生体外でマウス縁帯 B 細胞のせん断流動誘起移行の解析

免疫細胞は人間の体内で最も運動性細胞、しばしば血液とリンパの流れからのせん断力と争わなければなりません。ただし、白血球^1,2,3,4、5のせん断力による移動の研究は比較的少ないがあります。流れ体外への免疫細胞の応答を分析するための信頼のおける定量的プロトコルをご紹介します。アッセイを実行してもコンポーネントの作製が必要ありませんし、市販されているすべての機器および消耗品。1 日で細胞の浄化、移行の分析など、プロトコルを実行できます。最後に、辺縁帯 B 細胞 (MZBs) の移行を説明するがプロトコルを適応免疫細胞の他のタイプの流れに対して移行を分析することができます。したがって、この試金を使用して、条件の包括的なパネルと白血球の広い範囲を体系的に分析することは不可能です。

MZBs は、マウスの脾臓とシャトルでのみ発見されている B 細胞の人口卵胞の内部とマージナル ゾーン^6,7,8,9間。辺縁帯厚約 5-10 の免疫細胞細胞の層であります。細胞層卵胞を包んで、¹⁰に、MZBs とマクロファージが、また不変の自然なキラー T (iNKT) 細胞、樹状細胞 (Dc) および他の中の好中球を主に成っています。辺縁帯の細胞は、卵胞周囲辺縁洞で終了している脾動脈から発生した単方向血流にさらされています。血辺縁帯を通じて縁洞の穴から流れるは赤脾静脈洞で収集し、¹¹循環に復元します。血液の流動、MZBs を洗うし、血で運ばれる抗原にそれらを公開します。MZBs は、自動的に血液にさらされない卵胞の内側と辺縁帯間の往復で卵胞に抗原を運ぶ。したがって、MZBs へシャトルバス卵胞、として血流¹² (図 1 a) せん断力を移行する必要があります。

このプロトコルでは定量的免疫細胞など MZBs がない流れまたは生体外で高流量に対応方法を決定する方法について述べる、明らかにどのようにするためにプログラムの体内に移行します。最初のステップで MZBs は市販のキットからの抗体に結合した磁気ビーズを用いたマウス脾臓から浄化されます。新鮮単離の MZBs が流れチェンバー スライドのウェルに導入、インテグリンのリガンド、着地させて、ポンプ システム (図 2 a) を使用して移行バッファーの流れにさらされています。セルは、タイムラプス ビデオ顕微鏡システムを使用して作成されます。無料の ImageJ のプラグイン、MTrack2^13,14、自動的にセルを追跡する分析のため、画像が処理されます。トラックは、速度、真直度、マイグレーション インデックスなど様々 なパラメーターを決定する無料 Ibidi 走化性ツール¹⁵定量化することができます。これらの値は、体内の免疫細胞の動きを制御する力を理解するためにせん断流移行に関する移行阻害剤、細胞刺激、ケモカイン、および他の移行に影響を与える化学物質の影響を決定する使用できます。