النهج الكمية لتسجيل في الجسم العصبي الكلي الجسمية وبثق Organelle في Vesicles كبيرة exopher في C. elegans
Summary
يصف هذا البروتوكول مقاربات الكشف عن كميات البثقات الكبيرة التجميعية و/أو العضية (~4 ميكرومتر) التي تنتجها خلايا C. elegans في شكل طاردات غشاءية. نحن نصف السلالات، وظروف النمو، ومعايير التسجيل، والتوقيت، والاعتبارات المجهرية اللازمة لتسهيل تشريح هذه الآلية طرد الحطام.
Abstract
سمية البروتينات المُختَلَفة واختلالُ الاختلالُ المتَجَزِني هي عواملٌ محوريةٌ تُعزِّزُ انخفاض الخلايا العصبية الوظيفية المرتبطة بالعمر والأمراض العصبية التنكسية عبر الأنواع. على الرغم من أن هذه التحديات والأعصاب منذ فترة طويلة تعتبر جوهرية الخلية، وهناك أدلة كبيرة تدعم الآن أن البروتينات المرض البشري المُعَدَّد في الخلايا العصبية التي تنشأ في خلية واحدة يمكن أن تظهر في الخلايا المجاورة، وهي ظاهرة مقترحة لتعزيز انتشار الأمراض في الأمراض العصبية البشرية.
C. الخلايا العصبية الكبار elegans التي تعبر عن البروتينات المجمعة يمكن أن قذف كبيرة (~ 4 ميكرومتر) غشاء تحيط الحويصلات التي يمكن أن تشمل البروتين المجمعة, الميتوكوندريا, وlysosomes. وتسمى هذه الحويصلات الكبيرة “exophers” وتتميز عن إكسوسومات (التي هي حوالي 100x أصغر ولها تكوين حيوي مختلف). وقد يحدث التخلص من الحطام الخلوي في الطاردات من خلال آلية محفوظة تشكل فرعاً أساسياً، ولكن غير معترف به سابقاً، من بروتيوستاسيس الخلايا العصبية ومراقبة جودة الميتوكوندريا، ذات الصلة بالعمليات التي تنتشر بها المجاميع في الأمراض العصبية البشرية.
في حين أن exophers قد درست في الغالب في الحيوانات التي تعبر عن mCherry عالي النسخ المعدلة وراثيا داخل الخلايا العصبية التي تعمل باللمس ، فإن هذه البروتوكولات مفيدة بنفس القدر في دراسة تكوين الخلايا العصبية الخارجية باستخدام العضيات الموسومة بالفلورسنت أو البروتينات الأخرى ذات الاهتمام في فئات مختلفة من الخلايا العصبية.
ويرد وصفها هنا هي السمات المادية للطاردات من نوع C. elegans، واستراتيجيات الكشف عنها، ومعايير تحديد الهوية، والتوقيت الأمثل للكمية، وبروتوكولات نمو الحيوانات التي تتحكم في الضغوط التي يمكن أن تعدل مستويات الإنتاج الطارد. وينبغي أن تعمل تفاصيل البروتوكولات المبينة هنا معاً على وضع معيار للتحليل الكمي للخرّيات عبر المختبرات. تسعى هذه الوثيقة إلى أن تكون بمثابة مورد في هذا المجال للمختبرات التي تسعى إلى وضع آليات جزيئية يتم من خلالها إنتاج الطاردات والتي يتم من خلالها رد فعل الطاردات من قبل الخلايا المجاورة والبعيدة.
Introduction
التحديات السمة العصبية من المجاميع والميتوكوندريا المختلة منذ فترة طويلة تعتبر الخلية الجوهرية، ولكن في الآونة الأخيرة أصبح من الواضح أن البروتينات المرض البشري misfolded التي تنشأ في خلية عصبية واحدة يمكن أن تنتشر أيضا إلى الخلايا المجاورة، وتعزيز علم الأمراض1. وبالمثل، يمكن إرسال الميتوكوندريا الثدييات من الخلية من إنتاجها الأصلي للتحلل عبر الخلايا2 أو لإنقاذ السكان الميتوكوندريا في الخلايا المجاورة تحد3. وقد لوحظ عموما حويصلات من مختلف الأحجام لنقل المواد الخلوية إلى الخلايا المجاورة أو إلى محيط السوائل4. بعض الحصويات مقذوف نهج حجم سوما الخلايا العصبية متوسط (متوسط لمس الخلايا العصبية سوما ~ 6 ميكرومتر) ويمكن أن تستوعب المجاميع الكبيرة والعضيات.
مثال صارخ على بثق vesicle كبيرة التي يمكن أن تحمل مجاميع البروتين والعضيات يحدث في الخلايا العصبية مستقبلات اللمس C. elegans التي تعبر عن عدد كبير من مراسل بناء ترميز تجميع الضارة المعرضة، مقاومة للتحلل mCherry5. البثق من الخلايا العصبية التي تعمل باللمس، ودعا exophers، هي ~ 4 μm متوسط القطر، وتشمل انتقائيا mCherry أو المجاميع الأخرى، ويتم تسليمها مباشرة في hypodermis المجاورة، والتي تحيط عادة الخلايا العصبية مستقبلات اللمس. يحاول hypodermis التحلل القائم على الليسسومات ، ولكن بعض المحتويات غير القابلة للهضم مثل مجاميع mCherry يمكن إعادة قذفها من قبل hypodermis في pseudocoelom مملوءة بالسوائل من الحيوان ، والتي يمكن أن تؤخذ من قبل mCherry الخلايا الزبالة النائية تسمى coelomocytes لتخزين المدى الطويل(الشكل 1، الشكل 2)5.
الحويصلات البثق كبيرة ترك الخلية محاطة غشاء البلازما مستقبلات اللمس ويمكن أن تحتوي على بروتينات الأمراض البشرية المجمعة, الميتوكوندريا, وlysosomes. ويبدو أن عملية إنتاج الطاردة تنطوي على فرز الأنواع السامة المحتملة (على سبيل المثال يتم فصل mCherry المعرضة للتجميع عن البروتينات القابلة للذوبان وغير الفظة مثل GFP التي لا تزال في الغالب في سوما الخلايا العصبية). وبهذه الطريقة، يتم إنجاز الطرد الموجه للكيانات المهددة من قبل الخلايا العصبية5. تحد بروتيوستاسيس, مثل الإجهاد الناجم عن الضربة القاضية autophagy, MG132 بوساطة تثبيط البروتياما, أو التعبير عن المعدلات وراثيا من بروتينات الأمراض البشرية مثل مرض هنتنغتون الموسعة polyglutamine Q128 أو مرض الزهايمر المتورطة جزء Aβ1-42, يمكن أن تزيد من أعداد الخلايا العصبية التي تنتج بروفات5.
كما exophers لم يتم توثيقها إلا مؤخرا ، ما هو معروف عن وصفها جدارة البيولوجيا. تم اكتشاف exophers في, وهي الأكثر درس جيدا في, C. elegans الخلايا العصبية مستقبلات اللمس. هناك ستة الخلايا العصبية اللمس الميكانيكية c. elegans التي لديها خلايا الخلايا وزعت في جميع أنحاء الجسم(الشكل 3A)وتسمى خلايا microtubule لأن ملامحها الفائقة مميزة 15 microtubules protofilament. الخلايا العصبية مستقبلات اللمس هي AVM الأمامي (الخلايا العصبية الصغرى الأمامية), ALMR, وALML (الخلايا العصبية الجزئية الأمامية الأمامية اليمنى واليسارية), وPVM أكثر مركزية (الخلايا العصبية الصغرى البطينية الخلفية), وPLMR الخلفي وPLML (الخلايا العصبية الجزئية الخلفية الخلفية يمينا ويسارا) في الذيل. ومن المثير للاهتمام, الخلايا العصبية مستقبلات اللمس الستة إنتاج exophers بمعدلات مختلفة, على الرغم من التعبير عن transgene الهجومية نفسها(الشكل 3C). من الخلايا العصبية مستقبلات اللمس الستة mechanosensory, الخلايا العصبية ALMR يخضع إكسوبروجينسيس في كثير من الأحيان من الخلايا العصبية الأخرى التي تعمل باللمس. وهكذا عادة ما يتم تأسيس كمية من أعداد exopher من الخلايا العصبية التي تعمل باللمس من خلال التركيز على ALMR.
Exophergenesis هي عملية ديناميكية تبدأ عادة بتورم السيتوبلازم العصبي(الشكل 1A-B). يتم جمع محتويات الخلوية، العضيات، أو مجاميع البروتين إلى جانب واحد من سوما الخلايا العصبية، والأكثر شيوعا نحو النهاية الخلفية للخلايا العصبية ALMR (بعيدا عن نيوريت إسقاط)، وتشكيل المجال ما قبل exopher (PED) (الشكل 1B). ويلاحظ بروز في وقت مبكر كما يبدأ PED إلى المشروع إلى الخارج، وتشكيل برعم بارزة يمكن التعرف عليها. يتم تعريف البرعم المتأخر عندما يكون أوسع قطر من المجال ما قبل الطاردة هو تقريبا 1/3 أكبر من قطر انقباض عنق سوما- اضح (الشكل 1C). يمكن إخراج الطاردات في أي اتجاه تقريبًا من سوما ، ولكن معظم الطاردات تخرج من جسم الخلية وتبقى في نفس الطائرة البؤرية تقريبًا مثل سوما الأصلية.
يمكن للطارد الابتعاد عن سوما الأصلي حيث يضيق عنق البرعم في خيوط رقيقة. يمكن أن تبقى exophers تعلق على سوما عن طريق هذا خيوط (الشكل 1D ، السهم) ويمكن أن تصبح في وقت لاحق منفصلة. يمكن نقل المحتويات الخلوية مثل الكالسيوم والمجاميع والميتوكوندريا عبر هذا الخيط إلى الطارد المرفق5، على الرغم من أن الجزء الأكبر من المواد مقذوف يتم وضعها في مقصورة البثق من قبل الحدث الناشئ الضخم. تعتبر exophers ناضجة عندما لا يكون هناك أنبوب ربط مرئية أو خيوط رقيقة ويتم فصل exopher تماما من سوما المرسل (الشكل 1E).
Exophers التي تنتجها الخلايا العصبية لمس C. elegans تواجه على الفور hypodermis, الأنسجة التي تحيط الخلايا العصبية التي تعمل باللمس. الأكثر شيوعا، vesicle exopher يبدو أن السفر داخل تحت الجلد في المستقبل نحو الذيل، ويمكن أن تكون بعيدة إلى حد ما من سوما قبل محتويات exopher تظهر مستهدفة للتدهور (على سبيل المثال، يمكن أن تكون المسافة ~ 100 ميكرومتر بعيدا عن سوما (الشكل 1F)). vesicle الفلورسنت exopher ينكسر في العديد من الحويصلات الصغيرة داخل hypodermis، مع الأخذ في مظهر يشار إليها باسم “ليلة مرصعة بالنجوم” (الشكل 1G والشكل 2). في مرحلة “ليلة مرصعة بالنجوم”، يمكن ملاحظة مادة فلورية دقيقة متناثرة عبر syncytium تحت الجلد في العديد من النقاط الصغيرة من الفلورانس بالمقارنة مع exopher الانفرادي الأصلي. ليلة مرصعة بالنجوم يمكن أن ننظر punctate تحت التكبير منخفضة ومع التكبير أعلى، يمكن أن ننظر punctate و / أو شبكية داخل hypodermis. إشارة الفلورسنت من ليلة مرصعة بالنجوم عادة ما يكون باهتا من exopher وفلوريسنسي أعرب عن العصبية(الشكل 2B-C). ويعتقد أن تشتت mCherry في العديد من الحويصلات punctate تنطوي على النضج والانصهار phagosome مع شبكة endosomal / lysosomal من الخلية تحت الجلد. ومن المرجح أن تتحلل بعض المواد طاردة في شبكة تحت الجلد، ولكن الأنواع المتبقية التي تقاوم التحلل (مثل مجاميع mCherry) تُرمى من تحت الجلد في الـ pseudocoelom، وهي مقصورة سائل يمكن أن تحتوي على حطام خلوي. يتم أخذ المواد الفلورية في وقت لاحق من قبل الخلايا الزبالة النائية ودعا coelomocytes(الشكل 2C)،والتي يمكن أن تركز، وتخزين، ومرة أخرى محاولة تدهور mCherry.
ظاهرة البثق الكلي ونقل يبدو الحفاظ عليها عبر phyla، بعد أن تم الإبلاغ عنها في النماذج الوراثية مثل C. elegans5,,6,,7 و D. melanogaster8,9 وكذلك في نماذج الثدييات المتعددة. وقد تم الإبلاغ عن قذفات تشبه الطاردة لخلايا الثدييات10، وهي ملاحظة تشير إلى أن الآليات المحفوظة قد تكون وراء الطرد الكلي والعضلي. وبالتالي، قد يكون إنتاج الطارد آلية محفوظة لإدارة الحطام الخلوية التي تشكل فرعًا أساسيًا، ولكن غير معترف به سابقًا، من بروتيوستاسيس الخلايا العصبية ومراقبة جودة الميتوكوندريا، والتي قد تساهم بنشاط، عند اختلال توازنها، في الإصابة بمرض تنكس عصبي. تحديد الجزيئات المشاركة في التمييز في الحطام والفرز ، والانتقال إلى لغة فرعية متميزة ، والبثق ، وتشكيل / scission من اتصال أنبوبي يربط سوما والبراز المتأخر ، والاعتراف الحويقد الكبير مقذوف للتحلل عن بعد من قبل خلية مجاورة لا تزال للعمل في المستقبل. وستكون الدراسات في نماذج الديدان الخيطية والذبابة ذات أهمية حاسمة في تحديد آليات جمع ونقل المجاميع والعضية، وذلك باستخدام النهج الجينية غير المتحيزة والأدوات البيولوجية القوية للخلايا التي توفرها هذه النماذج لتحديد الجزيئات المشاركة في السياق الفسيولوجي.
الخطوات الأولى الحاسمة في فك آليات المنطوقة في البيولوجيا exopher تنطوي على تحديد بروتوكولات لإعادة إنتاجها في الكم exopher الجسم الحي. نموذج C. elegans يقدم ميزة خاصة لمثل هذه الجهود منذ الجسم شفاف ويمكن ملاحظة exophers بسهولة عندما تحتوي على البروتينات الفلورية الموسومة أو العضيات. وقد أفيد Exophers أن يتم إنشاؤها من قبل الخلايا العصبية الدوبامين C. elegans PDE وCEP, ASE و ASER الخلايا العصبية الحسية, والخلايا العصبية الأميد صبغ ملء5. لأن exophers التي تنتجها الخلايا العصبية مستقبلات اللمس هي أفضل تتميز, التركيز هنا هو على استخدام الخلايا العصبية التي تعمل باللمس لتحليل exopher. ومع ذلك يمكن تطبيق النهج الأساسي لقياس الإنتاج الطارد من أي خلية. بروتوكولات للكشف عن وكمية exophers التي تنتجها الخلايا العصبية مستقبلات اللمس C. elegans التي تعبر بشكل وراثيا البروتين mCherry يتم تحديدها، مع التركيز على الشحنات التي يمكن رصدها والقيود الزمنية في التهديف. تعرّف هذه المقالة المقاربات تجاه في تحديد الطاردة الحية ، وكمية الظروف البيئية والجينية التي تعدل إنتاج exopher. وتؤكد البروتوكولات الاهتمام الحاسم بالظروف الثابتة غير الإجهادية لتحديد إنتاج الطاردات الأساسية للمقارنات عبر الأنماط الجينية.
Protocol
Representative Results
Discussion
إن توصيف الآليات الجزيئية في الجسم الحي للتخلص الكلي والعضلي في شكل طاردات كبيرة لا يزال في مراحله الأولى. ولا تزال هناك أسئلة بشأن تعيين الشحنات للطرد، وجمع هذه الشحنات المستقطبة داخل الخلية، وتنظيم قرار توليد طاردات، والآلات التي تتوسط عمليات البثق، وتفاعل الطاردات مع الآلات المهينة في خلية مجاورة، كلها مسائل لا تزال قيد المعالجة. وعلاوة على ذلك، فإن التصور في الجسم الحي من الاتصالات أنبوبي التي يمكن تمرير المواد البيولوجية التي تشمل الكالسيوم، والمجاميع، والميتوكوندريا هو البيولوجيا مثيرة للاهتمام وناظرة في حقها. كما أن الأسئلة المتعلقة بالأسباب التي تؤدي إلى أن تكون بعض الخلايا أكثر عرضة للإنتاج من غيرها من غير المحلول، ولكن يمكن أن تبدأ في تشريحها وراثياً باستخدام النهج المبينة في هذا البروتوكول.
ويرد في هذا البروتوكول وصف تفصيلي هو النهج المتبعة لتحقيق نقاط قابلة للتكرار لإنتاج الطاردات، مع الاهتمام بتمييز الطاردات من الصوما القريبة من الخلايا، وتوقيت التحليلات لالتقاط ذروة إنتاج الطارد، والرقابة الصارمة على ظروف النمو للقضاء على الضغوط غير المقصودة التي يمكن أن تعدل مستويات الطارد. يمكن أن يتم كمي كل من التمييز من طارد كبير في وقت مبكر، أو “ليلة مرصعة بالنجوم” تشتت في hypodermis المحيطة كدليل على إنتاج الطارد. ومع ذلك، فإن الخلايا العصبية التي تعبر عن mCherry في ظل ظروف القاعدية غالباً ما ترتبط بـ 5-25% من الخلايا العصبية من نوع معين تنتج طاردًا. يمكن تطبيق إدخال تسيطر عليها من ظروف الإجهاد لزيادة إنتاج exopher للكشف عن ما يصل إلى 90٪ من الخلايا العصبية المنتجة البثقات، مفيدة بشكل خاص للشاشات الوراثية أو الدوائية للمعدّلات.
في الأمراض العصبية البشرية ، يمكن أن تنتقل المجاميع الكبيرة من الخلايا العصبية المريضة إلى الخلايا المجاورة لتعزيز انتشار علم الأمراض. وقد تُطبَّق آلية الطاردة عن طريق آلية محفوظة تستخدم في البثق الكلي عبر الـphyla. تحديد جزيئات في vivo التي إما تعزيز كفاءة هذه العملية (تعتبر أكثر فعالية مكافحة البروتيوستاسيس) أو كتلة قد تكون تسخيرها للتأثير على تصميم استراتيجيات جديدة لمكافحة الأمراض العصبية المتعددة. على هذا النحو، يمكن استخدام البروتوكول الموصوف هنا لشاشات الطفرات الوراثية الكلاسيكية، وشاشات RNAi على نطاق الجينوم التي تدق الجينات بشكل منهجي لتحديد التعزيزات والقامع، أو لدراسات التدخل الدوائي التي تحدد المعدلات الدوائية المرشحة لهذه العملية. وهذا النهج واضح، وإن كان شاقا إلى حد ما. exophers كبيرة جداً بحيث يمكن أن ينظر إليها مع المجهر تشريح عالية التكبير. ومع ذلك ، فإن الخلايا العصبية C. elegans صغيرة نسبيًا والنظر إلى أعضائها أو أغشيتها يتطلب صورًا التقاء عالية السلطة وهي عملية بطيئة. خيارات لخرج أعلى يمكن أن تنطوي على أساليب التصوير المحتوى عالية في شكل لوحة متعددة جيدا.
وينبغي أن يكون تطبيق نهج موحد للتخلص من النفايات من المخلفات أساسا لتشريح وراثي متضافر للعملية التي يمكن للخلايا العصبية من خلالها تنظيم الحطام الخلوي والقضاء عليه.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نحن نعترف بمنح المعاهد القومية للصحة التالية: R01AG047101 و R37AG56510. وقد ساهم أعضاء مختبرات دريسكول وغرانت على نطاق واسع في تطوير وصقل البروتوكولات الموصوفة، مع إجراء تجارب صارمة واتصالات قوية.
Materials
| 95B Scientific CMOS camera | Photometrics Prime | ||
| 1,000 μL low retention tips | Sarstedt | ||
| 10 mL serological pipette | Appleton Woods | CC214 | |
| 10 μL low retention tips | Sarstedt | 70.1130.105 | |
| 13% sodium hypochlorite | Acros Organics | AC219255000 | |
| 15 mL centrifuge tubes | Fisher Scientific | 05-539-12 | |
| 2 L erlenmeyer flasks | Scientific Laboratory Supplies | FLA4036 | |
| 25 mL serological pipette | Appleton Woods | CC216 | |
| 300 μL low retention tips | Sarstedt | 70.765.105 | |
| 50 mL serological pipette | Appleton Woods | CC117 | |
| 5-Fluoro-2'-deoxyuridine 98% | Alfa Aesar | L16497.ME | |
| 9 cm sterile Petri dishes | Fisher Scientific | 11309283 | |
| absolute ethanol | Vwr | 20821.33 | |
| Agar | Sigma Aldrich | A1296 | |
| C. elegans strain wild type | Supplied by CGC | N2 | C. elegans strain |
| calcium chloride dihydrate | Sigma Aldrich | C3881 | |
| cholesterol | Acros | 110190250 | |
| dibasic sodium phosphate | Sigma Aldrich | S3264 | |
| E. coli strain OP50 | Supplied by CGC | Op50 | E coli strain |
| FBS10 Standard microscope | Meyer Instruments | KSC 410-1-100-1 | FBS10 Standard with Plate Base, 100/100 Trinocular Head and Flip zoom |
| glass pipette 270 mm | Fisherbrand | FB50255 | |
| Heraeus Multifuge X3R | Thermofisher scientific | 75004515 | |
| Inoculating Spreaders | Fisher Scientific | 11821741 | |
| LB medium capsules | MP biomedicals | 3002-031 | |
| LDI – Laser Diode Illuminator | 89 North | ||
| levamisole | Sigma Aldrich | 16595-80-5 | |
| M4 multipette | Eppendorf | 4982000012 | |
| magnesium sulphate | Sigma Aldrich | M7506 | |
| monobasic potassium phosphate | Sigma Aldrich | P0662 | |
| Multitron Standard shaking incubator | Infors HT | INFO28573 | |
| Nalgene 1 L Centrifuge pots | Fisher Scientific | 3120-1000 | |
| P10 pipette | Eppendorf Research Plus | 3123000020 | |
| P1000 pipette | Eppendorf Research Plus | ||
| P200 pipette | Eppendorf Research Plus | 3123000055 | |
| pipeteboy 2 | VWR | 612-0927 | |
| Polystyrene microbeads | Sigma Aldrich | MFCD00131491 | |
| RC5C plus floor mounted centrifuge | Sorvall | 9900884 | |
| Reusable ringed cytology slides | ThermoFisher Scientific | 22037242 | |
| SK4005 zdIs5[Pmec-4GFP] | contract Driscoll lab | GFP expressed in touch neurons | |
| sodium chloride | Sigma Aldrich | 13422 | |
| Sodium hydroxide | Fisher Chemical | S/4880/53 | |
| Tactrol 2 Autoclave | Priorclave | ||
| Triton-X | Thermofisher scientific | 28313 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | 9005-64-5 | |
| X-Light V2 Spinning Disk Confocal Unit | CrestOptics | ||
| ZB4065 bzIs166[Pmec-4mCherry] | contract Driscoll lab | mCherry expressed in touch neurons | |
| ZB4067 bzIs167[Pmec-4mitogfp Pmec-4mCherry4]; igIs1[Pmec-7YFP Pmec-3htt57Q128::cfp lin-15+] | contract Driscoll lab | Q128 expressed in touch neurons | |
| ZB4509 bzIs166[Pmec-4mCherry]; bzIs168[Pmec-7LMP-1::GFP] | contract Driscoll lab | mitoROGFP expressed in touch neurons | |
| ZB4528 bzIs166[Pmec-4mCherry]; zhsEx17 [Pmec-4mitoLS::ROGFP] | contract Driscoll lab | autophagy marker expressed in touch neurons | |
| ZEISS Axio Vert.A1 | Zeiss |
Referencias
- Davis, A. A., Leyns, C. E. G., Holtzman, D. M. Intercellular Spread of Protein Aggregates in Neurodegenerative Disease. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 34, 545-568 (2018).
- Davis, C. H., et al. Transcellular degradation of axonal mitochondria. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (26), 9633-9638 (2014).
- Torralba, D., Baixauli, F., Sanchez-Madrid, F. Mitochondria Know No Boundaries: Mechanisms and Functions of Intercellular Mitochondrial Transfer. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 107 (2016).
- Stahl, P. D., Raposo, G. Extracellular Vesicles: Exosomes and Microvesicles Integrators of Homeostasis. Physiology (Bethesda, Md.). 34 (3), 169-177 (2019).
- Melentijevic, I., et al. C-elegans neurons jettison protein aggregates and mitochondria under neurotoxic stress. Nature. 542 (7641), 367 (2017).
- Nussbaum-Krammer, C. I., Park, K. W., Li, L., Melki, R., Morimoto, R. I. Spreading of a prion domain from cell-to-cell by vesicular transport in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 9 (3), 1003351 (2013).
- Tyson, T., et al. Novel animal model defines genetic contributions for neuron-to-neuron transfer of alpha-synuclein. Scientific Reports. 7, (2017).
- Babcock, D. T., Ganetzky, B. Transcellular spreading of huntingtin aggregates in the Drosophila brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (39), 5427-5433 (2015).
- Pearce, M. M. P., Spartz, E. J., Hong, W., Luo, L., Kopito, R. R. Prion-like transmission of neuronal huntingtin aggregates to phagocytic glia in the Drosophila brain. Nature Communications. 6, 6768 (2015).
- Fu, H., Li, J., Du, P., Jin, W., Cui, D. Metabolic wastes are extracellularly disposed by excretosomes, nanotubes and exophers in mouse HT22 cells through an autophagic vesicle clustering mechanism. bioRxiv. 10 (1), (2019).
- Ghose, P., Park, E. C., Tabakin, A., Salazar-Vasquez, N., Rongo, C. Anoxia-reoxygenation regulates mitochondrial dynamics through the hypoxia response pathway, SKN-1/Nrf, and stomatin-like protein STL-1/SLP-2. PLoS Genetics. 9 (12), 1004063 (2013).
- Cannon, M. B., Remington, S. J. Redox-sensitive green fluorescent protein: probes for dynamic intracellular redox responses. A review. Methods in Molecular Biology. 476, 51-65 (2008).
- Perkins, L. A., Hedgecock, E. M., Thomson, J. N., Culotti, J. G. Mutant sensory cilia in the nematode Caenorhabditis elegans. Biología del desarrollo. 117 (2), 456-487 (1986).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook: The Online Review of C. Elegans Biology. , 1-11 (2006).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Measuring Caenorhabditis elegans life span on solid media. Journal of Visualized Experiments. (27), (2009).
- Mitchell, D. H., Stiles, J. W., Santelli, J., Sanadi, D. R. Synchronous growth and aging of Caenorhabditis elegans in the presence of fluorodeoxyuridine. Journal of Gerontology. 34 (1), 28-36 (1979).
- Weicksel, S. E., et al. A novel small molecule that disrupts a key event during the oocyte-to-embryo transition in C. elegans. Development. 143 (19), 3540-3548 (2016).
- Dong, L., et al. Reversible and long-term immobilization in a hydrogel-microbead matrix for high-resolution imaging of Caenorhabditis elegans and other small organisms. PloS One. 13 (3), 0193989 (2018).
- Toth, M. L., et al. Neurite sprouting and synapse deterioration in the aging Caenorhabditis elegans nervous system. Journal of Neuroscience. 32 (26), 8778-8790 (2012).
- Conte, D., MacNeil, L. T., Walhout, A. J. M., Mello, C. C. RNA Interference in Caenorhabditis elegans. Current Protocols in Molecular Biology. 109, (2015).
- Calixto, A., Chelur, D., Topalidou, I., Chen, X., Chalfie, M. Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1. Nature Methods. 7 (7), 554-559 (2010).
- Maher, K. N., Catanese, M., Chase, D. L. Large-scale gene knockdown in C. elegans using dsRNA feeding libraries to generate robust loss-of-function phenotypes. Journal of Visualized Experiments. (79), e50693 (2013).
