JoVE Journal > Cancer Research
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Résultats
Discussion
Divulgations
Acknowledgements
Materials
References
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Recherche en cancérologie

נוהלי עבודה של Electrochemotherapy לטיפול גידול בכלבים וחתולים

Published: October 24, 2016
doi:
10.3791/54760
, , , , ,
1Clinic for Surgery and Small Animals, Veterinary Faculty,University of Ljubljana, 2Department of Experimental Oncology,Institute of Oncology Ljubljana, 3Faculty of Health Sciences,University of Primorska, 4IPBS (Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale),CNRS, 5IPBS (Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale),Université de Toulouse

Summary

Electrochemotherapy is the local treatment of solid tumors. The main mechanism is electroporation-mediated permeabilization of the tumor cells’ membrane which enables increased internalization of cytostatics like bleomycin and cisplatin. Thus, antitumor effectiveness is potentiated at the site of the application of electric pulses to the tumors.

Abstract

Electrochemotherapy (ECT) היא גישה מקומית אשר משמש לטיפול בגידולים מוצקים של histologies שונים. מנגנון זה מבוסס בעיקרו על permeabilization קרום התא באמצעות "electroporation". כדי להשיג את "electroporation" של תאים, פולסים חשמליים מופקים על ידי גנרטור ונמסרו רקמת היעד על ידי שימוש באלקטרודות. Electroporation היא שיטה גופנית אשר משמש להציג מולקולות, כמו סמים cytostatic, לתוך התאים כי לא יכולתי לעבור את קרום התא בכוחות עצמם. בשנת electrochemotherapy, כרגע, ציספלטין ו בליאומיצין משמשים קליני. האפקטיביות antitumor Electrochemotherapy הן גבוהות, למשל עד 100% תגובה מלאה של תא פיטום כלבי גידולים קטנים מ -2 סנטימטרים 3 הושגו. בנוסף, electrochemotherapy יכול לשמש לטיפול בגידולים שמישים. אחד המאפיינים החשובים של electrochemotherapy הוא שזה יכול להיות יעיל כטיפול חד פעמירק. עם זאת, במקרה של כישלון או תגובת הגידול חלקית זה ניתן לחזור מספר פעמים עם יעילות שווה או משופרים. Electrochemotherapy הוא כבר טיפול הסטנדרטי בסרטן עורית עורית histologies שונים באונקולוגיה אדם ולשימוש וטרינרי. יתר על כן, מספר מחקרים קליניים ניצול electrochemotherapy עבור גידולים עמוקים הם מתמשכים.

Introduction

ECT היא טכניקה פולשני מקומית לטיפול בגידולים של histologies השונה. תוצאות אבלציה מן להרוג תאים בהשפעת הסם, שהוא תוצאה של הצטברות התרופה מוגברת בתאים עקב חדירות קרום התא שהשתנה המושרה על ידי משלוח ישיר של פולסים חשמליים על העור סביב הגידול לאחר ההזרקה intratumoral או תוך ורידי של התרופה. המנגנון העיקרי של ECT הוא לשפר את היעילות של תרופות cytostatic ידי הצטברות תרופה תאית מוגברת, על ידי electropermeabilization קרום תא (electroporation) 1,2. Electroporation גורמת ספיגת תרופה מוגברת של שני cytostatics: בליאומיצין ו- cisplatin, שהן תרופות הידרופיליות עם חדירות הממברנה עניות. בשל הרעילות של בליאומיצין ו- cisplatin הגוברת סביב האתר של יישום של אלקטרואימפולסי, מינוני תרופות נמוכים נדרשים עבור יעילות antitumor טובה וכתוצאה מכך תופעות לוואי מערכתיות אין או מינימאלי של התרופות הן observed 3. מאפיין נוסף של ECT היא תופעת הגידול antivascular שתוצאתה ראשית במנעול וסקולרית, כלומר., ירידה בזרימת הדם בתוך הגידול, וכתוצאה מכך השמירה של cytostatics בתוכו ושנית בתוך כלי הדם לשבש פעולה, כלומר., הרג ישיר של תאי אנדותל של כלי דם קטנים הגורם למות תאים סרטני משתיים 4-6. המנגנון השלישי של האפקטיביות antitumor ECT הוא ההפעלה של מערכת החיסון כמו ECT מעורר תגובה חיסונית על ידי אנטיגן גידול משיל בסביבת הגידול. המעורבות של מערכת החיסון היא קריטית למיגור המוחלט של הגידול 7.

ECT הוכיח פוטנציאל גדול באונקולוגיה אנושי, שבו ECT משמש כבר כטיפול סטנדרטי בסרטן עורית תת עורית כפי שהוא מציג עד 80% של תגובות אובייקטיביות 3. בנוסף, ECT משמש בכמה מחקרים קליניים בטיפול גרורות גידול במוח <sעד> 8, עצם 9 ו -10 כבד. מחקרים קליניים באונקולוגיה וטרינרים כבר הוכיחו כי תוצאות הטיפול בנזעי חשמל של עד 80% לטווח ארוכי תגובות מטרה בטיפול בגידולים עורית תת עורית בכלבים 11, 12, 13 חתולים וסוסים 14. האפקטיביות antitumor תלויות בגודל גידול גידולים קטנים מ -2 להגיב סנטימטר 3 טוב יותר מאשר גידולים גדולים 15.

כמו כן, במחקר שהשווה ניתוח עם ECT בטיפול בגידולי תא פיטום בכלבים הראה כי טיפול ב- ECT הביא 70% תגובה מלאה תוך ניתוח הביא 50% תגובה מלאה 11 הוכחה כי ECT הוא טיפול שווה ניתוח. בנוסף, ECT מייצג שיטה חלופית לטיפול בגידולים מוצקים לטיפול כירורגי, במיוחד במקרים שבהם הבעלים לא מסכימים לניתוח או אם שהגידולים קשים בלו עם שולים ברורים בעיקר בשל שלהםמיקום (למשל, חדירה כלי מרכזי, גידולים של הראש או הרגל, ב וכו 'באזור פי הטבעת). מטרת מאמר זה היא להגדיר את תפיסת ההפעלה של הוראות לתת ECT לשימוש ציספלטין ו בליאומיצין בשילוב עם יישום של פולסים חשמליים על מנת בבטחה כראוי לטיפול בגידולים עורית תת עורית בכלבים וחתולים.

Protocol

פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה של משרד החקלאות, ייעור מזון ועוקב להנחיותיו. הפרוטוקול קיבל תוקף על יותר מ -80 כלבים ו -20 חתולים. הערה: טיפול ECT מורכב של המינהל ציספלטין או בליאומיצין וחשיפה של גושים סרטניים פולסים חשמליים. 1. בחירת חולים הערה: בחירת חולים מאפשרת למטפל לקבוע אם החולה הוא מתאים או לא ליהנות מיחס זה. להעריך את ההיסטוריה של המטופל (נתונים כלליים על גיל, גזע, מין ונוכחות של כל מחלות במקביל, סוג הגידול, האבולוציה של הגידול עם הזמן, טיפולים קודמים ותוצאותיו, הישנות ומהירות להישנות, הציפיות של הבעלים על הַצלָחָה של הטיפול). לבצע בדיקה גופנית של החולה להעריך את הגידול בפירוט כדי מ 'האייק אבחנה מבדלת קלינית האפשר ולבצע לשאוב מחט דקה להערכת ציטולוגית ביופסיה לרקמות אפשרית להערכה היסטולוגיה כדי לקבוע את אזור הטיפול: אם גידול פולשני פוטנציאל מוצג לטפל שולים הרחבים (לקבל את ההחלטה על הגודל שולי מטופלים על פי המלצות לכל טיפול אחר עבור אותו סוג של גידול, למשל, גידול תא פיטום 2 יח ≤ 1 ס"מ, שולי ס"מ 1 ומחייב; r – רדיוס). להעריך את המספר והגודל של הגושים כדי להכין גישה טיפולית. בדיקה כללית ליישם בחינה כוללת מלאה על מנת להפוך staging של המחלה ולבדוק: אם אין מחלה במקביל אחרת, העשויות מונע את הטיפול, אם לחולה יש היסטוריה של כל זיהום כרוני (על פי אפידמיולוגיה באזור מסוים) או חיסונית בתיווך מחלה אשר יכול לשנות המטולוגיות או coagulatשינויי יון (לבצע את הבדיקות הספציפיות), אם החיה הוא מסוגל לעמוד בפני שורה של תכשירי הרגעה עמוקים ו / או הרדמה כללית, אם לחולה יש רגישות ציספלטין (מינון סטנדרטי הוא 60-70 מ"ג / מ 2 שטח פני גוף / 21 ד) או בליאומיצין או כבר קיבלה מינון מצטבר של בליאומיצין העולה 400.000 IU / m 2. השתמש בטכניקות הדמיה לאבחון (רדיוגרפיה בדיקת החזה ואולטרסאונד של הבטן) על מנת לבדוק כל גרורות אפשריות בהתאם לסוג הגידול. 2. ניתוח מעבדה בדיקות דם בצע המטולוגיה להשלים מנתח עם פנל הביוכימיה של חנקן אוריאת בדם (BUN), קריאטינין, אלנין-aminotransferase (ALT), phosphatase אלקליין (AF) וסידן להוציא מחלות מתקדמות כרוניות כליות כבדות ותסמונות paraneoplastic השכיחות ביותר אפשריות על מנת לקבוע השלב הקליני אשר עשוי להיות להם EFfect על הפרוגנוזה. האם ניתוח דם ספציפי נוסף: אם המטופל מקבל תרופה כלשהי אשר עלול לשנות שינויים ביכולת הקרישה, לבדוק את פרופיל קרישה. אם באמצעות טיפול פולשני (אלקטרודות מחט), לבדוק את מספר הטסיות; במספר טסיות הדם צריך להיות> 100 או במקרה זה <100, פרופיל הקרישה (PT, aptt, פיברינוגן, D-dimer) צריך להיות נורמלי. במקרים ספציפיים על פי מחלה ממארת ואת המצב הקליני של החולה לבדוק את החלבונים הכולל, אלבומין, phosphors, נתרן (Na), אשלגן (K), כלוריד (Cl) וריכוז lipase. גידול (ים) ניתוח היסטולוגית ניתוח היסטולוגיה אינו נחוץ אם האבחנה ציטולוגיה בוצע בעבר. במקרה של סוגי גידולים מסוימים שבהם כיתה היסטולוגית הוא גורם פרוגנוסטי חיוני (למשל, גידולים תא פיטום) לבצע STA hematoxylin ו eosinining 16. הערה: ביופסיה (incisional או "אגרוף") יכול להתבצע לפני ECT באותו ביקור. בכל מקרה, זה בקליניקה טובה כדי לאבחן את סוג הגידול. הערה: לאחר המקרה מוערך מלא דיון ובירור מעמיק עם הבעלים של בעל החיים הם זקוק. תסביר את הבעלים לגבי ECT הוא ומה אי-אפשר לצפות ECT מבחינת תוצאות קליניות. דונו עם הבעלים במהלך הטיפול: מספר מפגשים ECT בהרדמה כללית או סדציה עמוקה, משך הזמן הכולל של הטיפול, עלות הטיפול, האפשרויות של הישנות. לקבל הסכמה בכתב של הבעלים במקרה של הכללת המטופל תוך ניסוי קליני של ECT, אם החולה אינו זכאי למעשה. בחירת 3. טיפול לערוץ הערה: לקבלת ECT בכלבים להשתמש ציספלטין ו בליאומיצין. לקבלת ECT בחתולים להשתמש בליאומיצין בלבד, כמו ציספלטין הוא התווית חתולים. <li> פנק כל גידול בנפרד. לקבוע את המיקום והגודל של כל גולה ומספר גושים להתוות את פרוטוקול הטיפול. חשב את נפח של גושים סרטניים באמצעות הנוסחה V = ab²π / 6 ( "a" הוא בקוטר גדול יותר של גולה הגידול "b" בקוטר של גולה הגידול בניצב "a") או V = abcπ / 6 ( " a "," b "ו-" c "הם שלושה קטרים ​​בניצב של גולת הגידול). 4. בחירה לערוץ הפעלה מבחר אלקטרודות הערה: חשוב לבחור את סוג אלקטרודה האופטימלי כמו תצורת האלקטרודה משפיעה על חלוקת השדה החשמלית בתוך הרקמה. שני סוגים של האלקטרודה משמשים: אלקטרודות צלחת מחט. אלקטרודות פלייט יש צלחות נירוסטה מקבילות: המרחק הפנימי בין האלקטרודות תלוי בגודל של הגידול ואת היכולת של הגנרטור של פולסים חשמליים. בדרך כלל את המרחק להיותtween האלקטרודות הוא 6-8 מ"מ. אלקטרודות מחט ניתן מסודרים בשורות (מערך מקביל) או בגיאומטריה משושה. האלקטרודה המשושה יש מחט מרכזי 6 מחטים במערך מעגלי. הפולסים מוחלים בין האלקטרודות במערך מעגלי בינם לבין עצמם ובינם לבין מרכזי אחד. הפולסים מוחלים בשני הכיוונים בין כל זוג אלקטרודות. בחר את סוג אלקטרודה לפי עומק של גולה הגידול ולספק electroporation המתאים כולו הרצוי האזור המטופל. בחר את האלקטרודות על פי רקמת היעד המסוימת. באופן כללי, שני סוגי אלקטרודות ניתן להשתמש לטיפול. בחירה והכנה של ציספלטין או בליאומיצין הערה: ECT מורכב הממשל intratumoral של ציספלטין או בליאומיצין או עירוי לוריד של בליאומיצין וחשיפה של גושים סרטניים פולסים חשמליים. בחר cytostatic המתאים ואת תוואי הממשל שלה. ממיסים CIsplatin (cis-diamminedichloroplatinum II), בין אם התקבל כאבקה, במים מזוקקים בריכוז של 1 מ"ג / מ"ל ​​(אחרת pharmaceutically פתרונות מוכנים יוכל לשמש). תן ציספלטין intratumorally. ממיסים בליאומיצין בתוך תמיסת מלח פיזיולוגית בריכוז של 3 מ"ג / מ"ל ​​ולתת intratumorally או לווריד. הַרדָמָה הערה: בהתאם לערוץ ההפעלה (טבלה 1) סדציה עמוקה או הרדמה כללית ניתן להשתמש. להעריך את החולה על פי האגודה האמריקאית של הרופאים המרדימים '(ASA) סיווג מצבו הגופני בהתאם לסוג הגידול בגלל תסמונות paraneoplastic אפשרי. סדציה עמוקה השתמש medetomidine (0.08 מ"ג / ק"ג) או medetomidine שילוב כפול (0.025 מ"ג / ק"ג) עם tartrate butorphanol (0.1 מ"ג / ק"ג) בכלבים או בצע נהלים קבועים להרגעה עמוקה בבית החולים הספציפי. הרדמה כללית <li> Premedicate עם acepromazine (0.02 מ"ג / ק"ג) ו מתדון (2 מ"ג / ק"ג). שלושים דקות לאחר מכן להשרות הרדמה כללית עם thiopental (5 מ"ג / ק"ג) או propofol (1 מ"ג / ק"ג). מניחים הטובוס ולשמור הרדמה עם isoflurane חמצן נמסר באמצעות במעגל הרדמה T-piece. במהלך הרדמה להשתמש הטיפול תמיכה נוזל עם הפתרון של הרטמן בשיעור של 10 מ"ל / ק"ג / שעה ו שיכוך כאבים עם מנה אחת של תרופה analgetic שאינם סטרואידים (למשל, carprofen 2-4 מ"ג / ק"ג). השתמש עין משחה למניעת יובש לאחר הרדמה. לאחר הטיפול, לפקח על החולה עד להכרתו מספיק כדי שכיבה sternal. שמור המטופל במרפאת במשך כ 2 עד 4 שעות. הערה: נהלים קבועים עבור הרדמה כללית בבית החולים הספציפיים יכולה להיות גם אחריו. סביבת פעולה הערה: הפעלת אדם מאומנת מפעילי ECT (DVM), מרדימים ועוזרים. <li> השתמש בכל חדר אמבולנס כאשר ECT תחת סדציה עמוקה מבוצע או כל חדר כירורגי שבו הרדמה כללית מותר. עבור הרגעה ו / או שימוש בהרדמה כללי כל הציוד הנדרש על פי נהלי הרדמה. עבור הליך ECT ויראה את כל החומרים הדרושים ברשימת החומרים. הגנת מפעיל ואנשים שמסביב הערה: חשיפת אגל של העור לסמי antineoplastic לעתים נדירות גורמת לבעיות חריפות. ציספלטין ו בליאומיצין אינם נספגים דרך העור ללא פגע. ציספלטין עלול לגרום לגירוי בלבד. דליפת ציספלטין ו בליאומיצין יכולה להתרחש כאשר הזרקת גושים או גידולי משרד. במקרה של פציעת דקירת מחט, לשטוף עם שפע של מים ולטפל הפצע על פי הפרקטיקה הרפואית הסטנדרטית. גן המפעיל ועוזרים שמסביב עם מסכות וכפפות. במקרה של חשיפה העור ציספלטין או פתרון בליאומיצין, יש לשטוף אותו מיד בשפע עם מים. </li> הגדרת אמצעי בטיחות ביולוגית על פי תכנית ביטוח איכות עולה בקנה אחד עם תקנות מקומיות על שימוש תרופה נגד הסרטן, אם בכלל. גנרטורים של פולסים חשמליים הערה: יישומים של פולסים חשמליים יכול להתבצע עם גנרטור של פולסים חשמליים. בדרך כלל, המנגנון הוא מחולל דופק מרובע גל עם תוכנה משולבת וממשק מסך מגע כדי לבחור פולסים חשמליים תוכננו מראש. הוא מצויד עם בעל אלקטרודה המוחזק ביד עם כפתור הפעלת דופק מצורף גנרטור ידי כבל. המשלוח של פולסים חשמליים יכול להיות נשלט על ידי מתג רגל. מחולל של פולסים חשמליים צריכים לעמוד בסטנדרטים של האיחוד האירופי: 2006/95 / CE מ 12/12/2006 בדבר חומר אלקטרוני המשמש במסגרת מתח מסוים, 2004/108 / CE מ 2004/12/15 בדבר תאימות אלקטרומגנטית, צריך להיות תואם עם התקנות של ה- FDA. נוהל של יישום של פולסים חשמליים הערה: Thיישום הדואר של פולסים חשמליים כדלקמן הממשל intratumoral של ציספלטין או בליאומיצין, או עירוי לוריד של בליאומיצין. כאשר מתן intratumorally cytostatic יש להחיל לאט כדי למנוע דליפה. לקבלת לווריד cytostatics הממשל צריך להיות מיושם ב בולוס שנמשך כ -30 שניות. ג'ל על בסיס מים משמש כדי להשיג קשר טוב בין העור לבין האלקטרודות, או צלחת או מחט, ועל מנת להגיע הפצת שדה חשמלית הטרוגנית פחות. המוליכות של ג'ל צריכות להיות בין 0.5 עד 1 S / M 17,18. מוליכות החשמלית של ג'ל המשמש היו 0.5 S / M. האלקטרודות הצלחת צריכה להיות ממוקמת בצורה כזו שהגידול הקיף ביניהם. יתר על כן, כדי להשיג חלוקה טובה יותר של השדה החשמלי היישום של פולסים חשמליים צריכה להתבצע פעמים בכיוון מאונך. אם הגידול גדול יותר מאשר המרחק בין האלקטרודות, היישום של אלקטרודות צריך לככבt מהשוליים של הגידול (כולל בטיחות מרווח) והתקדמות לכיוון המרכז של הגידול. במקרה של אלקטרודות מחט, יש להקפיד כי כל המחטים מוחדרות לתוך הרקמה כדי להשיג את החלוקה המתאימה של השדה החשמלי. היישום של ג'ל אינו נחוץ. אחרת, ההליך הוא זהה במקרה של אלקטרודות צלחת. את שער העור באזור של יישום של פולסים חשמליים נהל ציספלטין או בליאומיצין. אם cytostatic ניתנת בהזרקה לווריד לחכות 8 דקות ואת מרווח הזמן למסירה פולסים חשמליים הוא 20 דקות. אם cytostatic מנוהל intratumorally להתחיל עם יישום של פולסים חשמליים מיד (בתוך 1 דקות לאחר ההזרקה). לפני היישום של פולסים חשמליים להחיל ג'ל על בסיס מים על העור המקולף. עבור אלקטרודות צלחת להשתמש בפרמטרים דופקים הבאים: משך דופק 100 μsec, משרעת אלקטרודה מרחק יחס 1,300 V / ס"מ, הרץ תדירות 1 או 5 kHz. לספק כל ריצה של 8 פולסים חשמליים חד קוטבי בשתי רכבות של ארבע פעימות, עם מרווח שניות 1, בשני כיוונים ניצבים. עבור אלקטרודות מחט עם שורות להשתמש בפרמטרים דופקים: דופק משך 100 μsec, משרעת אלקטרודה יחס מרחק 1,000 V / סנטימטר, תדירות 1 או 5 kHz. כל סיבוב של פולסים חד קוטביים חשמליים מורכב משמונה פולסים. עבור אלקטרודות מחט, לארגן בתוך פרמטרי תצורה ושימוש דופק משושה: משך דופק 100 μsec; יש האלקטרודה משושה מתח קבוע של 730 V (אם המרחק בין האלקטרודות הוא 7 מ"מ; 1,040 V / ס"מ), עם תדר של 5 kHz ומספר פולסים תלוי במספר של מחטים. במקרה של 7 מחטים 24 פולסים מוחלים סילוק של חומר מזוהם. השלך את כל החומרים המזוהמים (מזרקים, מחטים, מבחנות, gauzes, כפפות) במכל המיועד לשריפה. <p class="jove_title"> 5. מעקב הערה: בכל ביקור, גושים סרטניים נמדדים עם קליפר Vernier וצילם. ביקורים אלה משמשים גם כדי להעריך את תופעות הלוואי המקומי ומערכתי האפשרי. התגובה לטיפול הוא הבקיע לאחר 4 שבועות על פי הקריטריונים של "קריטריונים להערכה תגובה בגידולים מוצקים" (RECIST) 19 כמו תגובה מלאה (CR) – היעלמותו של גולה, תגובה חלקית (PR) – לפחות 30% קיטון בסך של בקטרים ​​של נגע היעד, לקחת כהפניה בקטרי סכום הבסיס, המחלה פרוגרסיבית (PD) – לפחות עלייה של 20% בסך של בקטרים ​​של נגעי היעד, לקחת כהפניה הקטנה סכום נלמד, מחלה יציבה (SD) – לא התכווצות מספיק כדי להעפיל יחסי ציבור, ולא עלייה מספיק כדי להעפיל PD, נלקחת כהפניה בקטרי הסכום הקטנים ביותר. עבור כל הגדרות תגובת משך 4 שבועות מינימום נדרש qualifying לכל סוג של תגובה. זמן תצפית מחושב כיחס בין המרווח בין מועד הטיפול הראשון ואת מועד הבדיקה האחרונה של המטופל. תופעות לוואי אפשריות נקבעות על פי סולם רעילות קבוצת אונקולוגיה השיתופית וטרינרית (VCOG – CTCAE) 20 בכל בדיקה ומעקב. לקביעת פגישה 1 שבוע אחרי הטיפול. לקביעת פגישה 2 שבועות אחרי הטיפול. לקביעת פגישה 4 שבועות לאחר הטיפול. לאחר 4 שבועות לקביעת פגישה אחת לחודש.

Representative Results

המקרה מציג גידול תא פיטום ממוקם על העפעף של כלב. החולה טופל עם ציספלטין intratumorally המוזרק והיישום של 8 פולסים חשמליים באמצעות אלקטרודות צלחת. גודלו של הגידול היה 5 מ"מ. בשל האזור הרגיש של ההרדמה הכללית מיקום הגידול היה בשימוש. על פי גודלו של מ"ל 0.5 הגידול (0.5 מ"ג) של ציספלטין הוזרק intratumorally. אחת דקות לאחר ההזרקה פולסים חשמליים יושמו באמצעות אלקטרודה צלחת 8 מ"מ. רק אחד בטווח של פולסים חשמליים יושם. לאחר הטיפול המטופל היה בפיקוח עד שב להכרתו מספיק. החולה שוחרר לאחר שעות. לאחר שבוע החולה הגיע עבור בדיקה שגרתית. הגידול ulcerated ואת האזור סביב הגידול היה נפוח מעט. הגידול נמדד על ידי Vernier קליפר וצלם. חודש לאחר treatment אין עדות נוספת של הגידול צוינה. הפצע נסגר צַלֶקֶת הסובלים מהתקרחות נתפסה באתר הטיפול. לאחר טיפול הכלב לא הראה שום סימנים של כאב, הפונקציה של העפעף נשמרה במהלך תקופת ההחלמה כולו ואת ההשפעות הקוסמטיות לאחר טיפול מצוינות. איור 1. טיפול Electrochemotherapy. הנתון מראה את הכלב לפני הטיפול (א), שבוע אחד (B), חודש (C) ושלושה חודשים לאחר הטיפול (D). (א) גידול תא פיטום על העפעף התחתון. הכלב המתאגרף הגרמני הישן 2.5 שנים עם גודל הגידול של 5 מ"מ לפני הטיפול. (ב) לאחר טיפול הגידול החל ליצור פצע ואת הרקמה שמסביב אזור electroporated התנפחה מעט. שני אנוEKS לאחר טיפול קרום שנוצר באתר הגידול ונפל (לא מוצג). (C) חודש לאחר electrochemotherapy אין ראיות של הגידול צוין ו צַלֶקֶת הסובלים מהתקרחות נתפסה באתר הגידול. (ד) שלושה חודשים אחרי מחדש epithelization הכולל electrochemotherapy התרחש באתר של הגידול. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. שיטת הפעלה (OM) מספר, נפח ומיקום של גושים סרטניים א B 1 – 3 גושים <1 cm³ גידולי עור ובעל פה √> 3 גושים, כל עור נפח וגידולים אוראליים ראש √ </tד> כל מספר, כל היקף ראש העור וגידולים אוראליים √ בחירת טבלת 1. שיטת ההפעלה מבוססת על מספר גושים סרטניים וגודלם סדציה עמוקה = אום.; = הרדמה כללית OM B. גודל סמים / כימותרפיות של גידול יישום intratumoral היישום תוך ורידי מנה ציספלטין (1 מ"ג / מ"ל) <1 ס"מ 3 1 מ"ל (1 מ"ג) > 1 ס"מ 3 0.5-1 מ"ל (0.5-1 מ"ג) / 3 ס"מ של הגידול מנה בליאומיצין (3,000 IU / ml) <1 ס"מ 3 0.5 מ"ל (1,500 iu) > 1 ס"מ 3 0.5 – 1 מ"ל (1,500-3,000 IU) / 3 ס"מ של הגידול 300 IU / ק"ג טבלת 2. עוצמת הזריקה המתאימה של cytostatics פי תוואי הממשל וגודל גידול אצל כלבים. גודל סמים / כימותרפיות של גידול יישום intratumoral היישום תוך ורידי מנה בליאומיצין (3,000 IU / ml) <1 ס"מ 3 0.5 מ"ל (1,500 iu) > 1 ס"מ 3 0.5 – 1 מ"ל (1,500 – 3,000 IU) / 3 ס"מ של הגידול 300 IU / ק"ג <p clתחת = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1"> לוח 3. עוצמת הזריקה המתאימה של cytostatics בהתאם לגודל הגידול אצל חתולים.

Discussion

Electrochemotherapy הוכיח את עצמו יעיל מאוד נגד גידולים ראשוניים שונים או גרורות בכלבים וחתולים. Electrochemotherapy ניתן להשתמש בכוונה מרפאה עבור גושים סרטניים בודדים או מרובים עורית או תת עורית או כטיפול משלים לניתוח. הטיפול המקובל נבחר של מספר גידולים בכלבים, כוללים גידולי תא פיטום, הוא כריתה כירורגית של הגידול. במחקר שהשווה ניתוח כטיפול סטנדרטי ECT בטיפול בגידולי תא פיטום בכלבים הראה כי טיפול ב- ECT הביא 70% תגובה מלאה תוך ניתוח הביא 50% תגובה מלאה 11 הוכחה כי ECT הוא טיפול שווה ניתוח.

לקבלה האפקטיבית antitumor המבוטא של ECT שני תנאים צריכים להתממש, שהן שלבים קריטיים בתוך הפרוטוקול. הראשון הוא הממשל של cytostatics. הנוכחות של התרופה ברקמות היעד קובעת יעילות ECTכמו התרופה צריכה להיות נוכחים בתוך התאים כדי להרוג אותם. כאשר הזרקת התרופה intratumorally, השלט של שימור רקמות טוב הוא הלבנת רקמות. כמו כן, חלק הדליפה של פתרון לאחר מתן יכולה להתרחש דרך החורים המיוצר על ידי מחט בגידול או necrotizing רקמות במהלך פגישות ECT נוספות. לפיכך, והגיע 1 מ"ג / ס"מ 3 (cisplatin) או 3,000 UI / ס"מ 3 (בליאומיצין) ריכוזים אז יכול להיות תיאורטי בלבד במקרים אלה, עם זאת, המטרה היא לנסות לשמור על פתרון כמה שיותר ברקמות היעד. בנוסף, יש להחיל פולסים חשמליים מהר ככל האפשר על מנת להשיג אפקט vasoconstricting תורמת שמירת פתרון.

שני מסלולים של ממשל שונים ניתן להשתמש עם ECT: intratumoral ו תוך ורידים. האפקטיביות antitumor של ECT עם ציספלטין intratumoral או בליאומיצין או עם בליאומיצין תוך ורידי ניתן להשוות 21 ואילו electrochemotherapy עם היישום תוך ורידי של ציספלטין הוא פחות יעיל 22 ולכן ציספלטין משמש רק במנהל intratumoral. תכונה חשובה נוספת של תרופת ציספלטין היא כי השימוש בו חתולים הוא תווית כמו ציספלטין הוכח להיות רעיל מאוד אצל חתולים 23. אם לחולה יש אחד או רק כמה גושים, אז תוואי intratumoral מומלצים. אם מספר גושים עולה ~ 5 גושים, אז תוואים תוך ורידים מומלצים. יש הזרקת intratumoral של ציספלטין כמה אפקטיבית antitumor גם ללא היישום של פולסים חשמליים, תוך בליאומיצין, בשל אופי הידרופילי הגבוה שלו, לא. לכן, ציספלטין היא התרופה הראשונה של בחירה אם יישום intratumoral אפשרי אצל כלבים. זה חשוב בגלל התנאי השני שחייבות להתקיים לצורך פעולת antitumor היעילה של ECT וכי הוא כיסוי של הגידול כולו עם שדה חשמלי גבוה מספיק. כדי להשיג את גידול התאpermeabilization קרום, השדה החשמלי המושרה בתוך הרקמה לחרוג מסף מסוים. התפלגות השדה החשמלי בתוך הרקמה תלויה אלקטרודות, ולכן חשוב איזה סוג של אלקטרודות משמשים. פלייט או אלקטרודות מערך מקבילות ניתן להשתמש בבטחה עבור גידולים שטחיים קטנים 24. אם הגידולים הם עבים יותר, אלקטרודות משושה מתאימות יותר. עובדה חשובה היא כי הבקשה של פולסים חשמליים ניתן לחזור, כך שהאזור הגידול כולו מכוסה, כולל שולי בטיחות. מאז פולסים חשמליים לגרום נעילת כלי דם, היישום שלהם צריך להתחיל מהקצה של הגידול, לעבר מרכז.

נכון לעכשיו, ההגבלה של הטכניקה היא הזמינות של אלקטרודות המונעת לטיפול בגידולים עמוקים. עם זאת, את התצורה של אלקטרודות היא תכונה טכנולוגית המתפתחת במהירות ועכשיו סטים שונים של אלקטרודות משמשים fאו הממשלים ספציפיים לטווח מחט אלקטרודות אחת עבור גרורות של גידולים המעי הגס בכבד 25, גרורות בעצמות 7, סרקומה של רקמות רכות 26, אלקטרודות endoluminal עבור המעי הגס, קיבה גידולים בוושט 27 ו 'להרחבה' גג '' אלקטרודות סוג עבור גידולים במוח 8 .

ECT יכול להיות יעיל כטיפול חד פעמי בלבד, אבל במקרה של כישלון או תגובת הגידול חלקית זה ניתן לחזור מספר פעמים עם יעילות משופרת. ECT הוא טיפול פולשני מקומי. האפקטיביות המקומיות שלה הן עד 80% מכלל שליטת גידול מקומית, אך ללא השפעה ניכרת על גרורות מרוחקות 7, שהיא מגבלה נוספת של הטיפול. לכן, כדי להשיג תגובה מערכתית, ECT וניתן לשלבו עם טיפולים אחרים. לאחרונה, הצענו שילוב ECT עם יישומים ביו אחר של electroporation, כלומר, הגן electrotransfer של Molec המערכת החיסוניתinterleukin-12 ule (IL-12), אשר ידועה פעילות אנטי-סרטנית שלו. שילוב של ECT ו electrotransfer גן עם IL-12 כבר הוכח להיות טיפול משולב בטוח ללא תופעות לוואי ואת גידול מקומי טוב עם שיעור תגובה מלא גבוה 28, אשר גם מנע ישנה גרורים מרוחק.

לסיכום, היתרונות של electrochemotherapy הם בפשטותו, משך קצר של טיפולים, מינוני cytostatic נמוכים ותופעות לוואי לא משמעותיות. בנוסף, זה מתבצע על בסיס אשפוז, ולכן, החולים לא צריכים להישאר בבית החולים.

כיום, על זמינותו של גנרטורים שונים של פולסים חשמליים על השוק גדלה, מובילה גם על הורדת המחיר של גנרטורים, ללא אובדן אמינות ובכך electrochemotherapy אפילו יותר זול. אלה צריכים להוביל לשימוש רחב יותר של טיפול זה ברפואה וטרינרית.

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors acknowledge the financial support received from the state budget by the Slovenian Research Agency (program no. P3-0003, project no. J3-6796). The research was conducted in the scope of the EBAM European Associated Laboratory (LEA). This manuscript is the result of the networking efforts of the COST Action TD1104. We wish to thank Alenka Seliskar, Mojca Juvan (Veterinary Faculty, Clinic for Surgery and Small Animals) and Jakob Konda (Institute of Oncology, Ljubljana, Ljubljana, Slovenia) for all of their valuable help.

Materials

Cisplatin Kobi Fresenius Kobi Oncology, Hampshire, Great Britain citostatic drug
Bleomycin PCH Pharmachemie B.V., Haarlem, Dutch citostatic drug
AquaUltra Basic Ultragel, Budapest, Hungary water based gel 
Electropulsator ELECTROvetS13  Leroy Betatech, Toulouse, France square-wave pulse generator
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mir, L. M., Orlowski, S., Belehradek, J., Paoletti, C. Electrochemotherapy potentiation of antitumour effect of bleomycin by local electric pulses. Eur J Cancer. 27 (1), 68-72 (1991).
  2. Sersa, G., Cemazar, M., Miklavcic, D. Antitumor effectiveness of electrochemotherapy with cis-diamminedichloroplatinum(II) in mice. Cancer Res. 55 (15), 3450-3455 (1995).
  3. Sersa, G., et al. Electrochemotherapy in treatment of tumours. Eur J Surg Oncol. 34 (2), 232-240 (2008).
  4. Sersa, G., Cemazar, M., Miklavcic, D., Chaplin, D. J. Tumor blood flow modifying effect of electrochemotherapy with bleomycin. Anticancer Res. 19 (5B), 4017-4022 (1999).
  5. Markelc, B., Sersa, G., Cemazar, M. Differential mechanisms associated with vascular disrupting action of electrochemotherapy: intravital microscopy on the level of single normal and tumor blood vessels. PLoS One. 8 (3), e59557 (2013).
  6. Bellard, E., et al. Intravital microscopy at the single vessel level brings new insights of vascular modification mechanisms induced by electropermeabilization. J Control Release. 163 (3), 396-403 (2012).
  7. Sersa, G., et al. Electrochemotherapy of tumors as in situ vaccination boosted by immunogene electrotransfer. Cancer Immunol Immunother. 64 (10), 1315-1327 (2015).
  8. Linnert, M., Iversen, H. K., Gehl, J., et al. Multiple brain metastases – current management and perspectives for treatment with electrochemotherapy. Radio Oncol. 46 (4), 271-278 (2012).
  9. Bianchi, G., Campanacci, L., Donati, D. Electrochemotherapy in bone metastases: results of a phase II study. , 46-47 (2013).
  10. Edhemovic, I., et al. Intraoperative electrochemotherapy of colorectal liver metastases. J Surg Oncol. 110 (3), 320-327 (2014).
  11. Kodre, V., et al. Electrochemotherapy compared to surgery for treatment of canine mast cell tumours. In Vivo. 23 (1), 55-62 (2009).
  12. Spugnini, E. P., et al. Electrochemotherapy for the treatment of recurring aponeurotic fibromatosis in a dog. Can Vet J. 54 (6), 606-609 (2013).
  13. Tozon, N., Pavlin, D., Sersa, G., Dolinsek, T., Cemazar, M. Electrochemotherapy with intravenous bleomycin injection: an observational study in superficial squamous cell carcinoma in cats. J Feline Med Surg. 16 (4), 291-299 (2014).
  14. Tamzali, Y., et al. Successful treatment of equine sarcoids with cisplatin electrochemotherapy: a retrospective study of 48 cases. Equine Vet J. 44 (2), 214-220 (2012).
  15. Mali, B., et al. Tumor size and effectiveness of electrochemotherapy. Radiol Oncol. 47 (1), 32-41 (2013).
  16. Blackwood, L., et al. European consensus document on mast cell tumors in dogs and cats. Vet Comp Oncol. 10 (3), e1-e29 (2012).
  17. Ivorra, A., Al-Sakere, B., Rubinsky, B., Mir, L. M. Use of conductive gels for electric field homogenization increases the antitumor efficacy of electroporation therapies. Phys Med Biol. 53 (22), 6605-6618 (2008).
  18. Suzuki, D. O. H., Marques, C. M. G., Rangel, M. M. M. Conductive Gel Increases the Small Tumor Treatment With Electrochemotherapy Using Needle Electrodes. Artif Organs. , (2016).
  19. Eisenhauer, E. A., et al. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 45 (2), 228-247 (2009).
  20. Veterinary Co-operative Oncology Group (VCOG). Veterinary Co-operative Oncology Group – Common Terminology Criteria for Adverse Events (VCOG-CTCAE) following chemotherapy or biological antineoplastic therapy in dogs and cats v1.0. Veterinary and Comparative Oncology. 2 (4), 195-213 (2004).
  21. Cemazar, M., et al. Electrochemotherapy in veterinary oncology. J Vet Intern Med. 22 (4), 826-831 (2008).
  22. Sersa, G. Electrochemotherapy: animal model work review. Methods Mol Med. 37, 119-136 (2000).
  23. Knapp, D. W., Richardson, R. C., DeNicola, D. B., Long, G. G., Blevins, W. E. Cisplatin toxicity in cats. J Vet Intern Med. 1 (1), 29-35 (1987).
  24. Cemazar, M., Golzio, M., Sersa, G., Rols, M. P., Teissie, J. Electrically-assisted nucleic acid delivery to tissues in vivo: where do we stand?. Curr Pharm Des. 12 (29), 3817-3825 (2006).
  25. Edhemovic, I., et al. Electrochemotherapy: a new technological approach in the treatment of metastases in the liver. Technol Cancer Res Treat. 10 (5), 475-485 (2011).
  26. Campana, L. G., et al. Electrochemotherapy treatment of locally advanced and metastatic soft tissue sarcomas: results of a non-comparative phase II study. World J Surg. 38 (4), 813-822 (2014).
  27. Soden, D. M., et al. Successful application of targeted electrochemotherapy using novel flexible electrodes and low dose bleomycin to solid tumours. Cancer Lett. 232 (2), 300-310 (2006).
  28. Cemazar, M., Avgustin Ambrozic, J., Pavlin, D., Sersa, G., Poli, A., Krhac Levacic, A., Tesic, N., Lampreht Tratar, U., Rak, M., Tozon, N. Efficacy and safety of electrochemotherapy combined with peritumoral IL-12 gene electrotransfer of canine mast cell tumours. Vet Comp Oncol. , (2016).

Tags

ElectrochemotherapyTumor TreatmentDogsCatsCytostatic DrugsElectroporationBleomycinCisplatinIntratumoral InjectionIntravenous InjectionElectric PulsesPlate ElectrodesNeedle ElectrodesVasoconstrictionDrug Retention

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citer Cet Article
Tozon, N., Lampreht Tratar, U., Znidar, K., Sersa, G., Teissie, J., Cemazar, M. Operating Procedures of the Electrochemotherapy for Treatment of Tumor in Dogs and Cats. J. Vis. Exp. (116), e54760, doi:10.3791/54760 (2016).
Télécharger la Citation
Réimpressions et Autorisations

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image