Summary

En ny Transportabel In Vitro eksponering kassette for Aerosol prøveudtagning

Published: February 22, 2019
doi:

Summary

Vi præsenterer her, en protokol for at udføre bærbare cellulære aerosol engagementer og måle cellulære reaktion. Metoden bruger celler, dyrkes på grænsefladen luft-væske, efterligne i vivo fysiologi. Cellulære reaktion på kobber nanopartikel aerosoler blev observeret som oxidativt stress gennem reaktive ilt arter generation og cytotoksicitet som laktat dehydrogenase udgivelse.

Abstract

Denne protokol indfører et nyt in vitro- eksponering system, som kan bæres, herunder dens karakteristika og ydeevne. Air-liquid interface (ALI) in vitro- eksponering systemer er ofte store og pladskrævende, vanskeliggør transport til feltet og drift ved kilden af emission eller inden for indåndingszonen. Gennem miniaturisering af systemerne, kan laboratoriet bringes til feltet, fremskynde behandlingstid og giver en mere passende eksponering metode, der ikke ændrer aerosol før du kontakter cellerne. Transportabel In vitro eksponering kassette (PIVEC) tilpasser en 37 mm filter kassette til in vitro- toksicitet test uden for en traditionel laboratorium indstilling. PIVEC var kendetegnet ved hjælp af tre størrelser af kobber nanopartikler til at bestemme deposition effektivitet baseret på gravimetrisk og partikel nummer koncentration analyse. Indledende cytotoksicitet eksperimenter blev udført med udsatte Lungeceller at fastslå systemets evne til at deponere partikler samtidig opretholde cellernes levedygtighed. PIVEC giver et tilsvarende eller større deposition effektivitet hvor sammenligner hen til rådighed vinkelrette flow i vitro eksponering enheder. Trods lavere prøve overførselshastigheden giver den lille størrelse nogle fordele til nuværende in vitro- ALI eksponering systemer. Disse omfatter evnen til at blive båret til personlige overvågning, mobilitet fra laboratoriet til kilden til emission, og mulighed for at set-up flere systemer til rumlige opløsning samtidig opretholde en lavere bruger omkostninger. PIVEC er et system, der er i stand til at indsamle aerosoler i feltet og i indåndingszonen på en luft-interface, in vitro- model.

Introduction

Personlige prøvetagning ved hjælp af in vitro- teknikker kunne give omfattende oplysninger om de biologiske virkninger af aerosoler på arbejdspladsen. 1 udsættelse for forurenende stoffer i luften omfatte engagementer med kemiske, at de indsamlede Luftprøver neddykket betingelser hvor gassen er introduceret til cellesuspension, intermitterende engagementer ved hjælp af en enhed som en rocker eller direkte engagementer på luft-flydende interface (ALI). 2 mange af disse teknikker er udført med celler dyrket i suspension eller indsamling af prøver før eksponering, som kan påvirke den toksikologiske undersøgelse på grund af potentielle ændringer i aerosol. 3 for at undgå disse ændringer, laboratoriet kan bringes til feltet ved hjælp af flere in vitro- ALI kultur eksponering systemer, der anvendes i litteratur,4,5,6,7, 8,9,10,11,12,13 dog få er kommercielt tilgængelige. 8 , 9 , 12 disse systemer er ofte voluminøse, især når herunder instrumenter til regulering af temperatur og luftfugtighed af det cellulære miljø og strømningshastigheden af prøven aerosol. Ved hjælp af PIVEC, kan aerosol engagementer udføres uden for en traditionel lab indstilling eller inden for indåndingszonen mens efterligne indånding betingelser.

Bestemmelse af aerosol deposition i vitro er vigtigt til undersøgelse af sundhedsvirkninger som følge af indånding. Indåndingszonen, området inden for 30 cm fra munden og næsen,14 er afgørende for forståelse eksponering for nanopartikler og linker til de biologiske virkninger i lungerne. 2 ofte, deposition på celler er defineret som en aflejring effektivitet, partikler deponeret på og taget af celler opdelt af partikler system6,15 eller på en masse grundlag af de samme beløb. 4 , 16 de nuværende metoder til måling af aerosoler i indåndingszonen er filter baseret, indfange partikler over en given stikprøveperioden og bruge filtre til at foretage yderligere test. 17 personlige overvågning kræver en lille system, der kommer med afvejning af færre prøver.

Der er mange tilgange til at bestemme de sundhedsmæssige virkninger af eksponering for en aerosol. ALI model giver mulighed for aerosol skal indgives direkte til celler gennem luften som en reel eksponeringsscenarie, men det er mere omkostningseffektivt og mindre tid på intensiv end in vivo undersøgelser mens efterligne luft-flydende hindringer såsom øjne, huden, og lunger. Lungeceller dyrkes i ALI har evnen til at generere en polariseret barriere lag,18,19 , som producerer fysiologiske træk, der ligner i vivo lunge epitel, herunder produktion af slim og overfladeaktivt stof i specifikke bronkial eller alveolær cellelinjer, cilia slå,19 stram vejkryds,19,20 og celle polarisering. 18 ændringer som disse kan påvirke det cellulære respons målt i undersøgelser af toksicitet. 21 desuden ALI i vitro model resultater er ofte mere følsomme end celler udsat via suspension modeller22 og er i stand til model akut i vivo toksicitet ved indånding. 23 , 24 derfor, en ALI eksponering system, der er i stand til at udføre målinger inden for indåndingszonen er et naturligt næste skridt.

Ved at udsætte celler til aerosol direkte ved kilden af emission, opstår undersøgelse af virkningerne af alle gasser, semi-flygtige forbindelser og partikler involveret i blandingen. Når blandingen er indsamlet på et filter, gasser og flygtige forbindelser er ikke fanget og hele blandingen kan ikke undersøges. Derudover kan rekonstituering af partikler i en pulver eller en flydende suspension føre til sammenlægning eller partikel-væske interaktioner, såsom opløsning, i flydende suspension. 25 , 26 når aerosol partikler føjes til væsken, der er en højere potentiale for byområdet,25,27 dannelse af et protein corona,28 eller interaktion med forbindelser i den væske, som kan påvirke deposition og påvirke den biologiske respons. 29 , 30

Eksponering på ALI er baseret på tre vigtigste aerosol profiler, cloud bilæggelse, parallelt flow og vinkelrette flow. Cloud afregning, anvendes af Air-Liquid Interface celle eksponering (ALICE),4 er et batchsystem hvor partikler deponere gennem gravitationel og diffusional afregning som aerosol behandles som én enhed. Parallelt flow, bruges til elektrostatiske Aerosol in vitro- eksponering System (TAGSKÆGGET)5 og multikultur eksponering kammer (MEC) II,6 giver mulighed for deposition gennem tilsætning af Brownske bevægelser gennem flow profil. Vinkelret på strømmen, anvendes af en microsprayer,7 Nano Aerosol kammer for In vitro-toksicitet (NACIVT),11 og kommercielle ALI systemer8,9,10,12, tilføjer impaction af partikler i regionen deposition. Mange af disse eksponering systemer er store og pladskrævende, kræver overskydende systemer for aerosol forudgående konditionering, pumper for strøm, eller endda varme kamre til inkubation af celler. Denne store størrelse falder portabilitet af systemet. I stedet for prøveudtagning direkte ved kilden af emission har disse systemer ofte prøver bringes til en lab eller model aerosoler genereret for analyse. Kompleksiteten af den udsendte aerosol kan gå tabt i oversættelsen fra feltet til laboratoriet. PIVEC er mindre end de nuværende systemer, med en ekstern areal af ca. 460 cm2 og vejer bare 60 gram, med varme og fugtighed kontrol indarbejdet i systemet giver mulighed for en yderst transportabel enhed. Nedsat størrelse og vægt Lad systemet være slidte eller taget til kilden til eksponering, tillader direkte prøveudtagning.

Den store størrelse af nuværende eksponering systemer reducerer også evnen til at udføre prøveudtagning for at undersøge rumlige forløb i koncentrationer. Denne beslutning er nøglen, når bestemmelse af toksikologiske effekter af mange potentielle miljømæssige og erhvervsbetingede risici såsom køreveje udstødning partikler sagen eller arbejdspladsen aktiviteter hvor aerosolization opstår. Straks efter emission, der bliver en rumlig varians i partikel koncentration. Dette vokser med tiden som partikler spredes i hele atmosfæren og disse effekter kan ændre baseret på de omgivende betingelser, såsom temperatur, tryk, vind og sol. Partikler kan begynder at alder og oxidere samt en gang udsendte31,32 og spredning satser påvirkes af topografi; højere koncentrationer vil blive fundet i kløfter og tunneller, hvor dispersion effekter er aftaget, og lavere koncentrationer kan findes hvor der er et stort område for spredning. 33 disse ændringer i dispersion satser kan have betydelige virkninger på menneskers sundhed og kan ses, når man sammenligner antallet af astmatiske voksne bor i urban versus i landdistrikterne indstillinger. 34 mens mange eksponering systemer giver flere prøver på én gang, flere systemer er nødvendigt med en overflod af store udstyr til at udføre rumlige opløsning.

Ved at bringe lab til feltet, kan tidspunktet for analyse være nedsat ved hjælp af hele cellen som en sensor. Følgende kendte biologiske mekanismer og slutpunkter kan støtte ved fastsættelsen af aerosol sammensætning og størrelse. På grund af langsom clearance metoder, herunder mucociliary clearance, fagocytose og omplantning, interagerer disse partikler ofte med celler i ca dage til uger3 generere oxidativ stress, betændelse og endda celledød. Disse biologiske slutpunkter kan være udgangspunktet for negative resultat veje for Kardiovaskulær sygdom eller kronisk obstruktiv lungesygdom. Derudover udførte Wiemenn et al. et array af in vitro- assays skal sammenlignes med litteratur værdier for kort sigt i vivo toksicitet ved indånding. 35 In vivo svar var forudsagt med to af fire positive resultater fra afprøvning cytotoksicitet via laktat dehydrogenase frigivelse, oxidativ stress fra glutathion reduktion og hydrogenperoxid dannelsen og frigivelse og betændelse potentielle fra tumor nekrose faktor alfa genet. Ud af ti nanosized metaloxider testet, seks testet som aktiv (titanium oxid, zinkoxid og fire forskellige cerium oxid) ved hjælp af engagementer in vitro med bekræftelse på vivo

For at studere virkningerne af aerosoler i erhvervsmæssig omgivelser, udviklet vores lab PIVEC for engagementer i feltet. Derudover, PIVEC kan bæres for personlige prøveudtagning overvåge og undersøge indåndingseksponering som 37 mm filter kassette36 eller flere systemer kan bruges til at opnå rumlige opløsning inden for et givet område. I denne protokol gennemgås karakterisering og brug af PIVEC. Efter eksponering observeres de biologiske virkninger gennem cytotoksicitet assays.

Protocol

Operatørerne skal bære personlige værnemidler (f.eks. laboratoriekittel, handsker, beskyttelsesbriller) når udførelse af trin 1, 2, 3, 5 og 6. 1. forberedelse af materialer Forberede materiale til system forsamling og eksponering for repeterbarhed. Sørg for at bruge nye eller 70% ethanol renset ¼” indre diameter ledende slanger og ¼” ydre diameter stik for samlingen system. Butik test materialer herunder filtre, PIVEC komponenter, pincet…

Representative Results

Erhvervsmæssig in vitro- toksikologi indebærer opretholdelse cellulære levedygtighed mens de udfører aerosol eksponering. PIVEC systemet er vist i figur 2, herunder temperaturen og fugtighed kontrol og den slidte PIVEC. Temperaturen blev opretholdt ved hjælp af en batteridrevet resistive varmelegeme og aerosol fugtet, ved hjælp af øget naturlige befugtning gennem en porøs, fugtet rør. I en kontrolleret aerosol indstilling inde i et laborator…

Discussion

Filterkassetter giver en enkel og billig metode til indsamling af aerosoler i indåndingszonen; dog aerosol prøver udvundet fra filtre ikke repræsenterer den hele aerosol (dvs. gasser, flygtige stoffer og partikler) og således begrænse vurderingen af relaterede biologiske virkninger. Ved hjælp af det oprindelige design af 37 mm filter kassette, er PIVEC designet til at opretholde portabiliteten skulle og efterligne i vivo aflejring af partikler fra indånding. PIVEC er væsentligt mindre end nuværende ALI …

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne vil gerne takke Boris Solomonov og Virginia Commonwealth Innovation Machine Shop for hjælp med rapid prototyping enheden. Forfatterne vil også gerne takke Cristian Romero-Fuentes af gruppen Lewinski, Dr. Vitaliy Avrutin, Dr. Dmitry Pestov og Virginia Commonwealth nanomaterialer Core karakterisering faciliteten for deres hjælp med partikel karakterisering. Dette arbejde blev støttet af startup midler til Dr. Lewinski fra College of Engineering på Virginia Commonwealth University.

Materials

Scanning mobility particle sizer (SMPS) TSI, Inc. 3910 NanoSMPS
Optical particle sizer (OPS) TSI, Inc. 3330
Stainless Steel Pipe, 4" Long McMaster-Carr 4830K116 Standard-Wall 304/304L, Threaded on Both Ends, 1/8 Pipe Size
Brass Ball Valve with Lever Handle McMaster-Carr 4112T12 Compact High-Pressure Rating, 1/8 NPT Female
Steel Pipe, 2" Long McMaster-Carr 7753K121 Standard Wall, Threaded on One End, 1/8 Pipe Size
HEPA filter GE Healthcare 09-744-12 HEPA-Cap Disposable Air Filtration Capsule
Vacuum Generator PISCO USA VCH10-018C
PIVEC VCU For design please contact authors
Resistive heater
1/4" barbed connectors Zefon International, Inc. 459743
Porous tubing Scientific Commodities, Inc. BB2062-1814A Hydrophilic 10 um pores
Battery power bank
Cell culture insert Fisherbrand 353095 24 well plate insert
Filter Forceps Fisherbrand 09-753-50
Transfer Pipette ThermoScientific 13-711-27
Glass Fiber Filters SKC 225-7 Binder-Free Type AE Filter 37 MM 1.00 um pore
Ultra Micro Balance A&D BM-22 Housed in environmental chamber
37 mm filter cassette SKC 225-3250 Filter Cassette Blank, 37 mm, Clear Styrene
Variable flow vacuum pump SKC 220-5000TC AirChek TOUCH, 5 to 5000 mL/min
Copper Particles U.S. Research Materials, Inc. US1090 40 nm
Copper Particles U.S. Research Materials, Inc. US1088 100 nm
Copper Particles U.S. Research Materials, Inc. US1117M 800 nm

Referencias

  1. Lewinski, N. A., Secondo, L. E., Ferri, J. K. Enabling Real-Time Hazard Assessment at the Workplace Enabling Real-Time Hazard Assessment at the Workplace. 14th Global Congress on Process Safety. , 1-9 (2018).
  2. Bakand, S., Winder, C., Khalil, C., Hayes, A. Toxicity assessment of industrial chemicals and airborne contaminants: transition from in vivo to in vitro test methods: a review. Inhalation Toxicology. 17, 775-787 (2005).
  3. Bakand, S., Hayes, A. Troubleshooting methods for toxicity testing of airborne chemicals in vitro. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 61 (2), 76-85 (2010).
  4. Lenz, A. G., et al. A dose-controlled system for air-liquid interface cell exposure and application to zinc oxide nanoparticles. Particle and Fibre Toxicology. 6, 32 (2009).
  5. de Bruijne, K., et al. Design and testing of Electrostatic Aerosol in Vitro Exposure System (EAVES): an alternative exposure system for particles. Inhalation Toxicology. 21, 91-101 (2009).
  6. Asimakopoulou, A., Daskalos, E., Lewinski, N., Riediker, M., Papaioannou, E., Konstandopoulos, A. G. Development of a dose-controlled multiculture cell exposure chamber for efficient delivery of airborne and engineered nanoparticles. Journal of Physics: Conference. 429, 1-10 (2013).
  7. Grigg, J., et al. DNA damage of macrophages at an air-tissue interface induced by metal nanoparticles Macrophage. Nanotoxicology. 3 (4), 348-354 (2009).
  8. Aufderheide, M., Knebel, J. W., Ritter, D. An improved in vitro model for testing the pulmonary toxicity of complex mixtures such as cigarette smoke. Experimental and Toxicologic Pathology. 55, 51-57 (2003).
  9. Aufderheide, M., Halter, B., Möhle, N., Hochrainer, D. The CULTEX RFS: A comprehensive technical approach for the in vitro exposure of airway epithelial cells to the particulate matter at the air-liquid interface. BioMed Research International. 2013 (1), 1-15 (2013).
  10. Tippe, A., Heinzmann, U., Roth, C. Deposition of fine and ultrafine aerosol particles during exposure at the air/cell interface. Journal of Aerosol Science. 33, 207-218 (2002).
  11. Savi, M., et al. A novel exposure system for the efficient and controlled deposition of aerosol particles onto cell cultures. Environmental Science and Technology. 42, 5667-5674 (2008).
  12. Fröhlich, E., et al. Comparison of two in vitro systems to assess cellular effects of nanoparticles-containing aerosols. Toxicology in Vitro. 27, 409-417 (2013).
  13. Frijns, E., et al. A Novel Exposure System Termed NAVETTA for in Vitro Laminar Flow Electrodeposition of Nanoaerosol and Evaluation of Immune Effects in Human Lung Reporter Cells. Environmental Science and Technology. 51 (9), 5259-5269 (2017).
  14. Vincent, J. H. . Aerosol Science for Industrial Hygienists. , (1995).
  15. Fujitani, Y., Sugaya, Y., Hashiguchi, M., Furuyama, A., Hirano, S., Takami, A. Particle deposition efficiency at air-liquid interface of a cell exposure chamber. Journal of Aerosol Science. 81, 90-99 (2015).
  16. Elihn, K., Cronholm, P., Karlsson, H. L., Midander, K., Odnevall Wallinder, I., Möller, L. Cellular Dose of Partly Soluble Cu Particle Aerosols at the Air-Liquid Interface Using an. In Vitro Lung Cell Exposure System. Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 26 (2), 84-93 (2013).
  17. . . Aerosols Handbook Measurement, Dosimetry, and Health Effects. , (2005).
  18. de Souza Carvalho, C., Daum, N., Lehr, C. M. Carrier interactions with the biological barriers of the lung: Advanced in vitro models and challenges for pulmonary drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. 75, 129-140 (2014).
  19. Fattal, E., Grabowski, N., Mura, S., Vergnaud, J., Tsapis, N., Hillaireau, H. Lung Toxicity of Biodegradable Nanoparticles. Journal of Biomedical Nanotechnology. 10 (10), 2852-2864 (2014).
  20. Klein, S. G., Serchi, T., Hoffmann, L., Blömeke, B., Gutleb, A. C. An improved 3D tetraculture system mimicking the cellular organisation at the alveolar barrier to study the potential toxic effects of particles on the lung. Particle and Fibre Toxicology. 10, 31 (2013).
  21. Oberdörster, G., et al. Principles for characterizing the potential human health effects from exposure to nanomaterials: elements of a screening strategy. Particle and Fibre Toxicology. 2, 8 (2005).
  22. Secondo, L. E., Liu, N. J., Lewinski, N. A. Methodological considerations when conducting in vitro, air-liquid interface exposures to engineered nanoparticle aerosols. Critical Reviews in Toxicology. , 1-32 (2016).
  23. Sayes, C. M., Reed, K. L., Warheit, D. B. Assessing toxicology of fine and nanoparticles: Comparing in vitro measurements to in vivo pulmonary toxicity profiles. Toxicological Sciences. 97 (1), 163-180 (2007).
  24. Maier, K. L., et al. Health effects of ambient particulate matter–biological mechanisms and inflammatory responses to in vitro and in vivo particle exposures. Inhalation Toxicology. 20 (May 2007), 319-337 (2008).
  25. Cohen, J. M., Teeguarden, J. G., Demokritou, P. An integrated approach for the in vitro dosimetry of engineered nanomaterials. Particle and Fibre Toxicology. 11 (1), 20 (2014).
  26. Deloid, G., et al. Estimating the effective density of engineered nanomaterials for in vitro dosimetry. Nature Communications. 5, 3514 (2014).
  27. Pal, A. K., Bello, D., Cohen, J., Demokritou, P. Implications of in vitro dosimetry on toxicological ranking of low aspect ratio engineered nanomaterials. Nanotoxicology. , 1-15 (2015).
  28. Walkey, C., et al. Protein corona fingerprinting predicts the cellular interaction of gold and silver nanoparticles. ACS Nano. 8 (3), 2439-2455 (2014).
  29. Raemy, D. O., et al. Effects of flame made zinc oxide particles in human lung cells – a comparison of aerosol and suspension exposures. Particle and Fibre Toxicology. 9 (1), 33 (2012).
  30. Holder, A. L., Lucas, D., Goth-goldstein, R., Koshland, C. P. Cellular response to diesel exhaust particles strongly depends on the exposure method. Toxicological Sciences. 103 (1), 108-115 (2008).
  31. Sanderson, P., et al. Characterisation of iron-rich atmospheric submicrometre particles in the roadside environment. Atmospheric Environment. 140. , 167-175 (2016).
  32. Burtscher, H. Physical characterization of particulate emissions from diesel engines: A review. Journal of Aerosol Science. 36 (7), 896-932 (2005).
  33. Ris, C. U.S. EPA health assessment for diesel engine exhaust: a review. Inhalation Toxicology. 19 (Suppl. 1), 229-239 (2007).
  34. Jie, Y., Isa, Z. M., Jie, X., Ju, Z. L., Ismail, N. H. Urban vs. Rural Factors That Affect Adult Asthma. Reviews of Environmental Contamination and Toxicology. 226, (2013).
  35. Wiemann, M., Vennemann, A., Sauer, U. G., Wiench, K., Ma-Hock, L., Landsiedel, R. An in vitro alveolar macrophage assay for predicting the short-term inhalation toxicity of nanomaterials. Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 16 (2016).
  36. Kenny, L. C., et al. A collaborative european study of personal inhalable aerosol sampler performance. Annals of Occupational Hygiene. 41 (2), 135-153 (1997).
  37. Tiwari, A. J., Fields, C. G., Marr, L. C. A Cost-Effective Method of Aerosolizing Dry Powdered Nanoparticles. Aerosol Science and Technology. 47 (11), 1267-1275 (2013).
  38. Blank, F., Rothen-Rutishauser, B. M., Schurch, S., Gehr, P. An Optimized In Vitro Model of the Respiratory Tract Wall to Study Particle Cell Interactions. Journal of Aerosol Medicine. 19 (3), 392-405 (2006).
  39. Laboratory, N. C. . NCL Method GTA-2 HEP G2 Hepatocarcinoma Cytotoxicity Assay. (November), 1-9 (2015).
  40. Kim, J. S., Peters, T. M., O’Shaughnessy, P. T., Adamcakova-Dodd, A., Thorne, P. S. Validation of an in vitro exposure system for toxicity assessment of air-delivered nanomaterials. Toxicology in Vitro. 27 (1), 164-173 (2013).
  41. Mertes, P., et al. A compact and portable deposition chamber to study nanoparticles in air-exposed tissue. Journal of aerosol medicine and pulmonary drug delivery. 26, 228-235 (2013).
  42. Panas, A., et al. Silica nanoparticles are less toxic to human lung cells when deposited at the air-liquid interface compared to conventional submerged exposure. Beilstein Journal of Nanotechnology. 5, 1590-1602 (2014).
  43. Zavala, J., et al. Regulating temperature and relative humidity in air-liquid interface in vitro systems eliminates cytotoxicity resulting from control air exposures. Toxicology Research. 6, 448-459 (2017).
  44. Jing, X., Park, J. H., Peters, T. M., Thorne, P. S. Toxicity of copper oxide nanoparticles in lung epithelial cells exposed at the air – liquid interface compared with in vivo assessment. TOXICOLOGY IN VITRO. 29 (3), 502-511 (2015).
  45. Bitterle, E., et al. Dose-controlled exposure of A549 epithelial cells at the air-liquid interface to airborne ultrafine carbonaceous particles. Chemosphere. 65, 1784-1790 (2006).
  46. Steinritz, D., et al. Use of the Cultex Radial Flow System as an in vitro exposure method to assess acute pulmonary toxicity of fine dusts and nanoparticles with special focus on the intra- and inter-laboratory reproducibility. Chemico-Biological Interactions. 206 (3), 479-490 (2013).
  47. Cronholm, P., et al. Intracellular uptake and toxicity of Ag and CuO nanoparticles: A comparison between nanoparticles and their corresponding metal ions. Small. 9 (7), 970-982 (2013).
  48. Cronholm, P., Midander, K., Karlsson, H. L., Elihn, K., Wallinder, I. O., Möller, L. Effect of sonication and serum proteins on copper release from copper nanoparticles and the toxicity towards lung epithelial cells. Nanotoxicology. 5 (2), 269-281 (2011).
  49. Midander, K., et al. Surface characteristics, copper release, and toxicity of nano- and micrometer-sized copper and copper(ll) oxide particles: A cross-disciplinary study. Small. 5 (3), 389-399 (2009).
check_url/es/58916?article_type=t

Play Video

Citar este artículo
Secondo, L. E., Wygal, N. J., Lewinski, N. A. A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling. J. Vis. Exp. (144), e58916, doi:10.3791/58916 (2019).

View Video