Summary

Gelijktijdige Video-EEG-ECG controle om te identificeren Neurocardiac dysfunctie in muismodellen van epilepsie

Published: January 29, 2018
doi:

Summary

Hier presenteren we een protocol om te slaan van de hersenen en hart bio signalen in muizen met behulp van gelijktijdige video, elektro-encefalografie (EEG) en elektrocardiogram (ECG). Ook beschrijven we methoden voor het analyseren van de resulterende opnamen van het EEG-ECG voor vangsten, EEG spectrale vermogen, hartfunctie en hartfrequentie-variabiliteit.

Abstract

Bij epilepsie, kunnen vangsten oproepen cardiale ritme stoornissen zoals hartslag wijzigingen, geleiding blokken, asystoles en hartritmestoornissen, die potentieel risico van plotselinge onverwachte dood in epilepsie (SUDEP verhogen kunnen). Elektro-encefalografie (EEG) en elektrocardiogram (ECG) zijn veelgebruikte klinische diagnostische hulpprogramma’s om abnormale hersenen en cardiale ritmes in patiënten te controleren. Hier, wordt een techniek om tegelijkertijd video, EEG en ECG opnemen in muizen maatregel gedrag, hersenen en cardiale activiteiten, respectievelijk beschreven. De hier beschreven techniek maakt gebruik van een getuide (d.w.z., bedraad) opname configuratie waarin de geïmplanteerde elektrode op de kop van de muis aan de opname-apparatuur gekoppeld is. In vergelijking met draadloze telemetrie opname systemen, bezit de vastgebonden regeling verschillende technische voordelen zoals een groter aantal kanalen voor het opnemen van de EEG- of andere biopotentials; lagere kosten van de elektrode; en grotere frequentie bandbreedte (d.w.z., samplefrequentie) van opnamen. De basis van deze techniek kunnen ook gemakkelijk worden gewijzigd voor de opname van andere biosignals, zoals elektromyografie (EMG) of plethysmography voor beoordeling van spier- en respiratoire activiteit, respectievelijk. Naast de beschrijving van het uitvoeren van de EEG-ECG opnames, detail wij ook methoden te kwantificeren van de resulterende gegevens voor vangsten, EEG spectrale macht hartfunctie en hartfrequentie-variabiliteit, die we laten zien in een voorbeeld-experiment met een muis met epilepsie wegens Kcna1 gene schrapping. Video-EEG-ECG monitoring in muismodellen van epilepsie of andere neurologische ziekte biedt een krachtig hulpmiddel om te identificeren dysfunctie op het niveau van de hersenen, het hart of de hersenen-hart interacties.

Introduction

Elektro-encefalografie (EEG) en elektrocardiogram (ECG) zijn krachtige en meest gebruikte technieken voor de beoordeling van in vivo hersenen en hartfunctie, respectievelijk. EEG is de opname van elektrische hersenactiviteit door het aanbrengen van de elektroden op de hoofdhuid1. Het signaal dat opgenomen met niet-invasieve EEG vertegenwoordigt spanning fluctuaties die voortvloeien uit summated excitatory en remmende postsynaptisch potentieel gegenereerd voornamelijk door corticale piramidale neuronen1,2. EEG is de meest voorkomende neurodiagnostic test voor het beoordelen en beheren van patiënten met epilepsie3,4. Het is vooral handig wanneer epileptische aanvallen zonder duidelijk convulsive gedrags-uitingen, zoals afwezigheid aanvallen of niet-convulsive status epilepticus5,6 optreden. Omgekeerd, niet-epilepsie gerelateerde voorwaarden die tot convulsive episoden of verlies van bewustzijn leiden kunnen een verkeerde diagnose worden gesteld als epileptische aanvallen zonder video-EEG toezicht7. Naast zijn nut op het gebied van epilepsie, wordt EEG ook op grote schaal gebruikt om te detecteren abnormale hersenactiviteit die zijn gekoppeld aan slaapstoornissen, encefalopathieën en Geheugenstoornissen, alsmede ter aanvulling van de algemene anesthesie tijdens operaties2 , 8 , 9.

In tegenstelling tot de EEG, ECG (of EKG als het wordt soms afgekort) is de opname van de elektrische activiteit van het hart-10. ECG’s worden gewoonlijk uitgevoerd door elektroden te hechten aan de ledematen extremiteiten en de borstwand, die maakt de ontdekking van de wijzigingen van de spanning gegenereerd door het myocardium tijdens elke cardiale cyclus van contractie en ontspanning10,11. De primaire onderdelen van de golfvorm van de ECG van een normale cardiale cyclus zijn de P-golf, de QRS-complex en de T-golf, die overeenkomen met atriale depolarisatie, ventriculaire depolarisatie en ventriculaire repolarisatie, respectievelijk10, 11. ECG bewaking routinematig gebruikt wordt om hartritmestoornissen en gebreken van de cardiale geleiding systeem12te identificeren. Bij epilepsie patiënten, wordt het belang van het gebruik van ECG te identificeren van potentieel levensbedreigende aritmieën versterkt, aangezien zij aanzienlijk verhoogd risico van plotselinge hartstilstand, evenals plotselinge onverwachte dood in epilepsie13, 14,,15.

Naast hun klinische toepassingen, EEG en ECG-opnamen geworden tot een onmisbaar instrument voor de identificatie van de hersenen en hart dysfunctie in muismodellen van de ziekte. Hoewel traditioneel deze opnames zijn afzonderlijk uitgevoerd, beschrijven hier we een techniek om video opnemen, EEG en ECG gelijktijdig in muizen. De gelijktijdige video-EEG-ECG-methode gedetailleerde hier maakt gebruik van een getuide opname configuratie waarin de geïmplanteerde elektrode op de kop van de muis aan de opname-apparatuur gekoppeld is. Historisch, dit aangebonden, of bedraad, configuratie is het standaard en meest intensief gebruikte methode voor EEG opnamen in muizen; echter EEG telemetrie radiosystemen hebben ook onlangs ontwikkeld en winnen aan populariteit16.

In vergelijking met draadloze systemen van de EEG, bezit de vastgebonden regeling verschillende technische voordelen die kunnen het beter zijn afhankelijk van de gewenste toepassing maken. Deze voordelen omvatten een groter aantal kanalen voor het opnemen van de EEG- of andere biopotentials; lagere kosten van de elektrode; elektrode ijzerbeschikbaarheid; minder gevoeligheid voor signaal verlies; en nog grotere frequentie bandbreedte (dwz., samplefrequentie) van opnamen17. Goed gedaan, de hier beschreven opnamemethode van vastgebonden is geschikt voor het verstrekken van hoge kwaliteit, artefact-vrije EEG en ECG gegevens gelijktijdig, samen met de bijbehorende video voor gedrags toezicht. Deze EEG en ECG gegevens kan vervolgens worden gedolven om te identificeren, neurale, cardiale of neurocardiac afwijkingen zoals toevallen, veranderingen in de EEG macht spectrum, cardiale geleiding blokken (dwz., overgeslagen hartslagen), en veranderingen in de hartfrequentie-variabiliteit. Om aan te tonen van de toepassing van deze kwantitatieve methoden van EEG-ECG, presenteren we een voorbeeld-experiment met behulp van een Kcna1 knock-out (- / -) muis. Kcna1 – / – muizen gebrek aan spanning-gated Kv1.1 α-subunits en dientengevolge vertonen spontane aanvallen, cardiale dysfunctie en vroegtijdige dood, waardoor ze een ideaal model voor simultane EEG-ECG evaluatie van schadelijke epilepsie-geassocieerde neurocardiac dysfunctie.

Protocol

Alle experimentele procedures moeten worden uitgevoerd overeenkomstig de richtsnoeren van de National Institutes of Health (NIH), zoals goedgekeurd door uw instelling institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC). De belangrijkste chirurgische instrumenten die nodig zijn voor dit protocol zijn afgebeeld in Figuur 1. 1. voorbereiding van de elektrode van implantatie Plaats de vrouwelijke nanoconnector van 10-socket (dwz, de elektrode; <strong clas…

Representative Results

Om aan te tonen hoe te analyseren van de gegevens van de opnamen van de EEG-ECG te identificeren neurocardiac afwijkingen, de resultaten worden weergegeven voor een 24u EEG-ECG-opname van een Kcna1-/- muis (2 maanden oud). Deze mutant dieren, die zijn ontworpen om het gebrek aan spanning-gated Kv1.1 α-subunits gecodeerd door de Kcna1 -gen, zijn een vaak gebruikte genetisch model van epilepsie aangezien zij betrouwbare en frequente gegene…

Discussion

Voor het verkrijgen van hoge kwaliteit EEG-ECG opnamen die vrij van artefacten zijn, moet voorzorgen worden genomen om te voorkomen dat de afbraak- of losraken van de geïmplanteerde elektrode en draden. Naarmate een EEG hoofd implantaat losse, zal de contacten van de draad met de hersenen degraderen leidt tot verminderde signaal amplitudes. Losse implantaten of slechte draad contacten kunnen ook leiden tot verstoring van de elektrische signalen, invoering van bewegingsartefacten en achtergrondgeluiden aan de opnamen. Om…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit werk werd gesteund door de burgers Verenigde voor onderzoek bij epilepsie (subsidie nummer 35489); de National Institutes of Health (verlenen nummers R01NS100954, R01NS099188); en een Louisiana State University Health Sciences Center Malcolm Feist Postdoctoral Fellowship.

Materials

VistaVision stereozoom dissecting microscope VWR
Dolan-Jenner MI-150 microscopy illuminator, with ring light VWR MI-150RL
CS Series scale Ohaus CS200 for weighing animal
T/Pump professional Stryker recirculating water heat pad system
Ideal Micro Drill Roboz Surgical Instruments RS-6300
Ideal Micro Drill Burr Set Cell Point Scientific 60-1000 only need the 0.8-mm size
electric trimmer Wahl 9962 mini clipper
tabletop vise Eclipse Tools PD-372 PD-372 Mini-tabletop suction vise
fine scissors Fine Science Tools 14058-11 ToughCut, Straight, Sharp/Sharp, 11.5 cm
Crile-Wood needle holder Fine Science Tools 12003-15 Straight, Serrated, 15 cm, with lock – For applying wound clips
Dumont #7 forceps Fine Science Tools 11297-00 Standard Tips, Curved, Dumostar, 11.5 cm
Adson forceps Fine Science Tools 11006-12 Serrated, Straight, 12 cm
Olsen-Hegar needle holder with suture cutter Fine Science Tools 12002-12 Straight, Serrated, 12 cm, with lock
scalpel handle #3 Fine Science Tools 10003-12
surgical blades #15 Havel's FHS15
6-0 surgical suture Unify S-N618R13 non-absorbable, monofilament, black
gauze sponges Coviden 2346 12 ply, 7.6 cm x 7.6 cm
cotton-tipped swabs Constix SC-9 15.2-cm total length
super glue  Loctite LOC1364076 gel control
Michel wound clips, 7.5mm Kent Scientific INS700750
polycarboxylate dental cement kit Prime-dent 010-036 Type 1 fine grain
tuberculin syringe BD 309623
polyethylene tubing Intramedic 427431 PE160, 1.143 mm (ID) x 1.575 mm (OD)
chlorhexidine  Sigma-Aldrich C9394
ethanol Sigma-Aldrich E7023-500ML
Puralube vet ointment Dechra Veterinary Products opthalamic eye ointment
mouse anesthetic cocktail Ketamine (80 mg/kg), Xylazine (10 mg/kg), and Acepromazine (1 mg/kg)
carprofen Rimadyl (trade name)
HydroGel ClearH20 70-01-5022 hydrating gel; 56-g cups
Ponemah  software Data Sciences International data acquisition and analysis software; version 5.2 or greater with Electrocardiogram Module
7700 Digital Signal conditioner Data Sciences International
12 Channel Isolated Bio-potential Pod Data Sciences International
fish tank Topfin for use as recording chamber; 20.8 gallon aquarium; 40.8 cm (L) X 21.3 cm (W) X 25.5 cm (H)
Digital Communication Module (DCOM) Data Sciences International 13-7715-70
12 Channel Isolated Bio-potential Pod Data Sciences International 12-7770-BIO12
serial link cable Data Sciences International J03557-20 connects DCOM to bio-potential pod
Acquisition Interface (ACQ-7700USB) Data Sciences International PNM-P3P-7002
network video camera Axis Communications P1343, day/night capability
8-Port Gigabit Smart Switch Cisco SG200-08 8-port gigabit ethernet swith with 4 power over ethernet supported ports (Cisco Small Business 200 Series)
10-pin male nanoconnector with guide post hole Omnetics NPS-10-WD-30.0-C-G electrode for implantation on the mouse head
10-socket female nanoconnector with guide post Omnetics NSS-10-WD-2.0-C-G connector for electrode implant
1.5-mm female touchproof connector cables PlasticsOne 441 1 signal, gold-plated; for connecting the wiring from the head-mount implant to the bio-potential pod
soldering iron Weller WESD51 BUNDLE digital soldering station
solder Bernzomatic 327797 lead free, silver bearing, acid flux core solder
heat shrink tubing URBEST collection of tubing with 1.5- to 10-mm internal diameters
heat gun Dewalt D26960
mounting tape (double-sided) 3M Scotch MMM114 114/DC Heavy Duty Mounting Tape, 2.54 cm x 1.27 m 
desktop computer Dell recommended minimum requirements: 3rd Gen Intel Core i7-3770 processor with HD4000 graphics; 4 GB RAM, 1 GB AMD Radeon HD 7570 video card; 1 TB hard drive; Windows 7 OS 
permanent marker Sharpie 37001 black color, ultra fine point
toothpicks for mixing and applying the polycarboxylate dental cement
LabChart Pro software ADInstruments power spectrum software; version 8.1.3 or greater
Kubios HRV software Univ. of Eastern Finland HRV analysis software; version 2.2
Notepad Microsoft simple text editor software

Referencias

  1. Fisch, B. J. . Fisch and Spehlmann’s EEG Primer. , (1999).
  2. Constant, I., Sabourdin, N. The EEG signal: a window on the cortical brain activity. Paediatr. Anaesth. 22 (6), 539-552 (2012).
  3. Mendez, O. E., Brenner, R. P. Increasing the yield of EEG. J. Clin. Neurophysiol. 23 (4), 282-293 (2006).
  4. Smith, S. J. M. EEG in the diagnosis, classification, and management of patients with epilepsy. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 76, ii2-ii7 (2005).
  5. Bauer, G., Trinka, E. Nonconvulsive status epilepticus and coma. Epilepsia. 51 (2), 177-190 (2010).
  6. Hughes, J. R. Absence seizures: a review of recent reports with new concepts. Epilepsy Behav. 15 (4), 404-412 (2009).
  7. Mostacci, B., Bisulli, F., Alvisi, L., Licchetta, L., Baruzzi, A., Tinuper, P. Ictal characteristics of psychogenic nonepileptic seizures: what we have learned from video/EEG recordings–a literature review. Epilepsy Behav. 22 (2), 144-153 (2011).
  8. Smith, S. J. M. EEG in neurological conditions other than epilepsy: when does it help, what does it add?. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 76, ii8-ii12 (2005).
  9. Kennett, R. Modern electroencephalography. J. Neurol. 259 (4), 783-789 (2012).
  10. Thaler, M. S. . The Only EKG Book You’ll Ever Need. , (2012).
  11. Becker, D. E. Fundamentals of electrocardiography interpretation. Anesth. Prog. 53 (2), 53-63 (2006).
  12. Luz, E. J. S., Schwartz, W. R., Cámara-Chávez, G., Menotti, D. ECG-based heartbeat classification for arrhythmia detection: A survey. Comput. Methods Programs Biomed. 127, 144-164 (2016).
  13. Bardai, A., et al. Epilepsy is a risk factor for sudden cardiac arrest in the general population. PloS One. 7 (8), e42749 (2012).
  14. Lamberts, R. J., et al. Increased prevalence of ECG markers for sudden cardiac arrest in refractory epilepsy. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 86 (3), 309-313 (2015).
  15. Thurman, D. J., Hesdorffer, D. C., French, J. A. Sudden unexpected death in epilepsy: assessing the public health burden. Epilepsia. 55 (10), 1479-1485 (2014).
  16. Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System. J. Vis. Exp. (101), e52554 (2015).
  17. Bertram, E. H. Monitoring for Seizures in Rodents. Models of Seizures and Epilepsy. , 97-109 (2017).
  18. Mishra, V., et al. Scn2a deletion improves survival and brain-heart dynamics in the Kcna1-null mouse model of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). Hum. Mol. Genet. 26 (11), 2091-2103 (2017).
  19. Thireau, J., Zhang, B. L., Poisson, D., Babuty, D. Heart rate variability in mice: a theoretical and practical guide. Exp. Physiol. 93 (1), 83-94 (2008).
  20. Smart, S. L., et al. Deletion of the K(V)1.1 potassium channel causes epilepsy in mice. Neuron. 20 (4), 809-819 (1998).
  21. Glasscock, E., Yoo, J. W., Chen, T. T., Klassen, T. L., Noebels, J. L. Kv1.1 potassium channel deficiency reveals brain-driven cardiac dysfunction as a candidate mechanism for sudden unexplained death in epilepsy. J. Neurosci. 30 (15), 5167-5175 (2010).
  22. Moore, B. M., Jerry Jou, ., Tatalovic, C., Kaufman, M., S, E., Kline, D. D., Kunze, D. L. The Kv1.1 null mouse, a model of sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). Epilepsia. 55 (11), 1808-1816 (2014).
  23. Ryvlin, P., et al. Incidence and mechanisms of cardiorespiratory arrests in epilepsy monitoring units (MORTEMUS): a retrospective study. Lancet Neurol. 12 (10), 966-977 (2013).
  24. Stables, C. L., Auerbach, D. S., Whitesall, S. E., D’Alecy, L. G., Feldman, E. L. Differential impact of type-1 and type-2 diabetes on control of heart rate in mice. Auton. Neurosci. 194, 17-25 (2016).
  25. Gehrmann, J., Hammer, P. E., Maguire, C. T., Wakimoto, H., Triedman, J. K., Berul, C. I. Phenotypic screening for heart rate variability in the mouse. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (2), H733-H740 (2000).
  26. Goldman, A. M., Glasscock, E., Yoo, J., Chen, T. T., Klassen, T. L., Noebels, J. L. Arrhythmia in heart and brain: KCNQ1 mutations link epilepsy and sudden unexplained death. Sci. Transl. Med. 1 (2), 2ra6 (2009).

Play Video

Citar este artículo
Mishra, V., Gautier, N. M., Glasscock, E. Simultaneous Video-EEG-ECG Monitoring to Identify Neurocardiac Dysfunction in Mouse Models of Epilepsy. J. Vis. Exp. (131), e57300, doi:10.3791/57300 (2018).

View Video