Summary

Контролируемый синтез и флуоресценция отслеживание высокой однородности поли (<em> N</em> -isopropylacrylamide) Микрогели

Published: September 08, 2016
doi:

Summary

Non-перемешивалась полимеризации осадков обеспечивает быстрое, воспроизводимое прототипирования подход к синтезу раздражителей-чувствительных поли (N -isopropylacrylamide) микрогелей узким распределением по размерам. В этом синтезе протокола, свет характеристика рассеяния и флуоресценции одного отслеживания частиц этих микрогелей в установке микроскопии широкого поля демонстрируются.

Abstract

Стимулы чувствительные поли (N -isopropylacrylamide) (PNIPAM) микрогели имеют различные перспективные практического применения и использования в фундаментальных исследованиях. В этой работе мы используем одну частицу отслеживания флуоресцентно меченых PNIPAM микрогелей как витрина для размера настройки микрогелевого быстрым не перемешанной методикой полимеризации осадков. Этот подход хорошо подходит для создания прототипов новых композиций реакции и условий или для приложений, которые не требуют большого количества продукта. Синтез микрогель, размер частиц и определение структуры с помощью динамического и статического рассеяния света подробно описаны в протоколе. Показано, что добавление функциональных сомономеров могут иметь большое влияние на зарождение и структуры частиц. Одно отслеживание частиц по широким полем флуоресцентной микроскопии позволяет исследованию диффузии меченых трассирующих микрогелей в концентрированном матрице немеченого микрогелей, система легко не исследоваласьДругие методы, такие как динамического рассеяния света.

Introduction

Стимулы чувствительные поли (N -isopropylacrylamide) (PNIPAM) микрогели 1,2 привлекли постоянный интерес в течение последних двух десятилетий из – за их потенциала в различных интеллектуальных приложений. Продемонстрированные случаи использования включают переключаемые стабилизаторов эмульсии 3-8, микролинз 9, культура клеток субстратов для легкого сбора клеток 10,11 и смарт – носителей для низкомолекулярных соединений и других биомедицинских использует 12. С фундаментальной точки зрения исследований эти частицы были доказаны , чтобы быть полезным для изучения предметов , таких как коллоидных взаимодействий 13-15 и полимер-растворитель взаимодействий 16-18.

Успешное использование PNIPAM микрогелей и их производных в любом приложении, как правило, требует знания о среднего размера частиц и ширины распределения частиц по размерам. Для правильной интерпретации результатов эксперимента с участием PNIPAM микрогели, структура частиц, которая может зависеть от функциональных сомономеров, должно быть известно. Динамическое и статическое рассеяние света (DLS и СЛС, соответственно) однозначно подходит для получения этой информации, потому что эти методы быстро и относительно просты в использовании; и они зондировать свойства частиц неинвазивным в их родной среде (дисперсии). DLS и СЛС также собирать данные из огромного числа частиц избежать смещения, возникающего из малых размеров выборки, характерных для методов микроскопии. Таким образом, первая цель этой работы является внедрение хорошей практики в отношении рассеяния света для специалистов-практиков новых к коллоидной характеристике.

Как правило, полимеризация осаждение проводят в лабораторном масштабе и поиск нужных условий реакции для специфических свойств частиц может быть трудоемким и требует много повторений синтеза. В отличие от большого пакетного синтеза, без осадков перемешивают полимеризации 19,20 является арПроцедура APID, в котором партий различных реагентной композиции могут быть полимеризованы одновременно прибыльные частицы узким распределением по размерам. Одновременная полимеризация минимизирует экспериментальное изменение и большой выход означает, что правильные условия реакции могут быть найдены быстро для масштабировании реакции. Следовательно, наша вторая цель состоит в том, чтобы продемонстрировать полезность полимеризации, не размешивают осаждения в прототипирования и в приложениях, которые не требуют большого количества продукта.

Различные аспекты синтеза и характеристики объединяются в примере применения флуоресцентных меченый PNIPAM микрогелей в коллоидной исследования взаимодействия. Здесь мы используем высокоточное отслеживание одной частицы, чтобы исследовать диффузию меченых трассирующих микрогелей в дисперсии немеченых матричных микрогелей в широком диапазоне концентраций матрицы и устранить эффект клетки в концентрированной коллоидной дисперсии. Широкое поле флуоресцентной микроскопии хорошо подходит FOR эта цель, как это может характеризовать специфическое поведение нескольких молекул трассеров среди большого количества потенциально различных видов матриц. Это в отличие от таких методов, как DLS, СЛС и реологии, измеряющих среднее по ансамблю свойств систем и, следовательно, не может разрешить поведение небольшого числа пробных частиц в большой системе. Кроме того, в этом конкретном примере, обычные методы рассеяния света не может быть использовано также в связи с высокой концентрацией частиц, что приводит к сильному многократного рассеяния любой стандартный утрачивает анализ. Использование автоматизированной обработки данных и статистических методов позволяют анализировать поведение системы в целом также для одного отслеживания частиц при усреднении по больших размеров выборки.

Protocol

1. микрогель Синтез Примечание: N -isopropylacrylamide (NIPAM) перекристаллизовывают из н-гексана. Другие реагенты использовали в полученном виде. Обычные Пакетное Синтез поли (NIPAM) Matrix микрогелями Растворить 1,8 г NIPAM и 24 мг N, N '-bisacrylamide (BIS) в 245 мл отфильтрованных (0,…

Representative Results

Число частиц PNIPAM микрогеля в пакете, и , таким образом , чтобы конечный объем частиц, определяется в начале реакции в течение Гидрофобный methacryloxyethyl красителя со-мономер фаза зарождение 20 тиокарбамоильная родамин влияет на зарожде…

Discussion

Добавление небольших количеств функционального сомономера может оказывать значительное влияние на размер частиц и структуры PNIPAM полученных микрогелей. Полимеризация пробирка Одновременная мелкосерийное является хорошим методом для уч?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) is acknowledged for financial support within the Sonderforschungsbereich SFB 985 “Functional Microgels and Microgel Systems”.

Materials

Acetone VWR Chemicals KRAF13455
Bisacrylamid AppliChem A3636
n-Hexane Merck 104374
N-Isopropylacrylamide Fisher Scientific AC412785000 recrystallized from n-hexane
Methacryloxyethyl thiocarbamoyl rhodamine B Polysciences 23591
Potassium peroxodisulfate Merck 105091
Silicone oil 47 V 350 VWR Chemicals 83851
Toluene Sigma Aldrich 244511
F12 Refrigerated/heating circulator Julabo 9116612
Microscope Olympus IX83
XY(Z) Piezo System Physik Instrumente P-545.3R7
100x Oil immersion objective Olympus UPLSAPO
QuadLine Beamsplitter AHF Analysentechnik F68-556T
 Cobolt Jive 150 laser Cobolt 0561-04-01-0150-300
Multimode Fiber Thorlabs UM22-600
iXON Ultra 897 EMCCD camera Andor DU-897U-CS0-BV
Laser goniometer SLS Systemtechnik Mark III
CF40 Cryo-compact circulator Julabo 9400340
Laser goniometer system  ALV GmbH ALV / CGS-8F
Multi-tau corretator ALV GmbH ALV-7004
Light scattering electronics ALV GmbH ALV / LSE 5004
Photon counting module PerkinElmer SPCM-CD2969 2 units in pseudo cross-correlation mode
633 nm HeNe Laser JDS Uniphase 1145P
F32 Refrigerated/heating circulator Julabo 9312632

References

  1. Pelton, R. Temperature-sensitive aqueous microgels. Adv. Colloid Interfac. 85, 1-33 (2000).
  2. Pich, A., Richtering, W. Microgels by Precipitation Polymerization: Synthesis, Characterization and Functionalization. Adv. Polym. Sci. 234, 1-37 (2010).
  3. Richtering, W. Responsive Emulsions Stabilized by Stimuli-Sensitive Microgels: Emulsions with Special Non-Pickering Properties. Langmuir. 28 (50), 17218-17229 (2012).
  4. Wiese, S., Spiess, A. C., Richtering, W. Microgel-Stabilized Smart Emulsions for Biocatalysis. Angew. Chem. Int. Edit. 52 (2), 576-579 (2012).
  5. Schmitt, V., Ravaine, V. Surface compaction versus stretching in Pickering emulsions stabilised by microgels. Curr. Opin. Colloid In. 18 (6), 532-541 (2013).
  6. Wellert, S., Richter, M., Hellweg, T., von Klitzing, ., R, Y., Hertle, Responsive Microgels at Surfaces and Interfaces. Z. Phys. Chem. 229 (7-8), 1-26 (2015).
  7. Li, Z., Harbottle, D., Pensini, E., Ngai, T., Richtering, W., Xu, Z. Fundamental Study of Emulsions Stabilized by Soft and Rigid Particles. Langmuir. 31 (23), 6282-6288 (2015).
  8. Deshmukh, O. S., van den Ende, D., Stuart, M. C., Mugele, F., Duits, M. H. G. Hard and soft colloids at fluid interfaces: Adsorption, interactions, assembly & rheology. Adv. Colloid Interfac. 222, 215-227 (2015).
  9. Serpe, M. J., Kim, J., Lyon, L. A. Colloidal Hydrogel Microlenses. Adv. Mater. 16 (2), 184-187 (2004).
  10. Schmidt, S., Zeiser, M., Hellweg, T., Duschl, C., Fery, A., Möhwald, H. Adhesion and Mechanical Properties of PNIPAM Microgel Films and Their Potential Use as Switchable Cell Culture Substrates. Adv. Func. Mater. 20 (19), 3235-3243 (2010).
  11. Xia, Y., He, X., et al. Thermoresponsive Microgel Films for Harvesting Cells and Cell Sheets. Biomacromolecules. 14 (10), 3615-3625 (2013).
  12. Guan, Y., Zhang, Y. PNIPAM microgels for biomedical applications: from dispersed particles to 3D assemblies. Soft Matter. 7 (14), 6375 (2011).
  13. Yunker, P. J., Chen, K., Gratale, M. D., Lohr, M. A., Still, T., Yodh, A. G. Physics in ordered and disordered colloidal matter composed of poly(N-isopropylacrylamide) microgel particles. Rep. Prog. Phys. 77 (5), 056601-056629 (2014).
  14. Lohr, M. A., Still, T., et al. Vibrational and structural signatures of the crossover between dense glassy and sparse gel-like attractive colloidal packings. Phys. Rev. E. 90 (6), 062305 (2014).
  15. Dreyfus, R., Xu, Y., Still, T., Hough, L. A., Yodh, A. G., Torquato, S. Diagnosing hyperuniformity in two-dimensional, disordered, jammed packings of soft spheres. Phys. Rev. E. 91 (1), 012302-012312 (2015).
  16. Kojima, H., Tanaka, F. Reentrant volume phase transition of cross-linked poly(N-isopropylacrylamide) gels in mixed solvents of water/methanol. Soft Matter. 8 (10), 3010-3011 (2012).
  17. Hofmann, C. H., Plamper, F. A., Scherzinger, C., Hietala, S., Richtering, W. Cononsolvency Revisited: Solvent Entrapment by N-Isopropylacrylamide and N, N-Diethylacrylamide Microgels in Different Water/Methanol Mixtures. Macromolecules. 46 (2), 523-532 (2013).
  18. Bischofberger, I., Calzolari, D. C. E., Trappe, V. Co-nonsolvency of PNiPAM at the transition between solvation mechanisms. Soft Matter. 10 (41), 8288-8295 (2014).
  19. Virtanen, O. L. J., Richtering, W. Kinetics and particle size control in non-stirred precipitation polymerization of N-isopropylacrylamide. Colloid Polym. Sci. 292 (8), 1743-1756 (2014).
  20. Virtanen, O. L. J., Ala-Mutka, H. M., Richtering, W. Can the Reaction Mechanism of Radical Solution Polymerization Explain the Microgel Final Particle Volume in Precipitation Polymerization of N-Isopropylacrylamide?. Macromol. Chem. Phys. 216 (13), 1431-1440 (2015).
  21. Glatter, O. A new method for the evaluation of small-angle scattering data. J. Appl. Crystallogr. 10 (5), 415-421 (1977).
  22. Svergun, D. I. Determination of the regularization parameter in indirect-transform methods using perceptual criteria. J. Appl. Crystallogr. 25 (4), 495-503 (1992).
  23. Glatter, O. Convolution Square Root of Band-Limited Symmetrical Functions and Its Application to Small-Angle Scattering Data. J. Appl. Crystallogr. 14, 101-108 (1981).
  24. Glatter, O., Hainisch, B. Improvements in Real-Space Deconvolution of Small-Angle Scattering Data. J. Appl. Crystallogr. 17, 435-441 (1984).
  25. Cheezum, M. K., Walker, W. F., Guilford, W. H. Quantitative Comparison of Algorithms for Tracking Single Fluorescent Particles. Biophys. J. 81 (4), 2378-2388 (2001).
  26. Wöll, D., Kölbl, C., Stempfle, B., Karrenbauer, A. A novel method for automatic single molecule tracking of blinking molecules at low intensities. Phys. Chem. Chem. Phys. 15 (17), 6196-6205 (2013).
  27. Saxton, M. J., Jacobson, K. Single-particle tracking: Applications to membrane dynamics. Annu. Rev. Bioph. Biom. 26, 373-399 (1997).
  28. Pusey, P. N., van Megen, W. Detection of small polydispersities by photon correlation spectroscopy. J. Chem. Phys. 80 (8), 3513 (1984).
  29. Stieger, M., Pedersen, J. S., Richtering, W., Lindner, P. Small-angle neutron scattering study of structural changes in temperature sensitive microgel colloids. J. Chem. Phys. 120 (13), 6197-6206 (2004).
  30. Wu, X., Pelton, R. H., Hamielec, A. E., Woods, D. R., McPhee, W. The kinetics of poly(N-isopropylacrylamide) microgel latex formation. Colloid Polym. Sci. 272, 467-477 (1994).
  31. Weeks, E. R., Weitz, D. A. Subdiffusion and the cage effect studied near the colloidal glass transition. Chem. Phys. 284 (1-2), 361-367 (2002).
  32. Ernst, D., Köhler, J., Weiss, M. Probing the type of anomalous diffusion with single-particle tracking. Phys. Chem. Chem. Phys. 16 (17), 7686-7691 (2014).
  33. . FitIt! (Version 1.1.4) Available from: https://www.github.com/ovirtanen/fitit (2015)
  34. Provencher, S. W. A Constrained Regularization Method For Inverting Data Represented By A Linear Algebraic or Integral Equations. Comput. Phys. Commun. 27 (3), 213-227 (1982).
  35. Holtzer, L., Meckel, T., Schmidt, T. Nanometric three-dimensional tracking of individual quantum dots in cells. Appl. Phys. Lett. 90 (5), 053902-053904 (2007).
  36. Diezmann, A. V., Lee, M. Y., Lew, M. D., Moerner, W. E. Correcting field-dependent aberrations with nanoscale accuracy in three-dimensional single-molecule localization microscopy. Optica. 2 (11), 985-989 (2015).
  37. Lindner, P., Zemb, T. . Neutrons, X-rays and Light: Scattering Methods Applied to Soft Condensed Matter. , (2002).

Play Video

Citer Cet Article
Virtanen, O. L. J., Purohit, A., Brugnoni, M., Wöll, D., Richtering, W. Controlled Synthesis and Fluorescence Tracking of Highly Uniform Poly(N-isopropylacrylamide) Microgels. J. Vis. Exp. (115), e54419, doi:10.3791/54419 (2016).

View Video