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使用CRISPR并发剂的小鼠小肠组织中多基因敲除的方案
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A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer
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使用CRISPR并发剂的小鼠小肠组织中多基因敲除的方案

DOI:
10.3791/55916-v

•

11:53 min

•

July 12, 2017

•

, , , , ,
1Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, 2Department of Genetics,University of Cambridge, 3Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Capítulos

  • 00:05Título
  • 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
  • 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
  • 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
  • 08:08Electroporation
  • 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
  • 11:24Conlcusion

Summary

Traducción Automática

Traducción Automática

该协议描述了将多个单个引导RNA克隆到一个引导RNA并行载体中的步骤，其特别用于使用CRISPR / Cas9技术创建多基因敲除。肠组织中双重敲除的产生显示为该方法的可能应用。

Tags

CRISPR-concatemerMultiple Gene KnockoutMouse Small Intestinal OrganoidsCRISPRGuide RNAsElectroporationSimultaneous KnockoutLoss Of Function StudiesParallel CompensationCloningBbs1 Shuffling ReactionThree GRNA ConcatemerFour GRNA Concatemer

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