Malpighian Tubule Dissectie van een Volwassen Vlieg: Het isoleren van een Osmoregulatory en Excretory Orgaan
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Rossano, A. J. en Romero, M. F. Optical Quantification of Intracellular pH in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia with a Fluorescent Genetically-encoded pH Indicator. J.Vis. Exp. (2017).
Dit artikel beschrijft de dissectie van de voorste Malinese tubuli (MT) van een vrouwelijke Drosophila-vlieg en een voorbeeldprotocol van Rossano et al. (2017) waarin de MT’s worden voorbereid op live beeldvorming in een perfusiekamer.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Rossano en Romero, Optical Quantification of Intracellular pH in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia with a Fluorescent Genetically-encoded pH Indicator, J. Vis. Exp. (2017). 1. Voorbereiding van Poly-L-Lysine Dia’s Teken een rand van 40 x 20 mm met een hydrofobe PAP-pen rond de bovenkant van standaard dia’s van 75 x 25 mm en zet opzij om 15 minuten te drogen bij RT. Gebruik grote coverslips als de dia’s niet compatib…
Representative Results
Figuur 1: Het fabriceren van glazen staven voor het hanteren van Malinese tubuli.A – E. Proces van verwarmen en trekken van een glazen staaf om een taps toelopende en hoek te produceren die geschikt is voor het hanteren van ST’s. Pijlen geven de richting en de omvang van de kracht aan die moet worden toegepast. F. Foto van een op de juiste manier vervaardigd glasgereedschap. Schaalbal…
Materials
| Poly-L-Lysine (PLL) Solution | Sigma-Aldrich | P4832 | Store at 4 °C, can be reused. |
| Adhesive Perfusion Chamber Covers, adhesive size 1 mm, chamber diameter × thickness 9 mm × 0.9 mm, ports diameter 1.5 mm | Sigma-Aldrich | GBL622105 | Can be substituted as needed to match perfusion system. |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | Available from multiple vendors. |
| Helping Hands Soldering Stands | Harbor Freight Tools | 60501 | Available from multiple vendors. |
| Schneider's Medium | Fisher Scientific | 21720024 | Store at 4 °C in sterile aliquots. |
| #5 Inox Steel Forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | Can be substituted based on experimenter comfort. |
| 35 x 10 mm polystyrene Petri dish | Corning Life Sciences | Fisher Scientific 08-757-100A | Exact brand and size are unimportant. |
| 75 x 25 mm Microscope Slides | Corning Life Sciences | 2949-75X25 | Exact brand and size can vary as long as perfusion wells are compatible. |
| Filimented Borosilicate Capillary Glass, ID 1.5 mm, OD 0.86 mm, thickness 0.32 mm | Warner Instruments | 64-0796 | Filiment not necessary, glass can be substituted to match perfusion tubing and perfusion wells. |
| Vacuum Silicone Grease | Sigma-Aldrich | Z273554 | Available from multiple vendors. |
| Glass rods, 5 mm diameter | delphiglass.com | 9198 | Exact size is personal preference, multiple vendors available |
| PAP Hydrophobic Pen | Sigma-Aldrich | Z377821 | Available from multiple vendors. |
| Sealing Film | Sigma-Aldrich | P7668 | Available from multiple vendors. |
| 15 mL Falcon tube | BD Falcon | 352096 | Available from multiple vendors. |
| 50 mL Falcon tube | BD Falcon | 352070 | Available from multiple vendors. |
| Dissecting Stereoscope | Zeiss | Discovery.V8 | Any dissecting stereoscope can be used. |
| UAS-pHerry transgenic Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Rossano et al., 2017 | |
| capaR-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Terhzaz et al., 2012 | |
| c724-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Sozen et al., 1997 | |
| Single-edged Carbon Steel Razor Blade | Electron Microscopy Sciences | 71960 | Available from multiple vendors. |
| Microscopy Slide Folder | Fisher Scientific | 16-04 | Available from multiple vendors. |
| Bunsen Burner | Fisher Scientific | 50-110-1231 | Available from multiple vendors. |
| Polystrene Drosophila Rearing Vials with Flugs | Genesee Scientific | 32-109BF | Comparable items can be substituted. |
| 2.5 L Laboratory Ice Bucket | Fisher Scientific | 07-210-129 | Available from multiple vendors. |
| 200 uL barrier pipette tips | MidSci | AV200 | Available from multiple vendors. |
| 200 μL variable volume pipette | Gilson Incorporated | PIPETMAN P200 | Available from multiple vendors. |
Citer Cet Article
Malpighian Tubule Dissection from an Adult Fly: Isolating an Osmoregulatory and Excretory Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20102, doi: (2023).