ويستخدم على نطاق واسع بارنز متاهة الأراضي الجافة لقياس القدرة الملاحة المكانية في الاستجابة للمحفزات أقل ما يقال مكره. على مدى أيام متتالية، والأداء (مثل الكمون لتحديد موقع قفص الهروب) من الضابطة يحسن، مما يدل على التعلم والذاكرة العادية. الاختلافات بين الفئران والجرذان تستلزم أجهزة ومنهجية التغييرات التي يتم تفصيلها هنا.
وغالبا ما تقييم التعلم والذاكرة المكانية من القوارض المخبرية عبر القدرة الملاحية في متاهات، الأكثر شعبية والتي هي المياه والأراضي الجافة (بارنز) متاهات. ويعتقد أن تحسين الأداء خلال الجلسات أو محاكمات لتعكس التعلم والذاكرة لموقع قفص الهروب / منصة. يعتبر اقل وطأة من متاهات المياه، المتاهة بارنز هو تصميم بسيط نسبيا من أعلى منصة دائرية مع عدة ثقوب متباعدة بالتساوي حول حافة المحيط. لكن كل واحد من الثقوب هي كاذبة القاع أو تنتهي أعمى، في حين يقود المرء إلى قفص الهروب. المحفزات مكره أقل ما يقال (مثل أضواء النفقات العامة مشرق) توفير الحافز لتحديد موقع قفص الهروب. الكمون لتحديد موقع قفص الهروب يمكن قياسها خلال الدورة، ولكن تتطلب نقاط النهاية إضافية عادة تسجيل الفيديو. من تلك تسجيلات الفيديو، واستخدام برامج تتبع الآلية يمكن أن تولد مجموعة متنوعة من نقاط النهاية التي هي مماثلة لتلك التي تنتج في متاهات المياه (على سبيل المثال <م /> سافر مسافة والسرعة / السرعة، والوقت الذي يقضيه في الربع الصحيح، قضى وقتا نقل / يستريح، والتأكد من الكمون). نوع من استراتيجية البحث (أي عشوائية، المسلسل، أو المباشرة) يمكن تصنيفها كذلك. يمكن بناء المتاهة واختبار المنهجيات بارنز تختلف عن القوارض الصغيرة مثل الفئران والقوارض والكبيرة، مثل الفئران. على سبيل المثال، في حين العظة خارج المتاهة هي فعالة بالنسبة للفئران، قد تتطلب القوارض البرية أصغر العظة داخل متاهة مع حاجزا البصرية في جميع أنحاء المتاهة. يجب تحديد المثيرات الملائمة التي تحفز على القوارض لتحديد موقع قفص الهروب. كل من بارنز ومتاهات المياه يمكن أن يكون مضيعة للوقت كما هي عادة ما تكون مطلوبة 4-7 المحاكمات اختبار للكشف عن التعلم والذاكرة وتحسين الأداء (مثل الإختفاء أو مسار أقصر أطوال لتحديد موقع منصة الهروب أو القفص) و / أو الاختلافات بين المجموعات التجريبية. وحتى مع ذلك، المتاهة بارنز هو تقييم السلوكية المستخدمة على نطاق واسع قياس قدراتهم الملاحية والمكانيةتعطل إمكاناتهم من خلال الوراثية، التلاعب السلوك العصبي، أو التعرض للمخدرات / سمية.
تم تقييم التعلم والذاكرة المكانية في القوارض أول مختبر مع الفئران المحرومة من الطعام الذي أبحر متاهة من الأزقة لتحديد معزز الغذاء 1. بعد عدة عقود من الزمن، واقترح نظام الذاكرة المرجعية المكانية 2. وعلى النقيض من الذاكرة العاملة التي تشير إلى الذاكرة ضمن جلسة اختبار أو محاكمة، ويشير إشارة إلى الذاكرة الذاكرة عبر جلسات الاختبار أو محاكمات وأكثر ارتباطا الذاكرة طويلة الأمد.
وقد تم تطوير عدة أنواع من متاهات عمليات تقييم موسع من هذا التعلم التي تعتمد على الحصين والذاكرة المكانية في القوارض الصغيرة والكبيرة (مثل متاهة مائية، متعددة T-المتاهة، متاهة شعاعي الذراع ومتاهات الأراضي الجافة) 3-6. هنا، ونحن نركز على منصة دائرية أو بارنز المتاهة، وصف لأول مرة في عام 1979 من قبل الدكتورة كارول بارنز 7. وقد استخدمت هذه المتاهة لاختبار التعلم والذاكرة المكانية الملاحية في مجموعة واسعة من نماذج القوارض، بما في ذلك الفئران (رعttus النرويجي) والفئران (المصحف العضلة)، الغزلان الفئران (Peromyscus maniculatus bairdii) والفئران كاليفورنيا (Peromyscus californicus)، والقوارض hystricomorph (على سبيل المثال degus [degus Octodon]) 8-13. الأنواع الأخرى تقييمها باستخدام المتاهة بارنز تشمل الصراصير الأمريكية (Periplaneta أمريكانا) 14، والثعابين الذرة (الألوفة الرقشاء الرقشاء) 15، الزواحف squamate (مثل السحالي-مبقع الجانب [أوتا stansburiana]) 16، والرئيسيات غير البشرية (مثل الليمور الفأر [Microcebus murinus]) 17. في مختبراتنا، وقد استخدمت بارنز الأداء المتاهة وذلك في مؤشر السمية العصبية بعد التنموي ثنائي الفينول أ (BPA) أو استراديول (EE2) التعرض 9-1113. كما أنها تستخدم عادة لphenotyping سلوك سلالات مختلفة الماوس 18-21، وتقييم آثار الشيخوخة 7،22-28، ومواطنه ذات الصلة بالأمراض الزهايمرicits في النماذج الحيوانية 3،29-33، فضلا عن آثار التمارين الرياضية والغذائية والبيئية والأيض التعديلات 34-42.
والميزة الرئيسية لاستخدام متاهة بارنز هو أنه يدفع أقل من الضغط في الموضوعات المتعلقة متاهات المياه، مثل الماء متاهة موريس 43، على الرغم من أن كل من يمكن أن تحدث زيادات حادة في تركيزات البلازما في الفئران كورتيزون 44. كما متاهة اليابسة، قد يكون متاهة بارنز أكثر ذات الصلة ethologically للقوارض الأرضية 45. على الرغم من ثبت أداء متاهة مائية لتكون أكثر حساسية لتغيرات جينية في الفئران 3،46،47، بارنز أداء متاهة هو أكثر حساسية لبعض التعديلات الأخرى 48،49. في نماذج القوارض حيث استخدام متاهة الماء غير ممكن، يمكن أن توفر المتاهة بارنز تقييم ضبطها غرامة الاحتفاظ الذاكرة المكانية 31. المحفزات مكره أقل ما يقال تستخدم عادة في متاهات بارنز (أضواء ساطعة أي)،ومع ذلك، قد لا توفر حافزا كافيا لمكافحة القوارض لتحديد موقع قفص هروب 45. علاوة على ذلك، يمكن القوارض تعلم أنه لا يوجد عقاب يحدث اذا لم تدخل القفص الهروب. وهكذا، بدلا من البحث بنشاط عن قفص الهروب، وبعض القوارض بنشاط على استكشاف متاهة لفترات طويلة من كل محاكمة. كما استعرضتها كنرد وودروف الباكستانية 24، وهذا الاستكشاف زيادة إطالة زمن لتحديد موقع قفص الهروب، وطول الطريق، وزيادة عدد الأخطاء. وبالتالي، قياس معلمات متعددة، بما في ذلك الكمون، ونسبة الخطأ، والوقت الذي يقضيه في الأرباع الصحيح وغير صحيحة، والسرعة، والوقت تتحرك، والوقت يستريح، واستراتيجية البحث، قد توفر مجتمعة مؤشرا أفضل من المكانية التعلم الملاحية والذاكرة قدرة كل موضوع من 8 -10. بالإضافة إلى ذلك، يمكن قياس الأداء مثل كمون لتحديد أول قفص الهروب (المقياس الأساسي) أو الكمون لدخول القفص الهروب (مقياس المجموع). البعض بعرض الحججإد أن التدابير الأولية للأداء هي انعكاس أكثر دقة من التعلم المكاني من مجموع التدابير 50. معظم الدراسات، بما في ذلك أمثلة وصفها هنا، استخدام الكمون لدخول القفص الهروب لتحديد نسبة الخطأ واستراتيجية البحث. علاوة على ذلك، بعض أنظمة تتبع البرمجيات لديها نظام لكشف الجسم من ثلاث نقاط التي يمكن قياس الترددات من استنشاق الصحيح مقابل ثقوب غير صحيحة. أخيرا، المتاهة يجب تنظيفها مع الايثانول بين التجارب لإزالة العظة حاسة الشم التي يمكن أن توفر العظة أو إثبات تشتيت للحيوانات اللاحقة.
تصاميم متاهة بارنز تختلف ولكن عموما كل لديه 12 أو 20 حفرة الهروب المحتملة، منها واحد فقط يؤدي إلى المنزل أو قفص الهروب. قد تقع القفص الهروب إما مباشرة تحت ثقب الهروب على رأس المتاهة (لمتاهات بلا جدران) أو بنيت في الجدار المحيطة من المتاهة. يمكن العظة تختلف في حجمها من حوالي 16.5 سم ارتفاع أو عرض (ضمن مأذربيجان) إلى خط أفقي 21.6 سم في العرض وضعت من الأرض حتى السقف من جدار غرفة خارج المتاهة. أرقام 1-5 تظهر أمثلة من التصاميم متاهة بارنز للأنواع Peromyscus (الشكل 1) والفئران (الأرقام 2-5). يجب المقابس أو قيعان كاذبة تغطية الثقوب nonescape لمنع الحيوانات من السقوط للخروج من المتاهة. حجم الغرفة الاختبار يمكن أن تختلف (~ 20 م 2) ولكن يجب أن تكون كبيرة بما يكفي لتوفير مجالا واسعا للالمتاهة، التعود على الحيوانات إلى الغرفة، واستيعاب جهاز كمبيوتر مع الفيديو انشاء (في حال استخدامها)، ومكان لالمجرب على الجلوس على مسافة (على الأقل ~ 122 سم) من جهاز متاهة مثل أن وجودهم لا تتداخل مع أداء الحيوان. ينبغي أن تكون متوازنة التنازل عن هروب موقع القفص بين مجموعات العلاج والجنس. في حين أن إجراءات محددة وصفها هنا لا تشمل الدورية المتاهة بين التجارب للحد من استخدام داخل المتاهة العظة رائحة، بعض الدراساتإدراج هذا الإجراء 50. في إجراءاتنا، ومحو المتاهة نظيفة مع الايثانول بين المحاكمات للقضاء على رائحة العظة.
في تحديد مكان القفص الهروب، وقد تم تحديد ثلاثة أنواع من استراتيجيات البحث (وهو ما يسمى في الأصل "أنماط" من قبل بارنز 7): 1) العشوائية، التي تعرف عمليا عمليات البحث المترجمة من الثقوب مفصولة مسارات عبور وسط متاهة، 2) المسلسل، الذي يعرف بأنه البحث المنهجي للثقوب متتالية في اتجاه عقارب الساعة أو بعكس اتجاه عقارب الساعة، و 3) مباشرة أو المكاني، الذي يعرف بأنه تبحر مباشرة إلى رباعي الصحيح دون عبور وسط متاهة أكثر من مرة ومع ثلاثة أو أقل الأخطاء. بشكل عام، مع تكرار التجارب، تقدم القوارض عادة من خلال استراتيجيات البحث في الترتيب المسرود (عشوائي، المسلسل، والمباشرة) 51. محاكمة التحقيق دون قفص الهروب يمكن أيضا أن تستخدم كمقياس مزيد من الذاكرة 50.
البروتوكول وممثلوقد وضعت النتائج هنا لنوعين من القوارض (القوارض الصغيرة يطلق Peromyscus الأنواع غير ذلك) والجرذان. في حين أن هذه الإجراءات العامة قد عقد أيضا بالنسبة للفئران الفطرية و / أو الأباعد (المصحف العضلة)، وينبغي استشارة دراسات أخرى على الاختلافات المنهجية المحتملة لتلك الأنواع الأخير 18-21.
الخطوات الحاسمة في بارنز إجراءات الاختبار متاهة ما يلي: 1) تقديم الحوافز المناسبة مكره أقل ما يقال لتحفيز الحيوان لتحديد موقع قفص الهروب، 2) ضمان تمسك شروط موحدة عبر التجارب على الحيوانات (مثل وقت الاختبار، واختبار الموظفين، ومراقبة الضجيج الخارجي، والمحفزات ال?…
The authors have nothing to disclose.
والكتاب يعترف السيد Jašarević الدين، والسيد سكوت وليامز، والسيد روجر جورج ميسن، سارة A. جونسون، والدكتور مايكل ر. روبرتس، والدكتور مارك ر. Ellersieck، والدكتور ديفيد سي جيري في جامعة ولاية ميسوري، والسيد جيم قانون دلبرت وموظفي الرعاية الحيوانية في المركز الوطني للبحوث السمية / ادارة الاغذية والعقاقير. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح التحدي على منح لCSR (RC1 ES018195)، وهي ميزة غرانت ميزوو ل(CSR ومجموعة دبي كابيتال)، وجامعة ميسوري كلية الطب البيطري جائزة هيئة التدريس (CSR)، وبروتوكول E7318 في المركز الوطني للبحوث السمية / FDA.
NOTE: Those items that are for small rodents only are bolded. Those items that are for large rodents only are italicized. Items neither bolded nor italicized are for both. | |||
Barnes Maze platform with 12 or 20 escape holes every 30°. For rats, each hole is 10.5 cm in diameter and 4 cm from the maze top edge. For use with automated tracking programs, a black top for white rodents or a white top for pigmented rodents is needed. For mice and rats, this circular top is 95 and 122 cm in diameter, respectively. | US Plastics Corp, Lima, OH | 42625 | This is the top of the Barnes Maze and the surface that the rodent is placed upon. It can be constructed from a variety of materials (e.g. Plexiglas), but for endocrine disruptor work, polypropylene BPA-free material is optimal. One of the holes leads to the an escape cage; all other holes are blind-ending or false-bottomed. For the rat maze, small slides on the underside of the maze platform allow the escape cage and false bottoms to slide in. |
2" Polypropylene pipe plug (24) 2" 90° Black polypropylene elbow (12) 2" x 6" Polypropylene pipe nipple (1) |
US Plastics Corp, Lima, OH | 30724 32086 30712 |
These are only necessary for the small rodent (e.g. mouse) Barnes Maze. These adaptations are either blind-ending tubes/elbows or one of the tubes is connected to the pipe nipple that then leads to the escape cage. |
False bottoms for rat Barnes Maze | These were custom made of ABS plastic and vacuum molded for the rat maze apparatus. | ||
Circular aluminum wall/barrier (50 cm high) around the maze | Ace Hardware, Columbia, MO | In the case of small rodents (e.g. mice), this barrier prevents them from falling off the maze; the rat apparatus generally does not require this. The wall may not be needed for laboratory mice that are relatively tame. | |
Support stand for maze platform top | US Plastics Corp, Lima, OH | 42625 | The stand supports the maze platform top such that it is elevated above the floor (typically, 70-100 cm) to motivate the rodent to locate the escape cage. The stand can be constructed of any material. |
White noise | SleepMate Sound Conditioner, Marpac, Rocky Point, NC |
980A | Background noise may be used to block out peripheral acoustic cues that may confound Barnes Maze testing across trials and animals |
Light fixtures and 300-500 watt bulbs encased in aluminum shells. For example, Utilitech 500-watt halogen portable work lights. | Ace Hardware or Lowes | Bright lights provide a mildly aversive stimulus which motivate the rodent to locate the escape cage. The lights are generally suspended ~150 cm above the maze top. | |
Escape cage. For small rodents, this can be a polypropylene cage (27.8 x 7.5 x 13 cm). | Ancare, Bellmore, NY | N40 PP | The rat escape cage here was custom built and has a ramp leading into the escape cage. |
Opaque tube (rats only) (27 cm diameter; 23 cm height) with a piece of thick cardboard to cover the top. | The tube is placed in the center of the maze and the rat is placed into the tube from the top which is covered with the cardboard. A handle on the outside of the tube allows easier lifting of the tube, which then begins the trial. The tube can be constructed of any material, but should be opaque. | ||
High resolution video camera (e.g. Panasonic Digital Video Camera) | Panasonic, Secaucus, NJ | ICV19458 | The video camera is positioned overhead and records trials for later analysis. |
Extra- or intra-maze geometric cues made of high quality cardboard construction paper | Any office supply store, such as Staples. | These visual cues orient the animal within the maze environment, providing cues as to the spatial location of the escape cage; in rats, extra-maze cues on the walls work well, whereas in small rodents that require a wall around the maze, intra-maze cues must be used. | |
Black curtain to surround the maze (small rodents only) | Any fabric and crafts store, such as Jo-Ann Fabrics | A black curtain is used in small rodents (especially wild species, e.g. Peromyscus) to maintain attention within the maze confines. | |
70% ethanol | Fisher Scientific | BP2818-4 | After each trial, the maze top and escape cage are cleaned to eliminate potential odor cues for consecutively tested rodents. |
Tracking software program, such as Ethovision, and computer with appropriate video card and substantial (1 TB or more) hard-drive space. Alternatively, videos can be recorded directly to the computer for later analysis using a program such as Win TV (Hauppauge Computer Works, Inc.). | Noldus (Leesburg, VA) | Tracking software is required to analyze trials for latency to locate the escape cage, velocity, distance traveled, time spent resting, time spent moving, time spent in the correct versus incorrect quadrants, time spent around the escape hole, number of errors or entries into incorrect holes, and overall search strategy employed to find the escape cage. | |
External hard drives, such as Seagate or WD, with a minimum 1- 2 TB of memory | Any office supply store, such as Staples. | Videorecordings should be backed up in at least one separate location. | |
Videorecording program, e.g. WinTV program | Hauppauge Computer Works, Inc., Hauppauge, NY |
If tracking software is not available at the time of the testing, the trials should be video-recorded for later analysis |