Summary

Étiquetage immunohistologique des microtubules dans dendrites des neurones sensoriels, trachées et les muscles dans la Drosophile Mur Corps Larve

Published: November 10, 2011
doi:

Summary

Pour comprendre comment les formes cellulaires complexes, comme les dendrites neuronales, sont atteints au cours du développement, il est important d'être en mesure de précision de dosage organisation des microtubules. Nous décrivons ici une méthode de marquage immunohistochimique robustes afin d'examiner l'organisation des microtubules des cellules dendritiques dendrites des neurones sensoriels arborisation, la trachée, les muscles et les autres<em> Drosophile</em> Tissus du corps larvaire mur.

Abstract

Pour comprendre comment les différences dans les formes cellulaires complexes sont atteints, il est important de suivre avec précision l'organisation des microtubules. Le mur de la drosophile corps des larves contient plusieurs types de cellules qui sont des modèles pour étudier des cellules et la morphogenèse des tissus. Par exemple trachées sont utilisées pour examiner une morphogenèse du tube, et l'arborisation dendritique (DA) des neurones sensoriels de la larve de drosophile sont devenus un système de primaires pour l'élucidation des généraux et des neurones spécifiques à la classe des mécanismes de différenciation dendritiques de 2-5 et une dégénérescence 6 .

La forme des branches des dendrites peut varier considérablement entre les classes de neurones, et même entre les différentes branches d'un seul neurone 7,8. Les études génétiques suggèrent que les neurones DA différentiel de l'organisation du cytosquelette peuvent sous-tendre les différences morphologiques en forme la branche dendritiques 4,9-11. Nous fournissons une méthode immunologique robuste à un étiquetagessay dans l'organisation des microtubules in vivo chez DA sensorielle tonnelle neurone dendrite (figures 1, 2, Film 1). Ce protocole illustre la dissection et immunomarquage du stade larvaire d'abord, un stade où les actifs excroissance sensorielle dendrites des neurones et l'organisation de branchement se produit 12,13.

En plus de coloration des neurones sensoriels, cette méthode permet d'obtenir l'étiquetage robuste de l'organisation des microtubules dans les muscles (Cinéma 2, 3), la trachée (figure 3, Film 3), et d'autres tissus de la paroi du corps. Il est précieux pour les chercheurs souhaitant analyser l'organisation des microtubules in situ dans la paroi du corps où l'étude des mécanismes de contrôle et que le tissu forme des cellules.

Protocol

1. Préparation des réactifs Remarques avant de commencer: la dissection et la coloration immunohistochimique sont effectués dans une chambre magnétique et la larve est coincé utilisant des broches insectes de forme spéciale. Des instructions détaillées sur la construction d'une chambre magnétique, et la préparation de ces broches peuvent être trouvés dans les références liées 14,15. En bref, un trou carré 1x1cm est coupé dans une feuille magnét…

Discussion

Pour comprendre comment des formes complexes cellulaires sont qu'elle atteint est important d'être en mesure de précision de dosage organisation des microtubules. Nous décrivons ici une méthode de marquage robuste immunohistologiques à l'organisation des microtubules dendritiques dosage des dendrites des neurones sensoriels arborisation. En plus de coloration des neurones sensoriels, cette méthode permet d'obtenir robustes coloration immunohistochimique de la trachée, muscles et autres tissus de l…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions RIKEN pour le financement. P10-Gal4 a été un cadeau genre d'Alain Vincent (Université Paul Sabatier, Toulouse, France).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue
number
Comments
(optional)
Forceps Dumont 11251-20  
Microscissors FST 15000-08  
Mouse anti-α-tubulin (Clone: DM1A) Sigma T9026 Dilution 1/1000
Mouse anti-Futsch (Clone: 22C10),
supernatant
Developmental
Studies
Hybridoma Bank
22C10 Dilution 1/1000
Rat anti-CD8 (Clone: 5H10) Caltag MCD0800 Dilution 1/1000
Alexa Fluor 488 anti-mouse IgG Invitrogen A-11001 Dilution 1/500
Cy3 anti-Rat IgG Jackson Immunoresearch 712-166-150 Dilution 1/200

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Citer Cet Article
Yalgin, C., Karim, M. R., Moore, A. W. Immunohistological Labeling of Microtubules in Sensory Neuron Dendrites, Tracheae, and Muscles in the Drosophila Larva Body Wall. J. Vis. Exp. (57), e3662, doi:10.3791/3662 (2011).

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