Helisel peptidler sülfür hayvan zinciri fotoğraf kaynaklı thiol-KD/thiol-yne hydrothiolation kullanarak thioether/vinil inşası için bir iletişim kuralı mevcut.
Burada, intramolecular/cins thiol KD-Tarih-reçine hydrothiolation kullanarak thioether hayvan zinciri peptidler hazırlanması için detaylı bir protokol açıklayın. Ayrıca, bu iletişim kuralını intramolecular thiol yne-çözüm hydrothiolation alkene/alkin yan zincirleri sahip amino acids ve sistein kalıntıları arasında kullanarak ben, ben + 4 pozisyonlar vinil sülfür gergin peptidler hazırlanması açıklar. Doğrusal peptidler bir standart Fmoc tabanlı katı fazlı peptid sentez (SPP’ler) kullanarak sentez. Thiol-Güney hydrothiolation intramolecular thio-Doğu reaksiyon veya peptid uzunluğu bağlı olarak bir cins thio-Doğu reaksiyon kullanılarak yapılır. Bu araştırmada, intramolecular thio-Doğu reaksiyon reçine üzerinde deprotection sistein kalıntıları doğrusal peptid tam sentezi takip trityl grupları kullanarak daha kısa peptidler söz konusu olduğunda gerçekleşir. Reçine sonra photoinitiator 4-methoxyacetophenone (Harita) ve 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP) kullanarak UV ışınlama için ayarlanır. Cins thiol-Doğu tepki bir N, N– dimethylformamide (DMF) çözücü Fmoc-Cys-OH çözülerek yapılır. Bu o zaman alkene taşıyan kalıntı bağlı kullanarak peptid ile tepki. Bundan sonra macrolactamization harekete geçirmek reaktif reçine tarih olarak benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBop), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt) ve 4-Methylmorpholine (NMM) kullanarak yapılır. Peptid sentez macrolactamization devam standart SPP’ler kullanarak. Thio-yne hydrothiolation söz konusu olduğunda doğrusal peptid reçine–dan i ciddi, kurutulmuş ve daha sonra degassed DMF içinde çözünmüş. Bu o zaman UV ışığı photoinitiator 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone ile (DMPA) kullanarak ışınlanmış. Reaksiyon, DMF buharlaşmış ve ham kalıntı çöktürülmüş ve yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) kullanarak saf. Bu yöntemler thioether hayvan zinciri döngüsel peptidler üstün fonksiyonel grup hoşgörü ve iyi verim sahiptir thio-KD/yne tıklayın Kimya kullanımı nedeniyle nesil basitleştirmek için işlev olabilir. Thioether tahvil giriş peptidler içine sistein kalıntıları nükleofilik doğa yararlanır ve redoks-hareketsiz disülfür bağları göre.
Protein-protein etkileşimleri (PPIs) modüle ligandlar geliştirmesi modern ilaç keşfi için çekici bir yaklaşım sağlar. Böylece, büyük bir çaba bu verimli PPIs1,2,3modüle Eğitim Roman kimyasal yöntemleri yatırdı. PPIs genellikle sığ, büyük ve/veya üretilmiyor etkileşen yüzeylerin oluşur ve küçük moleküller genelde PPIs4,5modülasyon için uygun olmayan ligandlar olarak kabul edilir. Bir uygun maruz etkileşen yüzey alanı ile bu sorun6,7gidermek için ideal aday protein arabirimleri yapısal özelliklerini taklit kısa peptidler temsil eder. Ancak, kısa peptidler genellikle sulu bir çözüm yapılandırılmamış. Gerçeğini peptid omurga ve iyi tanımlanmış biçimler oluşan intramolecular hidrojen bağı ağ ile rekabet su molekülleri su8‘ entropically olumsuz nedeni bu. Buna ek olarak, peptidler doğal olarak istikrar düşük ve hücre geçirgenlik özelliklerini büyük ölçüde onların biyolojik uygulamalar9,10sınırla. Protein veri Bankası (PDB) Analize göre > PPIs % 50’si kısa α-helix etkileşimleri11içerir. Böylece, farklı kimyasal yöntemler helix istikrar açısından geliştirdik. Bunlar arasında disülfit/thioether bağ oluşumu12,13,14, yüzük-kapanış sentezde15, laktam halkası oluşumu16, “Kimya17, eklenmesi tıklayın” perfluoroarenes18,19ve vinil-sülfür oluşumu20.
Stabilize helisel peptidler yaygın p53, dahil olmak üzere çeşitli hücre içi hedefleri için kullanılan östrojen reseptörleri, Ras, BCL-2 ailesi proteinler ve diğerleri21,22,23,24. ALRN-6924, bir all-hidrokarbon peptid çift inhibitörü olan MDM2 ve MDMX zımbalanmış, klinik araştırma25için kullanılıyor. Son birkaç yıl içinde bizim grup roman peptid sabitleme yöntemleri thiol-Doğu ve thiol yne reaksiyonlar26,27,28kullanarak geliştirme üzerinde odaklanmıştır. Genel olarak, doğal olarak bol miktarda sistein kullanıldığında bu fotoğraf tarafından başlatılan tepkiler hafif koşullar altında verimli göstermiştir. Buna ek olarak, biz bu tepkiler bir mükemmel fonksiyonel grup hoşgörü, biyo-dik ve peptid ve protein değişiklikler29için geçerli olduğu kanıtlanmış göstermiştir. Elde edilen thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler büyük ölçüde kısıtlaması peptidler kimyasal alanı artırmak bir değişken urgan üzerinde değişiklik merkezi sağlamak ve çok sayıda biyolojik uygulamalar30 kullandığı için geçerli olduğu kanıtlanmıştır ,31,32. Bugüne kadar yalnızca sınırlı raporlar thiol-KD/thiol-yne peptid cyclization ile ilgili tarif edilmistir. Anseth ve ark. tarafından 2009 yılında yayınlanan bir çalışmada, bir reçine üzerinde intramolecular thiol-Doğu Sistein ile harekete geçirmek alkenes arasında peptid cyclization için gösterdiği33tepkiydi. 2015 yılında, Chou ve ark. bir iki radikal başlatılan thiol-Doğu tepki peptid34 ve bir sonraki, sıralı thiol-yne/Doğu kaplin tepki35Zımbalama için nitelendirdi. Son zamanlarda, bir dizi thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler20,26,27tarihinde alan iş tanımladı. Bu iletişim kuralı yukarıda belirtilen thioether/vinil kaşif balonlu keşif sülfür peptidler daha geniş araştırma toplum için yararlı olacak umuduyla detaylı bir sentezi açıklar.
Şekil 3‘ te açıklanan-reçine intramolecular thio-Doğu cyclization içinde sistein kalıntı trityl grup kaldırılması sonraki photoreaction için önemli bir adım olduğu anlaşıldı. Buna ek olarak, peptid molekül ağırlığı öncesinde ve sonrasında tepki olarak aynı olması için bulundu Şekil 6Btasvir. Bu nedenle, HPLC kimlik veya DTNB tahlil tepki izlemek için gereklidir. Şekil 4‘ te açıklanan cins thio-Doğu…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar kabul mali desteği Çin hibe doğal Bilim Vakfı (No 21372023, 21778009 ve 81701818); Bakanlığı Bilim ve teknoloji-in Halk Cumhuriyeti Çin (No. 2015DFA31590); Shenzhen bilim ve teknoloji yenilik Komitesi (No. JCYJ20170412150719814, JCYJ20170412150609690, JCYJ20150403101146313, JCYJ20160301111338144, JCYJ20160331115853521, JSGG20160301095829250 ve GJHS20170310093122365); ve Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (No. 2017 M 610704).
Rink Amide MBHA resin(0.53 mmol/g) | HECHENG | GRM50407 | |
Standard Fmoc-protected amino acids | GL Biochem (Shanghai) Ltd. | ||
N-Methyl-2-pyrrolidinone | Shenzhen endi Biotechnology Co.Ltd. | 3230 | skin harmful |
N,N-Dimethyl formamide | Energy | B020051 | skin harmful |
Dichloromethane | Energy | W330229 | skin harmful |
N,N-Diisoproylethylamine | Aldrich | 9578 | irritant |
Trifluoroacetic acid | J&K | 101398 | corrosive |
Triisopropylsilane | J&K | 973821 | |
1,2-Ethanedithiol | J&K | 248897 | Stench |
2-(6-Chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate | GL Biochem (Shanghai) Ltd. | 851012 | |
Morpholine | Aldrich | M109062 | irritant |
Diethyl ether | Aldrich | 673811 | flammable |
Acetonitrile | Aldrich | 9758 | toxicity |
Methanol | Aldrich | 9758 | toxicity |
2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone | Energy | A050035 | |
4-methoxyacetophenone | Energy | A050098 | |
2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone | Energy | D070132 | |
5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) | J&K | 281281 | |
Benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate | Energy | E020172 | |
1-Hydroxybenzotriazole | Energy | D050256 | |
4-Methylmorpholine | Energy | W320038 | |
High Performance Liquid Chromatography | SHIMADZU | LC-30AD | |
Electrospray Ionization Mass | SHIMADZU | LCMS-8030 | |
Lyophilizer | Labconco | FreeZone | |
SpeedVac concentration system | Thermo | Savant | |
vacuum manifold | promega | A7231 | |
three-way stopcocks | Bio-Rad | 7328107 | |
poly-prep chromatography columns | Bio-Rad | 7311550 |