 특히 liraglutide의 효능을 평가 하기 위해 그 유틸리티 여기 우리가 자세히 설명 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기 우리 마우스 간 생 검 절차 처음 추 외10, 설명 하 고 내 쉬, 이전 보고서6,9와 비슷한의 마우스 모델에서 자사의 유틸리티를 예증 하는 세부 사항에 설명 합니다. 간 생 검 절차는 내 쉬 형 사전 및 임상 치료에서 비슷한 방식으로 후 처리를 평가 하기 위한 유용한 도구입니다. 생 검 수 있습니다 직접 비교를 위해 각 주제에 대 한 즉, 두 시간 포인트 같은 마우스를 사용할 수 있습니다. 우리는 또한 변환의 가능성을 보여 줍니다. 생 검에서 입증 된 내 쉬 과목의 임상 실험에서 liraglutide 우리의 연구에서 우리는 향상 된 NAS에 대 한 66% 응답 속도 관찰 하는 반면 NAS에 39% 응답 속도 개선 (환자)을 elicited. 또한, 환자의 26% 악화, 대 14%와 36% 위약 팔에 각각119% 향상 된 섬유 증 점수를 했다. 우리의 연구에서 liraglutide 치료 17% 향상 속도 관찰합니다. 이러한 비교 기준 간 생 검의 힘을 강조 하 고 치료의이 클래스에 대 한 잠재적인 변환 이해를 적어도 확인 합니다.
그것은 제대로 조직학 특징을 분석 하는 생 검 절차 중 간 조직의 충분히 큰 조각 수확 중요 하지만 또한 너무 큰 간 간 기능 손상에 한 조각의. 이 수술 사망률 0 관찰 그리고 정상적인 식사 행동의 재개와 함께 1 일 이내 동물 완벽 하 게 복구 된. 따라서, 생 검 및 개입 연구의 시작 사이의 시간 동물 복구 하지 제한 이지만 샘플 처리, 분석, 및 후속 랜덤 시간에 의해 가능성이.
개입 마우스를 완벽 하 게 유도 하는 AMLN 내 쉬 다이어트의 결과로 간 섬유 증의 어떤 정도 개발 하지 않았다를 제외를 우리의 연구에 있는 가변성을 감소 도움이 되기 전에 섬유 증의 확인의 방법으로 간 생 검 절차를 활용 합니다. 또한, 터미널 간 샘플 및 내 쉬 점수 반대만 가능한 내 쉬 개선 개입의 영향을 이해 하는 우리의 기능 향상. 때까지 새 비-침략 적 기술을 더 탐험 널리 허용, 간 생 검은 유일한 내 쉬를 결정 하는 방법 입증 된.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 기꺼이 조직 처리 및 immunohistochemistry 전문성 샐리 리와 홀리 Koelkebeck의 도움을 인정합니다. 저자는 또한 기술 절차 및 축산 및 그들의 지원에 대 한도 나 Goldsteen 및 실험실 동물 자원 직원 (MedImmune, 버스, 메릴랜드) 감사합니다.
Materials
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| 5-0 suture | Ethicon | J834G | |
| 7mm Wound Clips | Reflex | 203-1000 | |
| Absorbable gelatin sponge (GelFoam) | Pfizer | 09-0353-01 | Compressed, Any Size |
| Alcohol Prep Pad | VWR | 75856-902 | |
| Animal Clippers | Oster | 78005010002 | Size 40 Blade |
| Artificial Tears | Henry Schein | 048272 | Tube |
| Buprenorphine (Buprenex) | Reckitt Benckiser | NDC 12496-0757-5 | |
| Iodine Prep Pads | Nice Pak Products | C12400 | |
| Sterile Drapes | Stoelting | 50981 | |
| Surgical Gloves | Medline | 54720 |
References
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