Denne studien presenterer en detaljert prosedyre for å utføre enkeltmolekylfluorescensresonansenergioverføringseksperimenter (smFRET) på G-proteinkoblede reseptorer (GPCR) ved bruk av stedsspesifikk merking via unaturlig aminosyre (UAA) inkorporering. Protokollen gir en trinnvis veiledning for smFRET-prøvepreparering, eksperimenter og dataanalyse.