Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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जिगर सबसे कैंसर के लिए एक माध्यमिक मेटास्टैटिक साइट है। मेटास्टेसिस का अध्ययन करने के लिए, हम कैंसर कोशिकाओं को पोर्टल नस में इंजेक्ट कर सकते हैं, जो शरीर के अन्य हिस्सों से जिगर तक रक्त ले जाता है।
एक एनेस्थेटाइज्ड माउस को एक रीढ़ की स्थिति में रखकर शुरू करें। क्लोरहेक्सीडीन और अल्कोहल का उपयोग करके नंगे पेट क्षेत्र को स्टरलाइज करें। माइक्रो कैंची का उपयोग करना, आंतरिक अंगों को नुकसान पहुंचाए बिना जानवर की बाईं ओर पसलियों और चौथी स्तन ग्रंथि के बीच एक चीरा बनाएं।
चीरा के पास बाँझ नमकीन में भिगोए गए एक गॉज पैड रखें। पोर्टल नस प्रकट करने के लिए एक बाँझ कपास झाड़ू का उपयोग करके आंत को धीरे-धीरे खींचें, और इसे धुंध पर रखें। सूखने से रोकने के लिए अंगों को धुंध पैड से ढक दें। सिरिंज सुई युक्त फ्लोरोसेंटी लेबल कैंसर कोशिकाओं को पोर्टल नस में डालें और धीरे-धीरे कोशिकाओं को इंजेक्ट करें। कोशिकाओं के बैकफ्लो को रोकने और ध्यान से सुई को हटाने के लिए कुछ सेकंड तक प्रतीक्षा करें।
इंजेक्शन के बाद, कैंसर कोशिकाएं आमतौर पर साइनसॉयड में यात्रा करती हैं और मेटास्टेसाइज करने के लिए पोर्टल ट्रायड के पास हेपेटोसाइट्स में आक्रमण करती हैं। अंगों को वापस पेट की गुहा में रखें और चीरा लगाइए। उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम लिवर को स्तन कैंसर मेटास्टेसिस का अध्ययन करने के लिए पोर्टल नस इंजेक्शन का प्रदर्शन करेंगे।
प्रक्रिया शुरू करने से पहले, 10% ब्लीच के साथ सर्जिकल क्षेत्र की सभी सतहों को मिटा दें। इंजेक्शन से एक घंटे पहले, दर्द प्रबंधन के लिए एनाल्जेसिया के १०० माइक्रोलीटर के साथ 8 से 15 सप्ताह पुरानी BALB/c महिला चूहों का इलाज करें । जानवर की आंखों पर मरहम लगाएं। फिर, माउस को रीढ़ की स्थिति में रखें और घुम गई चुटकी द्वारा स्मेशन के उचित स्तर की पुष्टि करें।
इसके बाद, पूंछ सहित जानवर के सर्जिकल और आसपास के क्षेत्रों को कीटाणुरहित करें, जिसमें तीन बारी बाँझ धुंध से लथपथ 2% क्लोरहेक्सिडिन वाइप्स और दो अल्कोहल प्रेप पैड वाइप्स शामिल हैं। पिछले क्लोरहेक्सिडीन वाइप के बाद, मुंह के बाईं ओर औसत और धनु मैदानों के बीच त्वचा में 1 इंच का चीरा बनाने के लिए एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करें, पसलियों के ठीक नीचे शुरू करें और चौथे इंजिनियल स्तन ग्रंथि टीट के ऊपर समाप्त हों, इसके बाद पेरिटोनम के माध्यम से एक इंच का चीरा।
अब, कोशिका समाधान को फिर से खर्च करने के लिए ट्यूमर कोशिकाओं को कई बार ऊपर और नीचे पिपेट करें, और कोशिकाओं के 10 माइक्रोलीटर के साथ 32 गेज सुई से लैस 25 माइक्रोलीटर हटाने योग्य सुई सिरिंज लोड करें। जब तक कोशिकाएं सुई की नोक पर न हों तब तक प्लंजर को दबाना और प्लंजर इंजेक्शन के लिए उपयुक्त मात्रा में है। किसी भी बाहरी ट्यूमर कोशिकाओं को हटाने के लिए एक बाँझ शराब पैड के साथ भरी हुई सुई के बाहर पोंछ, सुई चिपक जाती से बचने के लिए ध्यान रखना।
फिर, संदंश के साथ चीरा के औसत पक्ष की त्वचा और पेरिटोनियल अस्तर को पकड़े हुए, बड़ी और छोटी आंतों को बाँझ खारे में भिगोने वाले बाँझ गॉज़ पर ध्यान से स्थानांतरित करने के लिए बाँझ कपास झाड़ू का उपयोग करें। आंतरिक नमी और बंध्यता बनाए रखने के लिए खारा लथपथ धुंध में आंतरिक अंगों को कवर करें। जब पोर्टल नस दिखाई दे रही है, तो एक सहायक धीरे-धीरे आंतों को बाँझ कपास झाड़ू के साथ पोर्टल नस को बेनकाब करने के लिए रास्ते से बाहर रखें और पोर्टल नस में सुई 3 से 5 मिलीमीटर डालें, लगभग 10 मिलीमीटर जिगर के नीचे 5 डिग्री कोण से कम पर, बेवेल साइड अप करें।
धीरे-धीरे ट्यूमर कोशिकाओं की पूरी मात्रा इंजेक्ट करें, जिससे रक्त को नस से बाहर ट्यूमर कोशिकाओं के बैकफ्लो से बचने के लिए कई सेकंड के लिए सुई सिर के पिछले प्रवाह की अनुमति मिल सके।
चूंकि पोर्टल नस में उचित दृश्य, पहुंच और इंजेक्शन आवश्यक है, इसलिए यह सुनिश्चित करने के लिए समय लें कि इंजेक्शन के प्रयास से पहले सुई के संबंध में पोर्टल नस की स्थिति संतोषजनक है।
जब सभी कोशिकाओं को इंजेक्शन दिया गया है, सुई हटा दिया, जबकि एक साथ एक बाँझ कपास टिप applicator के साथ नस के लिए कोमल दबाव लागू । फिर, इंजेक्शन साइट पर हेमोस्टेटिक धुंध के 0.5 से 1 सेंटीमीटर वर्ग टुकड़े को पकड़ने के लिए एक नए बाँझ कपास टिप एप्लिकेटर का उपयोग करें।
पांच मिनट के बाद, नस बंद होने का आकलन करने के लिए सावधानी से धुंध उठाएं। जब रक्त प्रवाह पूरी तरह से बंद हो गया हो, तो धुंध को हटा दें और आंतों को पेट की गुहा में वापस कर दें। एक सरल, सतत, या बाधित सीवन पैटर्न का उपयोग करके, एक बाँझ 4-0 विक्रिल सीवन और टेपर के साथ पेरिटोनियल अस्तर को बंद करें।
त्वचा को उसी तरीके से बंद करने के बाद, चीरा साइट के साथ स्थानीय संवेदनाहारी के 100 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करें, इसके बाद बाँझ खारा के 0.5 मिलीलीटर की चमड़े के नीचे डिलीवरी करें।
