Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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렌티바이러스는 RNA 유전 물질을 포함하는 레트로바이러스입니다. 이 바이러스는 암 세포주에 전분을 소개하는 효율적이고 안정적인 방법을 제공합니다. 녹색 형광 단백질 또는 GFP를 표현하는 렌티 바이러스를 포함하는 튜브에 뉴라미니다아제를 첨가하여 시작합니다. 바이러스의 결합 효율을 높이기 위해 튜브를 섭씨 37도에서 1시간 동안 유지하십시오.
다음으로, 종양 세포 현탁액을 포함하는 튜브원심분리기는 펠릿을 형성한다. 세포를 다시 일시 중단하기 위해 폴리브레인을 포함하는 맘모스피어 미디어를 추가합니다. 폴리브레인은 렌티바이러스 감염 효율을 높이는 양이온 폴리머입니다. 이제 6 개의 잘 조직 배양 플레이트에서 잘 당 종양 세포의 최적 수를 플레이트. 배양 판의 각 우물에 Lentivirus의 필요한 양을 추가합니다.
접시를 소용돌이어 내용을 혼합하고, 이산화탄소의 지속적인 공급과 96 시간 동안 섭씨 37도에서 유지합니다. 렌티바이러스는 세포를 입력하고 RNA를 방출합니다. 바이러스 성 역실사는 RNA를 호스트 게놈으로 통합하는 이중 좌초 된 DNA로 변환합니다. 형광 현미경 아래에 플레이트를 놓고 성공적인 트랜스듀션을 위해 세포를 모니터링합니다. GFP 발현으로 인한 트랜스듀스된 세포형.
실시예 프로토콜에서, 우리는 렌즈바이러스 벡터를 가진 PDX 해리된 종양 세포의 전도를 능력을 발휘할 것입니다.
종양 세포를 변환하기 위해, 매머스피어 배지의 2밀리리터에서 재현수용 분리된 세포를 원심분리한다. 계산 후, 원심 분리하고 매머스피어 배지의 2밀리리터에서 펠릿을 재보습하고, 폴리브레인 20마이크로리터로 보충한다. 다음으로, 플레이트 2회 10~5차 생존 종양 세포는 초저고기에서 6개의 잘 어양된 조직 배양플레이트 및 렌티바이러스 입자를 10의 감염의 복합성으로 세포에 한다.
플레이트를 소용돌이쳐 바이러스를 세포와 혼합하고 최대 96시간 동안 37도및 5%의 이산화탄소에서 공동 배양을 배양하고, 처음 24시간 후에 500마이크로리터의 신선한 매머스피어 배지를 추가한다. 세포의 적어도 10%가 GFP 양성인 경우, 변형된 세포를 적어도 하나에서 얼음에 15밀리리터 원뿔튜브로 옮기고 매머스피어 배지의 1밀리리터로 우물을 씻는다.
세포와 함께 세척을 풀과 원심 분리 는 HBSS 플러스 HEPES의 10 밀리리터에서 종양 세포를 원심 분리. 마지막으로, 얼음에 지하 매트릭스 추출물의 50 마이크로 리터에서 세포를 다시 중단하고 재이식을 위한 0.5 밀리리터 인슐린 주사기에 임베디드 세포를 로드합니다.
