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Aplicação de CRISPR Interference (CRISPRi) para Silenciamento genético em espécies patogênicas de Leptospira
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Application of CRISPR Interference (CRISPRi) for Gene Silencing in Pathogenic Species of Leptospira

Aplicação de CRISPR Interference (CRISPRi) para Silenciamento genético em espécies patogênicas de Leptospira

DOI:
10.3791/62631-v

•

14:49 min

•

August 14, 2021

•

, , ,
1Infectious Bacterial Diseases Research Unit, National Animal Disease Center, Agricultural Research Service,United States Department of Agriculture, 2Laboratório de Desenvolvimento de Vacinas,Instituto Butantan

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 02:56Protospacer Definition and Plasmid Construction
  • 04:24Leptospira Transformation by Conjugation
  • 09:35Colony Selection and Transconjugant Growth and Validation
  • 13:01Representative Results
  • 13:51Conclusions

Summary

Traducción Automática

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Aqui, é descrita a aplicação da interferência CRISPR (CRISPRi) para silenciamento genético específico em espécies de Leptospira. As células leptospira são transformadas pela conjugação com plasmídeos expressando dCas9 (catalyticamente "morto" Cas9) e um RNA de guia único (sgRNA), responsável pelo emparelhamento base ao alvo genômico desejado. São apresentados métodos para validar o silenciamento genético.

Tags

CRISPR InterferenceCRISPRiGene SilencingLeptospiraPathogenic SpeciesHornsby-Alt-Nally MediaLeptospirosisGenetic ToolsDCas9Single-guide RNAIn Vitro ResearchVaccine Development

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