Die Optogenetik ermöglicht die Verwendung von Licht, um Neuronen zu manipulieren, die gentechnisch verändert sind, um bestimmte Opsine auszudrücken – lichtempfindliche Proteine, deren Lichtaktivierung eine Veränderung des Zustands des Neurons auslöst. Hier beschreiben wir einen optogenetischen Ansatz in Drosophila mit dem Opsin Channelrhodopsin2. Das Beispielprotokoll verfügt über einen Optogenetik-Assay, der die neuronale Schaltung hinter dem Fluchtverhalten der Fliege untersucht.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus de Vries und Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Generieren Sie Channelrhodopsin Fliegen Cross UAS-ChR2 fliegt mit dem Gal4 Treiber Ihrer Wahl, wir verwenden G105-Gal4, das in Foma-1 Neuronen im optischen Lappen ausgedrückt wird. Um die Möglichkeit einer visuellen Reaktion auf die Blaulichtstimulation zu eliminieren, befinden sich beide Fluglinien i…
Representative Results
Abbildung 1: Experimentelle Einrichtung zeigt die Plattform mit dem vertikalen Halter und den vier Kühlmittel-Hosingarmen, die Kühlkörper mit LED-Arrays halten. (A) Die Einrichtung unter Umgebungsbeleuchtung. (B) Die Einrichtung, wenn die LEDs beleuchtet werden. (C) Eine Nahansicht einer Tri-Star LED auf dem Kühlkörper. (D) Eine Nahaufnahme des Tri-S…
Materials
Reagent
All-trans Retinal
Advance Scientific Chemical Inc
R3041
Equipment
Heat Sink 9.2 C/W
Luxeonstar
LPD30-30B
30 mm square X 30 mm high
Carclo 18° Tri-Lens
Luxeonstar
10507
Blue Rebel LED on Tri-Star Base
Luxeonstar
MR-B0030-20T
470 nm, 174 lm @ 700 mA.
700 mA BuckPuck DC Driver
Luxeonstar
3021-D-E-700
Wiring Harness for BuckPuck Driver
Luxeonstar
3021-HE
Pre-cut thermal adhesive tape
Luxeonstar
LXT-S-12
20 mm Hex Base
Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID
McMaster-Carr
5307K49
Snap-Loc Coolant Hose Connector
McMaster-Carr
5307K39
¼" NPT Male
Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply