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Bioingeniería
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使用CRISPR并发剂的小鼠小肠组织中多基因敲除的方案
JoVE Revista
Bioingeniería
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JoVE Revista
Bioingeniería
A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer
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使用CRISPR并发剂的小鼠小肠组织中多基因敲除的方案
DOI:
10.3791/55916-v
•
11:53 min
•
July 12, 2017
•
Alessandra Merenda
2
,
Amanda Andersson-Rolf
2
,
Roxana C. Mustata
,
Taibo Li
,
Hyunki Kim
,
Bon-Kyoung Koo
2
1
Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute
,
University of Cambridge
,
2
Department of Genetics
,
University of Cambridge
,
3
Department of Pathology
,
Yonsei University College of Medicine
Capítulos
00:05
Título
00:50
Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
03:40
Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
05:28
Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
08:08
Electroporation
10:36
Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
11:24
Conlcusion
Summary
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Traducción Automática
该协议描述了将多个单个引导RNA克隆到一个引导RNA并行载体中的步骤,其特别用于使用CRISPR / Cas9技术创建多基因敲除。肠组织中双重敲除的产生显示为该方法的可能应用。
Tags
CRISPR-concatemer
Multiple Gene Knockout
Mouse Small Intestinal Organoids
CRISPR
Guide RNAs
Electroporation
Simultaneous Knockout
Loss Of Function Studies
Parallel Compensation
Cloning
Bbs1 Shuffling Reaction
Three GRNA Concatemer
Four GRNA Concatemer
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