Dépistage des modifications génomiques : une méthode pour identifier les mutants générés par CRISPR à Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Du, L., et coll. An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing. J. Vis. Exp. (2018).
Cette vidéo décrit une méthode de dépistage pour identifier les mouches transgéniques de Drosophila, dont le génome a été modifié à l’aide de CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 est un puissant outil d’édition du génome qui a révolutionné la façon dont les scientifiques peuvent manipuler le génome d’un organisme. Dans le protocole de l’exemple, nous verrons comment identifier les mutants générés par CRISPR, dans lesquels une insertion d’une séquence de transactivation remplace le premier exon du gène sans branche (bnl),créant ainsi une ligne pilote spécifique au gène bnl, bnl-LexA.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Du et coll.,An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila par Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018). 1. Génétique et dépistage des mouches (figure 1 et figure 2) Lorsque les embryons injectés se développent en adultes, traverser chaque G0 mouches à des mouches équilibreurs. Sélectionnez l’ équilibreur approprié pour le chromosome contenant l’allèle ciblé….
Representative Results
Figure 1 : Aperçu du flux de travail pour l’édition du génome à base de CRISPR/Cas9 pour générer un système de transcription binaire. La durée approximative requise pour chaque étape est indiquée. S’il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre. <img alt="Figur…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Biologie moléculaire |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Biologie moléculaire |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Biologie moléculaire |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Biologie moléculaire |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Biologie moléculaire |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Biologie moléculaire |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Citer Cet Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).