フローサイトメトリーによるマウス胚における赤血球系前駆細胞およびその子孫の同定

発達中の骨髄系子孫が成人期にとどまる造血前駆細胞のいくつかの連続するが重複する波が存在する。まず、単能性「プリミティブ」前駆体は、E7.5、E8.25間のマウス卵黄嚢^1,2に出現し、任意の単球の中間ことなく、胚性マクロファージを生じます。原始前駆細胞に由来するマクロファージが、小膠細胞として成人の脳に存続するかどうかは、活発な研究の対象である。第二に、E8.5の卵黄嚢にErythro-Myeloid Precursors（EMPs）が生じ、血流に入り、胚を定着させる。 EMPはRUNX1依存性内皮への造血転移^3、4における卵黄嚢造血内皮から出てきます。 EMPは卵黄嚢内のマクロファージに分化することができるが、それらはまた、胚の日（E）9 ⁵から胎児肝をコロニー化し、赤血球、巨核球、マクロファージ、単球顆粒球および肥満細胞に分化する⁶ 。 EMP由来のマクロファージは、発達および成人組織において増殖能力を示す。非常に少ないが、その分化経路^7、8について知られているようEMP-由来のマクロファージが分化の単球の段階をバイパスするかどうかはまだ議論の余地があります。最後に、造血幹細胞（HSC）は、大動脈 – 生殖腺 – 中胚葉領域から適切な胚内のE10.5に出現し、胎児の肝臓に移動する。長期再増殖能を有するHSCは、E11（42体節ペア段階）の後にのみ検出される⁹ 。そこでは、最終的な造血が出生後の生活の間、血液細胞産生の優勢な部位になる骨髄に移行し始めるまで、それらは拡大してE12.5と区別される¹⁰ 。

spこれらの胚性造血前駆細胞の波の特定の寄与を区別する能力をこれまで妨げていた。 EMPおよびHSCの両方がRunx1依存的に産生され、転写因子Mybおよび増殖因子受容体Csf1r（コロニー刺激因子1受容体、マクロファージコロニー刺激因子受容体としても知られる）を発現するが、EMPは、 インビトロおよびインビボのリンパ電位の欠如、それらの長期再増殖能の欠如および系譜マーカーSca-1 ¹¹の表面発現の欠如により、HSCが減少した。遺伝的運命マッピングモデルは、細胞特異的かつ時間特異的な方法で胚性前駆細胞を標的とすることができるため、マクロファージの個体発生を特徴づけるために必要とされる。ここでは、2つの系統を区別するために実験所で使用されている運命マッピングプロトコールを提示するほとんどの成人組織に見出されるマクロファージ：HSC由来の浸潤マクロファージおよびHSC非依存性の常在マクロファージ。

組織常在性マクロファージはCSF1R ¹²サイトカイン受容体を発現するMybの非依存性前駆細胞に遡ると3つの相補性運命マッピング戦略^6を用いて、E8.5-E10.5で胚中に存在しているされています。胎児HSCを標識せずに卵黄嚢造血を研究するために、改良されたCreリコンビナーゼおよび2つのマウスエストロゲン受容体（Mer-iCre-Mer）のタ​​モキシフェン誘導性融合タンパク質を発現するトランスジェニック株Csf1r ^MeriCreMerを使用するCsf1rプロモーター。したがって、Creリコンビナーゼは、限られた時間枠の間にCsf1r発現細胞において活性である。 lox-STOP-loxカセット（ ^{Rosa26 LSL-eYFP} ）の下流に蛍光タンパク質を含むレポーター株と一緒に使用すると、誘導の時点で存在する細胞の遺伝的標識化だけでなく、それらの子孫の遺伝的標識化も含む。卵黄嚢単能性「原始」前駆細胞または胎児性HSCを標識せずに、活性形態のタモキシフェン、4-ヒドロキシタモキシフェン（OH-TAM）、EMPおよびマクロファージを標識したE8.5での投与。これにより、我々は、胚発達中のEMPおよびその子孫の免疫表現型を特徴付けるとともに、卵黄嚢由来マクロファージの成体マクロファージプールへの寄与を評価した。原始前駆細胞由来のマクロファージもまた、このアプローチを用いて標識されているかどうか、およびそれらが成体マクロファージプールに寄与できるかどうかを特徴付けるために、さらなる研究が必要である。