הקרנה לשינויים גנומיים: שיטה לזיהוי מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR בדרוזופילה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: Du, L., ואח ‘. אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות ב Drosophila על ידי עריכת הגנום. ג’יי ויס אקספ. (2018).
סרטון זה מתאר שיטת הקרנה לזיהוי זבובי דרוזופילה מהונדסים, שהגנום שלהם שונה באמצעות CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 הוא כלי רב עוצמה לעריכת גנום שחולל מהפכה באופן שבו מדענים יכולים לתפעל את הגנום של האורגניזם. בפרוטוקול הדוגמה, נראה כיצד לזהות מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR, שבהם הכנסה של רצף טראנסאקטיביזציה מחליפה את האקסון הראשון של הגן ללא ענף (bnl), ובכך יוצרת קו נהג ספציפי לגן bnl, bnl-LexA.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Du et al., אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות בדרוסופילה על ידי עריכת הגנום, J. Vis. Exp. (2018). 1. טיסה וגנטיקה והקרנה (איור 1 ואיור 2) כאשר העוברים המוזרקים מתפתחים למבוגרים, חוצים כל זבוב G0 כדי לאזן זבובים. בחר …
Representative Results
איור 1: מבט כולל על זרימת עבודה לעריכת גנום בתיווך CRISPR/Cas9 כדי ליצור מערכת שעתוק בינארית. משך הזמן המשוער הנדרש עבור כל שלב מצוין. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. <p class="jove…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Biologie moléculaire |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Biologie moléculaire |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Biologie moléculaire |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Biologie moléculaire |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Biologie moléculaire |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Biologie moléculaire |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Citer Cet Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).