ניתוח בלוטת הלימפה הזחל: בידוד האיבר המייצר המוציטה Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: ריימלס, T. A. ו Pfleger, C.M. שיטות לבחון את בלוטת הלימפה ואת המוציטים בזחלים Drosophila. ג’יי ויס אקספ. (2016).
סרטון זה מתאר את בלוטת הלימפה Drosophila – האתר העיקרי של hematopoiesis בזחל הזבוב – ומציג פרוטוקול לדוגמה כדי לנתח ולהרכיב את האיבר עבור אימונוהיסטוכימיה והדמיה פלואורסצנטית.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך ריימלס ו Pfleger, שיטות לבחון את בלוטת הלימפה ואת המוציטים בזחלים Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. אימונוהיסטוכימיה של בלוטת הלימפה הזחלית שים לב: בלוטת הלימפה ממוקמת כשליש מהקצה החיצוני של זחל מעט מתחת למוח בצד הגבי. (ראה חץ <…
Representative Results
איור 1: במלניזציה של תאי קריסטל Vivo. A) זחלים הונחו בנפרד בצינורות PCR לפני החימום. חצים אדומים מציינים זחלים שאינם בתחתית הצינורות. ב) דפוס מלניזציה טיפוסי של תאי גביש לאחר החימום, אשר לפעמים חושף את בלוטת הלימפה (חץ…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Citer Cet Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).