Summary

Application de perturbations de massage cohérentes sur les veaux de souris et surveillance des changements de pression intramusculaire qui en résultent

Published: September 20, 2019
doi:

Summary

Nous décrivons ici les protocoles pour appliquer des charges mécaniques définies aux veaux de souris et pour surveiller les changements concomitants de pression intramusculaire. Les systèmes expérimentaux que nous avons développés peuvent être utiles pour étudier le mécanisme derrière les effets bénéfiques de l’exercice physique et le massage.

Abstract

Le massage est généralement reconnu comme bénéfique pour soulager la douleur et l’inflammation. Bien que des études antérieures aient rapporté des effets anti-inflammatoires du massage sur les muscles squelettiques, les mécanismes moléculaires derrière sont mal compris. Nous avons récemment développé un dispositif simple pour appliquer la compression cyclique locale (LCC), qui peut générer des ondes de pression intramusculaire avec des amplitudes variables. Utilisant ce dispositif, nous avons démontré que LCC module des réponses inflammatoires des macrophages in situ et soulage l’atrophie musculaire induite par l’immobilisation. Ici, nous décrivons des protocoles pour l’optimisation et l’application de LCC comme intervention mass-like contre l’inflammation induite par l’immobilisation et l’atrophie des muscles squelettiques des membres postérieurs de souris. Le protocole que nous avons développé peut être utile pour étudier le mécanisme sous-jacent aux effets bénéfiques de l’exercice physique et le massage. Notre système expérimental fournit un prototype de l’approche analytique pour élucider la régulation mécanique de l’homéostasie musculaire, bien que d’autres développements doivent être faits pour des études plus complètes.

Introduction

Le massage est généralement reconnu comme bénéfique à la fois pour soulager la douleur et l’amélioration de la performance physique chez les athlètes de compétition et les non-athlètes1,2. En fait, des études antérieures ont montré que le massage supprime l’inflammation locale3 et incite à la récupération des dommages musculaires post-exercice4,5. Les mécanismes moléculaires sous-jacents aux effets bénéfiques du massage restent largement inconnus.

L’une des difficultés avec l’enquête mécaniste sur le massage est liée à la reproductibilité des techniques expérimentales par lesquelles des interventions de massage sont testées. Dans des études antérieures, les procédures expérimentales qui imitent le massage impliquent principalement l’application d’interventions physiques utilisant les parties du corps des praticiens, telles que les paumes et les doigts6,7,8. Il est donc difficile de reproduire avec précision leur ampleur, leur fréquence, leur durée et leur mode.

De nombreux dispositifs ont été développés pour appliquer des charges mécaniques définies sur les tissus cibles. Par exemple, Zeng et coll. ont mis au point un système pneumatique pour la charge mécanique de longueur des membres postérieurs des rats9 et Wang et coll. ont mis au point un dispositif méchatronique qui peut appliquer des charges mécaniques semblables à des massages aux membres postérieurs des rats et des lapins avec contrôle de rétroaction en temps réel10. Par rapport à eux, notre système local de compression cyclique (LCC) est beaucoup plus simple, exigeant beaucoup moins de coûts pour la construction. Néanmoins, nous pouvons reproduire les changements de pression intramusculaire qui sont générés pendant la légère contraction musculaire. À l’aide de ce dispositif, nous avons démontré avec succès que les interventions mécaniques semblables à des massages modulent la dynamique des fluides interstitiels locaux et atténuent l’atrophie musculaire induite par l’immobilisation11.

Ici, nous décrivons les détails de notre dispositif et le protocole, qui peut aider à explorer les mécanismes moléculaires derrière les effets positifs des exercices et des massages. Les schémas du protocole sont présentés sous la forme d’une figure supplémentaire 1.

Protocol

Toutes les expériences sur les animaux ont été menées sous l’approbation du Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux du Centre national de réadaptation pour les personnes handicapées. 1. Immobilisation des membres postérieurs bilatéraux de souris REMARQUE : Des souris mâles c57BL/6 ont été utilisées pour des expériences à l’âge de 11 – 12 semaines après l’acclimatation pendant au moins 7 jours. Anesthésiez adéquatement…

Representative Results

Conformément à nos observations précédentes12, l’ASC des myofibres gastrocnemius a été considérablement diminuée par immobilisation postérieure(figure 2A,B). En outre, notre analyse de coloration d’immunofluorescence a indiqué que les cellules exprimant MCP-1 et TNF-, qui jouent tous les deux des rôles clés en réglant des processus inflammatoires13,14, sensiblement augmenté dans …

Discussion

Nous avons décrit une méthode pour appliquer un stimulus mécanique massage-like, qui a des effets anti-inflammatoires. Notre système a des avantages suivants, même par rapport à ceux signalés précédemment. Tout d’abord, les études précédentes n’ont pas défini quantitativement les forces mécaniques appliquées2 ou défini leurs magnitudes en fonction de la mesure à la surface du corps, mais pas à l’intérieur des tissus10. En revanche, nous avons mesuré la p…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions K. Nakanishi, K. Hamamoto, N. Kume et K. Tsurumi pour leur soutien constant tout au long du projet. Ce travail a été en partie soutenu par le Fonds de recherche intra-muros du ministère japonais de la Santé, du Travail et du Bien-être social; Subventions d’aide pour la recherche scientifique de la Société japonaise pour la promotion de la science; Programme soutenu par MEXT pour la Fondation de recherche stratégique des universités privées, 2015-2019 du ministère japonais de l’Éducation, de la Culture, des Sports, des Sciences et de la Technologie (S1511017).

Materials

Aluminum wire DAISO JAPAN B028 An aluminum wire is used to avoid escaping restriction by the wire
Blood pressure telemeter Millar SPR-671 A blood pressure telemeter is used to mesure intramuscular pressure.
DAPI Thermo Fisher Scientific D1306 DAPI is a fluorescent probe which is commonly used to stain DNA for fluorescent microscopy.
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 (Dilution ratio, 1:500) Invitrogen A11034 Antibody for immunohistochemical staining.
Goat anti-rat Alexa Fluor 568 (Dilution ratio, 1:500)) Invitrogen A11077 Antibody for immunohistochemical staining.
ImageJ NIH N/A Analysis software for image
LabChart8 ADInstrumens   Analysis software for acquiring biological signals.
Prolong gold Thermo Fisher Scientific P36930 Prolong gold is for mounting stained samples.
Protein Block Serum-Free Dako X090930-2 For blocking non-specific background staining in immunohistochemical procedures.
Rat monoclonal anti-laminin-2 antibody (Dilution ratio, 1:1000) Sigma Aldrich L0663 Antibody for immunohistochemical staining.
Rat monoclonal anti-F4/80 antibody (Dilution ratio, 1:500) Abcam ab6640 Antibody for immunohistochemical staining.
Rabbit polyclonal anti-MCP-1 antibody (Dilution ratio, 1:1000) Abcam ab25124 Antibody for immunohistochemical staining.
Rabbit polyclonal anti-TNF-α antibody (Dilution ratio, 1:1000) Abcam ab66579 Antibody for immunohistochemical staining.
Surgical tape 3M Japan 1530EP-0 Surgical tape is used to restrict joint movement.

Referencias

  1. Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
  2. Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R. Effects of leg massage on recovery from high intensity cycling exercise. British Journal of Sports Medicine. 38 (2), 173-176 (2004).
  3. Waters-Banker, C., Butterfield, T. A., Dupont-Versteegden, E. E. Immunomodulatory effects of massage on nonperturbed skeletal muscle in rats. Journal of Applied Physiology. 116 (2), 164-175 (2014).
  4. Haas, C., et al. Massage timing affects postexercise muscle recovery and inflammation in a rabbit model. Medicine & Science in Sports & Exercise. 45 (6), 1105-1112 (2013).
  5. Crane, J. D., et al. Massage therapy attenuates inflammatory signaling after exercise-induced muscle damage. Science Translational Medicine. 4 (119), 119ra113 (2012).
  6. Bove, G. M., Harris, M. Y., Zhao, H., Barbe, M. F. Manual therapy as an effective treatment for fibrosis in a rat model of upper extremity overuse injury. Journal of the Neurological Sciences. 361, 168-180 (2016).
  7. Andrzejewski, W., et al. Increased skeletal muscle expression of VEGF induced by massage and exercise. Folia Histochemica et Cytobiologica. 53 (2), 145-151 (2015).
  8. Mantovani Junior, N., et al. Effects of massage as a recuperative technique on autonomic modulation of heart rate and cardiorespiratory parameters: a study protocol for a randomized clinical trial. Trials. 19 (1), 459 (2018).
  9. Zeng, H., Butterfield, S., Agarwal, F., Haq, T., Zhao, Y. An engineering approach for quantitative analysis of the lengthwise strokes in massage therapies. Journal of Medical Devices. 2 (4), (2008).
  10. Wang, Q., et al. A mechatronic system for quantitative application and assessment of massage-like actions in small animals. Annals of Biomedical Engineering. 42 (1), 36-49 (2014).
  11. Saitou, K., et al. Local cyclical compression modulates macrophage function in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Clinical Science. 132 (19), 2147-2161 (2018).
  12. Onda, A., et al. A New mouse model of skeletal muscle atrophy using spiral wire immobilization. Muscle Nerve. 54 (4), 788-791 (2016).
  13. Luster, A. D. Chemokines–chemotactic cytokines that mediate inflammation. The New England Journal of Medicine. 338, 436-445 (1998).
  14. Reid, M. B., Li, Y. P. Tumor necrosis factor-α and muscle wasting: a cellular perspective. Respiratory Research. 2 (5), 269-272 (2001).
  15. Baumann, J. U., Sutherland, M. D., Hangg, A. Intramuscular pressure during walking: An experimental study using the wick catheter technique. Clinical Orthopaedics Related Research. 145, 292-299 (1979).
  16. Lee, I., et al. Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy. Lancet. 380, 219-229 (2012).

Play Video

Citar este artículo
Sakitani, N., Maekawa, T., Saitou, K., Suzuki, K., Murase, S., Tokunaga, M., Yoshino, D., Sawada, K., Takashima, A., Nagao, M., Ogata, T., Sawada, Y. Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes. J. Vis. Exp. (151), e59475, doi:10.3791/59475 (2019).

View Video