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Reação em Cadeia da Polimerase Digital de Gota Única para Detecção Abrangente e Simultânea de Mutações em Regiões de Hotspot
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JoVE Revista Genética
Single Droplet Digital Polymerase Chain Reaction for Comprehensive and Simultaneous Detection of Mutations in Hotspot Regions

Reação em Cadeia da Polimerase Digital de Gota Única para Detecção Abrangente e Simultânea de Mutações em Regiões de Hotspot

DOI:
10.3791/58051-v

•

08:23 min

•

September 25, 2018

•

, , , , , ,
1Circulating Tumor Biomarkers Laboratory, SiRIC, Translational Research Department,Institut Curie, PSL Research University, 2CNRS UMR144,Institut Curie, PSL Research University, 3Department of Medical Oncology,Institut Curie, PSL Research University, 4University Versailles Saint-Quentin-en-Yvelines, 5University Paris Descartes, 6Inserm U830,Institut Curie, PSL Research University

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:48Blood Collection and Plasma Storage
  • 02:04cfDNA Extraction
  • 04:45ddPCR Mix Preparation
  • 05:46Droplet Generation
  • 06:25PCR Amplification
  • 07:06Results: KRAS and EGFR Drop-off ddPCR Assays
  • 07:50Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar com precisão a múltiplas alterações genéticas de uma região de destino em uma única reação usando ddPCR de entrega e um único par de testes de hidrólise.

Tags

Single Droplet Digital PCRCirculating Tumor DNAMutation DetectionHotspot RegionsCancer DiagnosisAbsolute QuantificationMolecular AnalysisQPCR AlternativePlasma ExtractionProteinase KLysis BufferSilica MembraneVacuum Pump

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