Количественная оценка Моноцит трансмиграции и образование пены клетки от физических лиц с хронические воспалительные заболевания

Моноцит переселение представляет собой решающий шаг в развитии атеросклеротических бляшек, что может привести к тромбоз, инсульта и инфаркта миокарда. Атеросклеротические бляшки развиваются из жирных разводов, обычно присутствующих на участках низкой колебательной кровотока в среде крупных артерий, где осаждаются липидов способствует активации эндотелиальной и локализованные воспаление¹. Моноциты набираются на эндотелиальных клеток в жирных полосы через Моноцит эозинофилов белков (например, CCL2) и высыпками интимы². После переселения Моноциты образуют атерогенные, липидов Ладена макрофагов, называемые пены клетки вследствие поглощения липидов, синтез липидов, вниз регулирование измеряем холестерина или сочетание вышеуказанных факторов. Моноциты может также накапливают липиды в циркуляции и имеют «пенистый» фенотип, возможно предрасполагающие клетки для пены клетки формирования^3,4. Пена клетки являются характерной чертой жирных разводов и ранней стадии атеросклеротических бляшек и их формирования находится под влиянием липидов и воспалительных медиаторов⁵. Кроме того, моноциты имеют возможность обратить вспять высыпками из артерии в кровоток⁶, тем самым удаляя липидов из интима и Исполняющий обязанности для поддержания здоровья артерии.

Определение склонности моноцитов к высыпками через артериальной эндотелия и формы пены клеток интимы, или вспять высыпками и нести липидов из доски, является ключевым требованием для понимания роли Моноцит активации в повышении атеросклеротические риска. В выяснения реального времени в естественных условиях информацию о жирных полоска/атеросклеротической бляшки развития важны мыши модели САПР как атеросклероз. Однако эти модели требуют генетического изменения природных холестерина, обработки способности этих животных, обычно в сочетании с радикальные изменения в диете (например, модель диета ароЕ / Западной типа)^7,8, тем самым, склонение-физиологические накопления оборотных липидов уровней развития зубного налета диск. Эти модели могут быть лишь ограниченные отношение к хронической человека воспалительных например ВИЧ-инфекции, не связанные с увеличение циркулирующих холестерина и липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) уровнях. Кроме того, различия в биологии Моноцит людей и мышей сделать тестирование иммунологического вопросы относительно актуальности субпопуляций моноцитов (таких как промежуточные моноцитов (CD14⁺⁺окрашенных CD16 +⁺))⁹ трудно. Это имеет важное значение при изучении механизмов вождения сердечно-сосудистых заболеваний, как промежуточные Моноцит рассчитывает самостоятельно прогнозировать сердечно-сосудистых событий^10,11. Хотя анализов существуют последовательно измерить либо формирование клеток Моноцит переселения или пены в изоляции, не в vitro пробирного протестирована для количественной оценки обоих аспектов раннего атерогенеза, используя те же клетки от клинических когорты. Transwell модели используют модифицированную систему двухпалатного Бойден которой клетки загружаются в верхней камере и высыпками через пористые Пластиковый барьер или монослоя клеток в нижней палате, которая обычно содержит носитель с хемотаксического^{12 , 13}. Хотя широко используется для анализа лейкоцита трансмиграции, эти модели обычно не включают слой, представляющий интима, что приводит к переселенных клетки мигрируют в раствор и не позволяют для измерения ячейки пены формирование или обратного переселения тех же ячейках. И наоборот модели формирования клеток пены не учитывают transmigratory индуцированных изменений моноциты или эффекты эндотелиальной активации, который известен вносить пены клетки формирования¹⁴. Кроме того, эти системы вызывают пены формирования клеток от макрофагов придерживаться пластины культуры клеток путем добавления насыщения концентраций экзогенного окисленного липопротеинов низкой плотности (oxLDL)^15,16, ключевых индуктор формирования клеток пены. ЛПНП, используемые в этих моделях часто окисляется, не физиологически соответствующих процессов, таких как CuSO₄ лечения¹⁷, таким образом, допрос Физиологическая важность исследований с использованием этих моделей.

Здесь мы описываем assay который измеряет Моноцит трансмиграции и образование пены клетки же клеток, которая не требуют добавления внешних oxLDL, таким образом лучше моделирования роли моноцитов в формировании клеток пены. Эта модель была первоначально разработана профессор Уильям Muller (Северо-Западный университет, Чикаго)¹⁸и уточнены в нашей лаборатории для оценки ex vivo атерогенности моноцитов, изолированные под не Активация условия от лица с базовой воспалительных заболеваний, сопутствующих заболеваний, таких как ВИЧ инфекции¹⁹ , а также старения²⁰, которые связаны с повышенным риском развития атеросклероза. Эта модель также предоставляет платформу для ответа на основные биологические вопросы относительно склонность различных Моноцит подмножеств формы пены клетки²⁰, влияние эндотелиальной активации цитокинов, таких как ФНО на образование пены клетки¹⁴ и мигрирующих свойств моноцитов, такие как глубина и скорость переселения в гели¹⁹. Кроме того Моноцит трансмиграции и пены клетки формирования могут быть количественно с помощью стандартных микроскопии, живут клеток, поток цитометрии и изображений проточной цитометрии, таким образом, предоставляя универсальный метод для оценки роли моноцитов в атерогенеза.