Mehr als die Hälfte der Proteine sind kleine Proteine (Molekularmasse <200 kDa), die herausfordernd sind sowohl für Elektronenmikroskop Bildgebung und dreidimensionale Rekonstruktionen. Optimierte negative Färbung ist eine robuste und Hochdurchsatz-Protokoll, um einen hohen Kontrast und eine relativ hohe Auflösung (~ 1 nm) Bilder von kleinen asymmetrische Proteine oder Komplexe unter verschiedenen physiologischen Bedingungen zu erhalten.