Summary

小鼠生殖道黏膜淋巴细胞分离

Published: September 03, 2012
doi:

Summary

淋巴细胞从小鼠生殖道隔离的一种有效的方式来进行说明。此方法利用酶消化和Percoll梯度分离,以允许有效地隔离。此技术是用于在其他物种中也适应

Abstract

粘膜表面,包括胃肠道,泌尿生殖道,呼吸道,进入门户网站的病原体,如病毒和细菌1。粘膜也电感的网站中的一个主机,以产生对病原体的免疫力,如Peyers在肠道中的补丁和在呼吸道的鼻相关的淋巴网状组织。这种独特的功能使黏膜免疫的宿主防御系统的一个重要参与者。许多研究都集中在胃肠道和呼吸道粘膜部位。然而,生殖黏膜部位出现了小调查。生殖道粘膜是性传播疾病(STD),包括细菌和病毒感染的主要感染部位。性传播疾病是当今世界面临的最严重的健康挑战之一。美国疾病控制和预防中心估计,有19万个新的传染病,每年在美国。 STDS成本,美国的医疗保健系统每年的170亿美元的2,个人成本更在近期和终身的健康后果。为了应对这一挑战,需要更深入的了解生殖黏膜免疫和分离淋巴细胞,这些研究是一个必不可少的组成部分。在这里,我们提出了一种方法,再现分离淋巴细胞小鼠女性生殖道的免疫学研究,可以修改为其他物种适应。下面描述的方法是基于在一个鼠标。

Protocol

1。去除生殖道安乐死鼠标采用批准的指引。低正中切口,并收回皮肤。 隔离和删除整个生殖道,由输卵管阴道口。 打开整个道纵向剪下来的。 良好的手术剪刀切下生殖道细小的碎片(<1毫米左右),一个培养皿完整的RPMI-10/EDTA(见下面的公式),并于125毫升容量瓶中,在室温下搅拌组织在磁力搅拌器上设置15分钟。此过程重复两次,然后将上清液,其中包含上皮细…

Discussion

在这个协议中,它展示了如何准备淋巴细胞小鼠生殖道,很容易掌握。在此过程中最关键的一点是维持细胞活力的保持将细胞置于冰上。从该方法的细胞产量取决于技术,处理技能,鼠标(幼稚或感染后的天)的感染状态,病原体(细菌,病毒,真菌)和部分的小鼠生殖道年审(输卵管,子宫,阴道内段或整个生殖道)。本集团及其他已出版了各种不同的淋巴细胞群的研究小鼠生殖道5-7。</sup…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我们要感谢美国国立卫生研究院的资金补助R01-AI026328(KAK)和R01-AI079004(KAK)。

Materials

Name Company Catalogue number
Collagenase Sigma Life Sciences C2139-1G
Percoll GE Healthcare Bio-Sciences 17-0891-01
RPMI1640 Gibco by Life Technologies 11875

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Citer Cet Article
Jiang, J., Kelly, K. A. Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa. J. Vis. Exp. (67), e4391, doi:10.3791/4391 (2012).

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