خلية إعداد كتلة من العينة مع غلبة علم الخلايا من خلايا منفردة غيوم
Summary
Shidham في طريقة لإعداد كتل الخلية مع AV – علامة من عينات الخلايا التي تحتوي على خلايا متفرقة فرادى وجماعات زنزانة صغيرة.
Abstract
هذا الفيديو يوضح طريقة Shidham لإعداد كتل خلية من خلايا السائل على العينات التي تحتوي على الخلايا العنقية متفرقة فرادى وجماعات زنزانة صغيرة. هذا الأسلوب يستخدم HistoGel (الحرارية العلمية) مع المعدات المختبرية التقليدية.
استخدام أبواب الزنزانات هو أداة قيمة المساعدة لتقييم الجهاز التناسلي للمرأة غير علم الخلايا. أنها تمكن اختصاصي الباثولوجيا الخلوية لدراسة تفاصيل إضافية عينة المورفولوجي بما في ذلك بنية الآفة. الأهم من ذلك ، فهي تسمح لتقييم دراسات ثانوية مثل كيمياء سيتولوجية مناعية ، واختبارات التهجين في الموضع (FISH / CISH) في الموقع وتفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). وقد تم معظمها التقنيات التقليدية لإعداد كتلة الخلية المطبقة على عينات الخلايا غير الجهاز التناسلي للمرأة ، وعادة لالانصبابات السوائل في الجسم والغرامة الخزعات إبرة الطموح.
عينات السائل العنقية القائمة على أقل نسبيا من نظرائهم الخلوية غير الجهاز التناسلي للمرأة مع العديد من الخلايا الفردية المتناثرة. وبسبب هذا ، الخلوية كافية داخل زنزانة المقاطع من الصعب تحقيقه. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للكتلة histotechnologist sectioning لا تصور المستوى الذي كانت الخلايا في أعلى تركيز. وبالتالي ، فمن الصعب رصد المستوى المناسب الذي يمكن اختيار المقاطع التي ستنقل إلى الشرائح الزجاجية للاختبار. ونتيجة لذلك ، قد يكون غاب عن المنطقة من كتلة الخلايا مع الخلايا في المصالح ، سواء في الماضي أو عن طريق قطع لا قطع عميقة بما فيه الكفاية. البروتوكول الحالي لأسلوب Shidham عناوين هذه المسائل. على الرغم من هذا البروتوكول هو موحد وذكرت لعينات السائل الجهاز التناسلي للمرأة على الخلايا ، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على غير الجهاز التناسلي للمرأة عينات السوائل مثل الانصباب ، جبعة ، brushings ، الخ محتويات الكيس من أجل تحسين نوعية المواد التشخيصية في أقسام كتلة الخلية.
Protocol
Discussion
كتل الخلية هي أداة قيمة لتقييم عينات من الخلايا المختلفة (1). الأهم من ذلك ، بالإضافة إلى التفاصيل المعمارية للعينة ، وكتل الخلية تسمح لتقييم دراسات ثانوية مثل كيمياء سيتولوجية مناعية ، فلوري / مولد اللون اختبارات التهجين في الموضع (FISH / CISH) وPCR في الموقع. ووصف مجموعة متنوعة من الأساليب لإعداد كتلة الخلية. ومع ذلك ، فإن معظم هذه هي مناسبة لعينات الخلايا غير الجهاز التناسلي للمرأة والتي تحتوي على العديد من الخلايا نسبيا وmicrofragments مع الأنسجة مثل aspirates FNA وبعض السوائل المصلية مثل الانصبابات (1،3،4،5).
لأن كتل الخلايا في المقام الأول توفير الفرصة لتقييم immunocytochemical ، ينبغي تجهيزها يفضل أن يكون مشابهة لتلك الأنسجة الفورمالين الثابتة (FFPE) جزءا لا يتجزأ من البرافين. في النهاية تتم مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها بعد تقييم immunocytochemical من أبواب الزنزانات لذوي الكتابات المنشورة في الغالب على أداء الفروع FFPE الأنسجة. أي تعديلات في البروتوكول تسوية محتملة ، وتبطل صحة النتائج التي تم الحصول عليها على معالجتها من خلال كتل الخلية مثبتات مختلفة وتسلسل كاشف أخرى من تلك المستخدمة لFFPE الروتينية. قد تكون بعض التقنيات التجارية لديها عيب في معالجة عن طريق بروتوكول التعرض لتثبيتي التعرض كاشف الأخرى.
أساليب مختلفة لإعداد كتلة الخلية متاحة للعينات مع كمية كبيرة من الرواسب وشظايا الأنسجة. أساسا ، ودعمت من قبل بعض الرواسب يتركز جل أو مبدأ التخثر. مضمن ثم الزر المناورة في مثل البارافين بعد تجهيز العينات الأمراض الجراحية / الخزعات.
وتشمل المواد الهلامية المستخدمة الجيلاتين ، أجار ، الفيبرينوجين / ثرومبين البلازما ، والمواد الهلامية التجارية الأخرى مثل الزئبق. أساليب تختلف من تركيز التكوير بسيطة من الرواسب بواسطة الطرد المركزي للتركيز على طول خلايا أنواع مختلفة من الأغشية. ومن الأمثلة على ذلك : Milipore ، collodin (سيلويدين) أكياس أو كشط الخلايا من الخلايا مسحات على شرائح زجاجية (1). قمنا بتقييم أيضا مجموعة متنوعة من المواد الهلامية التي تحاول مجموعات مختلفة من أجار والجيلاتين. تحقيق أي من المجموعات والاتساق الشركة بما فيه الكفاية للحصول على القرص المناورة بسهولة من هلام طدت مع الخلايا المدمجة من العينة في قطعة واحدة. وأظهرت HG المناسبة والتناسق في تجربتنا نتائج immunostaining HG على أبواب الزنزانات كانت ممتازة.
تقوم خلايا السائل (LBC) لعينات الخلايا العنقية عادة ما تكون أقل الخلوية من غير الجهاز التناسلي للمرأة العينات على النحو المذكور أعلاه. إضافة إلى ذلك ، LBC العينات تحتوي على الجهاز التناسلي للمرأة في الغالب فردية متناثرة تقشر الخلايا السطحية من الغشاء المخاطي العنقية. نتيجة لهذا ، قد لا الخلوية المناسبة داخل أقسام كتلة الخلية يمكن تحقيقه دون اتباع نهج خاص. وهذه منتشرة منفردة المكونات الخلوية في كتلة لا يمكن أن ينظر إليه من قبل histotechnologist خلال قطع الفرع ، لا يمكن أن المستوى الذي تبدأ الخلايا التي تظهر في المقاطع موضع تقدير ، وربما غاب عن أن يكون ، إما عن طريق خفض الماضية على المستوى مع معظم الخلايا أو لا قطع عميقة بما فيه الكفاية في المستوى مع أعلى تركيز من الخلايا العينة (الشكل 4). بروتوكول Shidham عناوين كل من هذه القضايا به نيافة تضمين أجهزة المختبرات والمتوسطة والتقليدية (2) (الشكل 2).
هذا البروتوكول يتضمن الملامح الرئيسية التالية اثنين (الشكل 1) :
- التركيز والمواءمة بين خلايا منفردة متناثرة في الطائرة الضيقة المجاورة وموازية لسطح القطع من كتلة الخلية (الشكل 5).
- إدراج مثل منارة الظلام AV – علامة ومعلما. هذا أمر بالغ الأهمية لتحقيق الميزات التالية :
- تحديد ورصد المستوى الذي تتركز الخلايا في زنزانة ، والتعرض للصوة وقاتم اللون يسلط الضوء على المستوى الذي يتوقع معظم خلايا منفردة متناثرة في كتلة الخلية لتكون موجودة (الشكل 4). وهذا ما يمنع وovercutting (قطع الماضية على المستوى مع معظم الخلايا) أو تضعف (وليس قطع عميق بما فيه الكفاية في المستوى مع أعلى تركيز عينة من الخلايا) في لكتلة الخلايا وتسمح اختيار المقاطع من مستوى في زنزانة مقابلة مع أعلى تركيز من الخلايا.
- وصوة داكنة اللون في الفروع أيضا بمثابة نقطة مرجعية لدراسة وتحديد بالضبط نفس الخلايا في أقسام مختلفة من المسلسل كتلة الخلية على الشرائح المختلفة (الشكل 4). هذا أمر بالغ الأهمية ، بينما تفسير وتقييم خصائص تنسيق immunoprofile هذه الخلايا سيما عن طريق نهج SCIP اتباع نفس الخلايا في أقسام مختلفة (6،7).
على الرغم من أووص البروتوكول الموحد والإبلاغ عن العينات السائلة على خلايا عنق الرحم ، ويمكن أيضا استخدامه لتعزيز الغلة تشخيص العديد من العينات غير الجهاز التناسلي للمرأة الأخرى مثل انصباب السوائل ، جبعة ، brushings ، الخ محتويات الكيس وبالإضافة إلى ذلك علامة AV تسهل تحسين تطبيق نهج SCIP خلال التقييم المناعى من أبواب الزنزانات من هذه العينات. ويمكن الاستعاضة عن تضمين المتوسطة بواسطة كواشف أخرى مع بعض التعديلات المناسبة على الخطوات ذات الصلة. يمكن استبدال HG بواسطة البلازما (الفبرينوجين) أن تبلور بواسطة ثرومبين في درجة حرارة الغرفة (1).
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر كريس شارتراند ، HT (ASCP) ليدل على المقطع قطع من كتلة الخلية مع علامة AV.
References
- Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , .
- Varsegi, G., D’Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology – Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. , 97a-97a (2009).
- Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens. Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).
- Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy. CytoJournal. 5, 3-3 (2008).
- Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study. Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).
- Atkinson, B. F., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
- Shidham, V. B., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids. , (2007).
