Dissecção da glândula linfática larval: Isolando o Órgão Produtor de Hemócitos de Drosophila

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Reimels, T. A. e Pfleger, C.M. Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Larvas Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve a glândula linfática drosophila — o local principal da hematopeiese na larva da mosca — e mostra um protocolo de exemplo para dissecar e montar o órgão para imunohistoquímica e imagens fluorescentes.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Reimels e Pfleger, Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Imunohistoquímica larval linfática da glândula NOTA: A glândula linfática está localizada aproximadamente um terço de comprimento da extremidade anterior de uma larva ligeiramente abaixo do cérebro no lado dorsal. (Ver seta na Figura 1</str…

Representative Results

Figura 1: Melanização de células de cristal vivo. A) As larvas foram colocadas individualmente em tubos PCR antes do aquecimento. Setas vermelhas indicam larvas que não estão na parte inferior dos tubos. B) Um padrão típico de melanização de células cristalinas após o aquecimento, que às vezes revela a glândula linfática (seta; lado dorsal mostrado, anterior é esqu…

Materials

PBS tablets MP Biomedicals 2810305
dissecting dish Corning 7220-85
microcentrifuge tube Denville C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit Krayden (distributed through Fisher) NC9644388 (Fisher catalog number) Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope Morrell Instruments (Nikon distributor) mna42000, mma36300 Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe VWR 82003-820
forceps Electron Microscopy Sciences 72700-DZ
p200 pipette Eppendorf 3120000054
formaldehyde Fisher BP531-500
Triton Fisher BP151-500
Tween 20 Fisher BP337-500
bovine serum albumin Rocky Mountain Biologicals BSA-BSH-01K
normal goat serum Sigma G9023-10ML
normal donkey serum Sigma D9663-10ML
200 proof ethanol VWR V1001
N-propyl gallate MP Biomedicals 102747
glycerol VWR EM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) Fisher 62248
microscope cover glass, 18 mm circular Fisher 12-545-100
glass microscope slides Fisher 22-034-980
24-well plate Corning 351147
disposable transfer pipet Fisher 13-711-9AM
fluorescence microscope Zeiss Axio Imager.Z1

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Citer Cet Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).

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