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Uso de proteínas de fusión recombinantes en una plataforma de ensayo fluorescente proteasa y su renaturalización en gel
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Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation
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Uso de proteínas de fusión recombinantes en una plataforma de ensayo fluorescente proteasa y su renaturalización en gel

DOI:
10.3791/58824-v

•

19:23 min

•

January 16, 2019

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine,University of Debrecen, 2Biotechnology Research Department,Gedeon Richter Plc

Capítulos

  • 00:00Título
  • 01:05Generation of the Substrate-coding Expression Plasmids
  • 02:16Expression of the Fluorescent Substrates
  • 03:35Cell Disruption
  • 04:26Ni-NTA Magnetic Agarose Bead-based Protease Assay
  • 12:39PAGE Analysis
  • 14:41Representative Results
  • 18:29Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Aquí, presentamos el procedimiento detallado de una plataforma de ensayo de proteasa recientemente desarrollado utilizando N-terminal hexahistidine/maltosa-proteína y sustratos recombinantes fusionado a la proteína fluorescentes Unidos a la superficie de níquel nitrilotriacético perlas de agarosa magnética ácido. Un posterior análisis en gel de las muestras de ensayo separados por electroforesis dodecyl del gel del sulfato-poliacrilamida del sodio también se presenta.

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Recombinant Fusion ProteinsFluorescent Protease AssayIn-gel RenaturationHIV-1 ProteaseHigh-throughput ScreeningFluorescence-based AssayProtein ExpressionCleavage SiteBL21(DE3) CellsPlasmid Construction

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