Summary

Lésion neuronale ciblée pour la déconnexion non invasive des circuits cérébraux

Published: September 27, 2020
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Summary

Le but du protocole est de fournir une méthode pour produire des lésions neuronales non invasives dans le cerveau. La méthode utilise l’échographie focalisée guidée par résonance magnétique (MRgFUS) pour ouvrir la barrière hémato-encéphalique d’une manière transitoire et focale, afin de fournir une neurotoxine circulante au parenchyme cérébral.

Abstract

L’intervention chirurgicale peut être très efficace pour traiter certains types de maladies neurologiques médicalement insolubles. Cette approche est particulièrement utile pour les troubles dans lesquels les circuits neuronaux identifiables jouent un rôle clé, tels que l’épilepsie et les troubles du mouvement. Les modalités chirurgicales actuellement disponibles, bien qu’efficaces, impliquent généralement une intervention chirurgicale invasive, qui peut entraîner des blessures chirurgicales aux tissus non ciblés. Par conséquent, il serait utile d’élargir la gamme des approches chirurgicales pour inclure une technique à la fois non invasive et neurotoxique.

Ici, une méthode est présentée pour produire des lésions neuronales focales dans le cerveau d’une manière non invasive. Cette approche utilise des ultrasons focalisés de faible intensité ainsi que des microbulles intraveineuses pour ouvrir de façon transitoire et focale la barrière hémato-encéphalique (BBB). La période d’ouverture transitoire de BBB est alors exploitée pour fournir focalement une neurotoxine systémiquement administrée à une zone ciblée de cerveau. L’acide quinolinique neurotoxine (QA) est normalement imperméable à la BBB, et est bien toléré lorsqu’il est administré intrapéritoneally ou par voie intraveineuse. Cependant, lorsque l’aq gagne un accès direct aux tissus cérébraux, il est toxique pour les neurones. Cette méthode a été utilisée chez les rats et les souris pour cibler des régions spécifiques du cerveau. Immédiatement après MRgFUS, l’ouverture réussie du BBB est confirmée à l’aide d’une imagerie t1 améliorée par contraste. Après la procédure, l’imagerie T2 montre des blessures limitées à la zone ciblée du cerveau et la perte de neurones dans la zone ciblée peut être confirmée post-mortem en utilisant des techniques histologiques. Notamment, les animaux injectés avec la solution saline plutôt que l’aq démontrent l’ouverture de la BBB, mais point ne présentent pas de blessure ou de perte neuronale. Cette méthode, appelée chirurgie guidée non invasive intracérébrale précise (PING) pourrait fournir une approche non invasive pour traiter les troubles neurologiques associés aux perturbations dans les circuits neuronaux.

Introduction

Le but de cette méthode est de fournir un moyen de produire des lésions neuronales non invasives dans une région ciblée du cerveau. La raison d’être du développement d’une telle approche est de déconnecter les circuits neuronaux contribuant aux troubles neurologiques. Par exemple, la chirurgie peut être très efficace dans le traitement de certains troubles neurologiques médicalement insolubles, tels que l’épilepsie pharmacorésistante (DRE)1. Cependant, chacune des modalités chirurgicales disponibles possèdent des limitations en termes de production de dommages collatéraux indésirables au cerveau. La chirurgie résécrétive traditionnelle peut être très invasive avec le risque de saignement, d’infection, de caillots sanguins, d’accident vasculaire cérébral, de convulsions, d’enflure du cerveau et de lésions nerveuses2. Les alternatives à la chirurgie résécrétive qui sont mini-invasives ou non-invasives incluent la thérapie thermique interstitielle au laser et la radiochirurgie, qui se sont également avérées efficaces dans la suppression des saisies dans DRE. Plus récemment, les lésions thermiques produites par l’ultrason focalisé de haute intensité (HIFU) se sont montrées prometteuses en réduisant des saisies. HIFU est non invasif; cependant, sa fenêtre de traitement est actuellement limitée à des zones plus centrales du cerveau en raison du risque de lésion thermique aux tissus non ciblés situés à proximité du crâne. Malgré ces limitations, les avantages de la chirurgie l’emportent souvent sur les risques potentiels. Par exemple, bien que la chirurgie pour DRE peut produire des dommages collatéraux de cerveau, ses effets salutaires dans la suppression des saisies et l’amélioration de la qualité de vie l’emportent généralement sur les risques chirurgicaux.

La méthode décrite ici, Precise Intracerebral Non-invasive Guided surgery (PING), a été développée dans le but de déconnecter les circuits neuronaux, tout en limitant les dommages collatéraux du cerveau. La méthode utilise une échographie focalisée de faible intensité combinée à l’injection intraveineuse de microbulles pour ouvrir le BBB, afin de délivrer une neurotoxine. Cette approche ne produit pas de lésions thermiques au cerveau3,,4,,5,6,7, et la période d’ouverture BBB peut être exploitée pour fournir des composés imperméables BBB au parenchyme cérébral. L’ouverture du BBB est transitoire et peut être produite de manière ciblée à l’aide de conseils d’imagerie par résonance magnétique. Dans nos études, la période d’ouverture BBB a été utilisé pour fournir une neurotoxine circulante à une zone ciblée du parenchyme cérébral chez les rats et les souris8,9. L’acide quinolinique est une neurotoxine qui est bien tolérée lorsqu’elle est administrée par voie intraveineuse10, intraartérialement10, ou intrapéritoneally8,9,11. L’absence de toxicité de l’AQ est due à sa faible perméabilité BBB, qui a été signalé à être négligeable10. En revanche, l’injection directe de QA dans le parenchyme cérébral produit des lésions neuronales qui épargnent les axones voisins12,13. Ainsi, lorsque l’AQ circulant gagne l’accès au parenchyme cérébral dans la zone ciblée de l’ouverture BBB, la mort neuronale est produite8,9. La méthode actuelle produit ainsi une perte neuronale focale d’une manière précisément ciblée et non invasive.

Protocol

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité des soins et de l’utilisation des animaux de l’Université de Virginie. 1. Préparation des réactifs Le jour de la chirurgie, préparer 6,0 mL d’acide quinolinique injectable (QA). Dissoudre 450 mg d’AQ dans 4,0 mL de 1,0 N NaOH. Ajouter 0,6 mL de 10x PBS, pH à 7,4, et porter à un volume final de 6,0 mL avec dH2O. Filtrer à travers 0,22 μm filtre à seringues. La solution est stable pendan…

Representative Results

Cette section décrit l’effet de PING sur les neurones situés dans une dysplasie néocorticale. Les dysplasies tissulaires sont une caractéristique commune dans le cerveau des patients atteints d’épilepsie pharmacorésistante, et l’ablation chirurgicale des dysplasies convulsive-géniques peut fournir un excellent contrôle des crises15. Définir l’effet de PING sur le tissu cérébral dysplasique est donc une priorité importante. Un modèle de rat de la dysplasie corticale génétique…

Discussion

La méthode PING est conçue pour produire des lésions neuronales non invasives et ciblées. La méthode dérive d’une base forte et croissante de la recherche dans le domaine de l’échographie ciblée3,4,5,6,7. La capacité de fournir un accès focal à des zones spécifiques du parenchyme cérébral par l’ouverture transitoire de la BBB a créé une a…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs reconnaissent René Jack Roy pour son excellent soutien technique dans le domaine de l’IRM. Ces travaux ont été soutenus par les National Institutes of Health (R01 NS102194 à KSL et R01 CA217953-01 à MW), le Chester Fund (KSL), et la Focused Ultrasound Foundation (KSL et JW).

Materials

7T-ClinScan MRI System Bruker Biospin, Ettinglen, Germany MR Image Acquisition
Acoustic Gel Litho CLEAR 11-601 High Viscosity Accoustic Transmission Gel
DPX Mounting Medium Electron Microscopy Sciences 13512 Resin Based Cover Glass Mountant
Fluoro-Jade B EDM Millipore AG310 High Affinity Stain For Degenerating Neurons
Fluovac anesthetic adsorber Harvard Apparatus 34-0388 Organic Anaesthesia Scavenger
FUS System Image Guided Therapy, Pessac, France LabFUS MR Compatible Small Animal Focused Ultrasound System
Gadodiamide GE Healthcare AS, Oslo, Norway Omniscan MR Contrast Agent
Heparin SAGENT NDC2502140010 Anti-Coagulant
Hypodermic needle 30G x 1/2 Becton-Dickinson 26027 Tail Vein Catheterization
Insulin syringe 28G1/2 (1ml) EXEL 26027 Administration of Injectables to Tail Vein Catheter
Isofluorane atomizer SurgiVet VCT302 Anaesthesia Administration
Isoflurane Henry Schein NDC1169567762 Anaesthesia
KMnO4 Sigma 223468 Reagent Used in Fluoro-Jade B Staining
Microbubbles Produced internally: A. Klibanov 305106 Blood Brain Barrier Disrupting Agent
Microbubbles (commercial source) Lantheus Medical Imaging, North Billerica, MA Definity microbubbles Blood Brain Barrier Disrupting Agent
Monitoring & Gating System Small Animal Instruments Model 1030 Respiration Monitoring
Multisizer 3 Coulter counter Beckman-Coulter, Hialeah, FL Multisizer 3 Used to Determine Average Size of Microbubbles
Optixcare EYE LUBE CLC MEDICA, Ontario, Canada 11611 Corneal Protectant-Eye Lube
PE10 tubing Becton-Dickinson 427401 Tail Vein Catheter Component
Quinolinic Acid Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX CAS 89-00-9 Neurotoxin
Sprague-Dawley Rats Taconic Biosciences SD-M Rat Model
Syringe Pump Carnegie Medicin CMA 100 Controlled Delivery of Quinolinic Acid
Thermoguide Software Image Guided Therapy, Pessac, France Thermoguide Drives Lab FUS System
Tish Rats In-house colony Rat Model
Veet depilatory cream Reckitt Benckiser Removal of Scalp Hair

Referencias

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Citar este artículo
Wang, W., Zhang, Y., Anzivino, M. J., Bertram, E. H., Woznak, J., Klibanov, A., Dumont, E., Wintermark, M., Lee, K. S. Targeted Neuronal Injury for the Non-Invasive Disconnection of Brain Circuitry. J. Vis. Exp. (163), e61271, doi:10.3791/61271 (2020).

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