Противоопухолевые комплексы металлов: синтез и цитотоксичности оценка по методу МТТ-анализ

Химиотерапия остается одним из основных курсов лечения, применяемых в клинике для различных раковых заболеваний, и, следовательно, огромное количество исследований проводится по всему миру с целью разработки новых и усовершенствованных противоопухолевых препаратов. Такие исследования в основном начинаются в химическом уровне, с проектирования и подготовки соединений, а затем биологической оценки цитотоксических свойств в пробирке. Жизнеспособность клеток может быть определена с помощью различных анализов, которые обеспечивают информацию о клеточной активности ^1-2.

Цисплатин является примером комплекса платины, который широко используется в качестве химиотерапевтического препарата, который считается эффективное лечение в основном для яичек и яичников ^3-4. Тем не менее, его узкий диапазон деятельности и серьезные побочные эффекты вызывают исследования других мощным комплексов переходных металлов ^5-8. В частности, титана (IV) и ванадий (V) комплексы показали обнадеживающие результаты высокой активности и уменьшениетоксичность ^9-16. Ti (IV) комплексы были первыми, чтобы войти клинические испытания после цисплатин из-за этих свойств, однако они не смогли испытания из-за трудностей разработки и гидролизного нестабильности. Существует, таким образом ток необходимость в разработке улучшенных производные этих комплексов металлов, которые могут сочетающих высокую противоопухолевую активность с водостойкость ^15,17-21.

Проблема в подготовке Ti (IV) и V (V) комплексы относится к гидролитической нестабильности реагентов-предшественников, поэтому инертная атмосфера должна быть сохранена. Получение (V) соединений Ti (IV) и V проводится в атмосфере _N2 или Ar условий в перчаточном боксе, или с использованием методов Шленка строки.

Один общий метод для оценки противораковой активностью на основе MTT (3 – (4,5-диметилтиазолил) -2,5-дифенилтетразолийбромид) анализ. Этот анализ является колориметрический жизнеспособность анализ, который был представлен в 1983 году Mosmann^22. Это очень хорошо изучены и характеризуется, и это считается весьма эффективным при оценке эффективности новых цитотоксических соединений из-за его точности, быстроты, и его способность быть применены на различных клеточных линиях. Это жизнеспособность анализ основан на изменении цвета молекулы МТТ, когда она подвергается воздействию жизнеспособных клеток. Измерение оптической плотности, которое пропорционально числу жизнеспособных клеток, а по сравнению с необработанными контрольными, позволяет оценку ингибирования роста клеток возможностей тестируемого соединения.

МТТ колориметрический анализ проводят в формате 96-луночного планшета ^23. Эти клетки могут потребовать предварительной инкубации в лунки перед добавлением испытуемого препарата. Времена предварительной инкубации может варьировать от 0-24 часов в зависимости от свойств клеточных линий. Клетки обычно воздействию препарата на 24-96 ч в зависимости от активности лекарственного средства. Раствор МТТ затем добавляют к обработанных клеток, где YELLМТТ вл снижается до фиолетового формазана различными митохондриальных и цитозольных ферментов, которые действуют в жизнеспособных клеток (фиг. 1) ^24. Молекула МТТ не уменьшается мертвых клеток или эритроцитов (метаболически неактивные клетки), клеток селезенки (покоящиеся клетки) и лимфоциты конканавалин А-стимулированной (активированные клетки) ^22. После 3-4 часов инкубации МТТ формазана выпадает в осадок. Формирование формазана начинается после 0,5 ч инкубации но для достижения оптимальных результатов лучше подвергать клетки МТТ в течение по крайней мере 3 ч. ^22. Следовательно, выращивание среду удаляли и формазана растворяют в органическом растворителе, предпочтительно изопропанол ^25, хотя ДМСО могут быть также использованы ^26. Ликвидация среды имеет решающее значение для достижения точных результатов, поскольку фенола красного, который широко распространен в среде роста, и осаждения белков может создавать помехи для измерения оптической плотности ^25. Когда FormaРаствор зан достигает однородной, оптическая плотность раствора измеряют с использованием микропланшет-ридера спектрофотометра. Поглощение при 550 нм прямо пропорциональна числу клеток в диапазоне 200-50,000 клеток на лунку, и таким образом очень малые количества клеток могут быть обнаружены ^22. Оптическую плотность указывает на количество жизнеспособных клеток, которые остались после обработки лекарственным средством и по сравнению с оптической плотности контрольных клеток, которые не подвергались воздействию препарата. Анализ результатов по соответствующим программным обеспечением обеспечивает (концентрация ингибирования; 50%) IC ₅₀ значения и их статистические ошибки на основе нескольких повторений измерения.

МТТ является широко распространенным в цитотоксичности исследований для скрининга новых противораковых соединений, благодаря своей точности и относительной простоты. Однако, когда с помощью МТТ-анализа, который зависел от ферментативной реакции, необходимо учитывать, что различные ингибиторы ферментов может повлиять на снижение МТТ ANг привести к ложным результатам ^27. Кроме того, МТТ не дает никакой информации о молекулярном механизме цитотоксической активности препарата ^2.