수명이 긴 플라즈마 세포에 인간의 정상적인 메모리 B 세포의 체 외 분화 모델
Summary
생체 외에서 B 세포 플라즈마 세포 차별화 모델을 보고 다단계 문화 시스템을 사용 하 여, 우리.
Abstract
플라즈마 세포 (Pc)는 많은 양의 항 체를 분 비 하 고 활성화 된 B 세포에서 개발. Pc 희귀 세포 골 수 또는 점 막에 위치 하 고 체액 성 면역을 확인 합니다. 그들의 낮은 주파수 및 위치, Pc의 연구는 어려운 인간에서. 우리 PC에는 B를 보고 선택한 조합의 vivo에서 발생 하는 순차 세포 분화를 재현할 수 있도록 하는 cytokines 및 활성화 분자를 사용 하 여 체 외 분화 모델. 그리고 마지막으로, 긴에이 체 외 모델, 메모리 B 세포 (MBCs) (PBs), 초기 Pc 사전 plasmablasts (prePBs), plasmablasts로 차별화에 Pc는 표현 형 가까운 건강 한 개인. 에서 그들의 대응에 우리 또한 오픈 액세스 생물 정보학 GEP 데이터 PC 분화에 관련 된에서 가장 눈에 띄는 정보를 분석 하는 도구를 만들었습니다. 인간의 B PC 차별화 하 고 현재 연구에 연구를 이러한 리소스를 사용할 수 있습니다, 그리고 우리 인간의 B PC 차별화를 하는 동안 후 요인의 유전자 표현 규제 조사.
Introduction
플라즈마 세포 (Pc) B 세포의 분화는 체액 성 면역에 대 한 필수적 이며 감염1에 대 한 호스트를 보호. B PC 차별화를 주요 변화 항 체 분 비에 맞게 전송 용량 및 신진 대사에 연결 됩니다. B PC 차별화를 제어 하는 전사 인자 광범위 하 게 연구 하 고 밝혀 독점 네트워크 B 및 PC 관련 전사를 포함 하 여 요인 (TFs)2. B 세포, PAX5 BCL6, BACH2 TFs에 B 세포 정체성2,3의 수호자. 유도 IRF4, PRDM1 인코딩 BLIMP1 및 XBP1 PC TF의 B 세포 유전자를 소화 하 고 유도 조정된 항 체 은닉 세포 transcriptional 프로그램3,,45. 이러한 조정된 transcriptional 변화는 secreted 형태의 면역 글로불린 무거운 체인2,3, 막 바인딩 폼에서 스위치 함께 Ig 유전자 녹음 방송 활성화와 관련 4. B PC 차별화를 바인딩과 그물에 관련 된 유전자의 유도로 연결 기능과 Golgi 기구 펼쳐진된 단백질 응답 (UPR) 활성화의 합성을 수용 하 여 PC에서 핵심적인 역할을 담당할 것으로 알려져 수 반하는 은닉 면역 글로불린6,7. TF XBP1이 셀룰러 적응8,,910에서 주요 역할을 한다.
B 세포와 Pc는 체액 성 면역의 중요 한 선수. 이해 하는 생물 학적 제어 생산과 정상 혈장 세포의 생존은 효율적인 면역 반응 및 면역 또는 면역 결핍을 방지 하는 치료 내정간섭에 중요 하 처리 합니다. PC는 전체 생물 학적 특성, 특히 인간에서에서 방해 해 부 위치에서 일어나는 초기 분화 단계와 희귀 세포 이다. 다단계 문화 시스템을 사용 하 여, 우리 PC 차별화 모델에는 생체 외에서 B를 보고 있다. 이 모델 재현 순차 세포 분화 및 성숙 vivo11,12,13. 에 다른 장기에서 발생 첫 번째 단계에서 메모리 B 세포 처음 CD40 ligand, oligodeoxynucleotides 및 cytokine 조합 하 여 4 일에 활성화 하 고 preplasmablasts (PrePBs)으로 차별화 합니다. 두 번째 단계에서 preplasmablasts는 CD40L oligodeoxynucleotides 자극을 제거 하 고 cytokine 조합을 변경 하 여 plasmablasts (PBs)로 분화를 유도. 세 번째 단계에서 plasmablasts는 cytokine 조합11,12변경 하 여 초기 Pc로 차별화를 유도. 네 번째 단계 이러한 초기 Pc 골 수 기질 세포 조절 매체와 경작 하 여 완전히 성숙한 Pc를 소개 했다 또는 성장 요인13을 선택. 이러한 성숙한 Pc 생체 외에서 몇 달 동안 살아남을 수 있고 분 비 면역 글로불린 (그림 1)의 높은 양의. 흥미롭게도, 우리의 생체 외에서 모델이 조정 transcriptional 변화와 감지 vivo에서11,12,13,14 수 있는 PC 단계에 다른 B 형 ,15. Pc는 희귀 세포 및 우리의 체 외 분화 모델 인간의 B PC 차별화를 연구 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
인간, PC 희귀 세포 분화 단계 전체 생물 학적 특성을 방해 해 부 장소에서 일어나는. 우리 개발 활성화 분자와 cytokines의 다양 한 조합에서 발생 하는 순차 세포 분화를 재생 하기 위하여 적용 이후에 다단계 문화 시스템을 사용 하 여 PC 차별화 모델에 생체 외에서 B는 vivo11,,1213에 다른 기관/조직.
Pc 차별화 ?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 프랑스 잉카 (인 국가 뒤 암)에서 교부 금에 의해 지원 되었다 연구소 (PLBIO15-256), ANR (넥타이-건너뛰기) 및 ITMO 암 (m M & TT).
Materials
| anti-CD2 magnetic beads | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Anti-histidine | R&D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T |
|
| human Transferin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinan Human CD40L-hi | R&D Systems | 2706-CL | |
| Recombinant Human APRIL | R&D Systems | 5860-AP-010 | |
| Recombinant Human IL-10 | R&D Systems | 217-IL- | |
| Recombinant Human IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Recombinant Human IL-2 Protein | R&D Systems | 202-IL- | |
| Recombinant Human IL-6 | Peprotech | 200-06 |
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