Viral traçage des circuits neuronaux génétiquement déterminées

Les méthodes classiques d'étude des circuits neuronaux débit assez faible. Transsynaptique virus, en particulier la pseudo-rage (PRV) et le virus de la rage (RABV), et plus récemment virus de la stomatite vésiculaire (VSV), pour l'étude des circuits, est de plus en plus populaire. Ces méthodes à utiliser plus les virus qui transmettent entre les neurones, soit la direction antérograde ou rétrograde.

Récemment, un RABV modifié pour monosynaptique rétrograde traçage a été développé. (Figure 1A). Dans cette méthode, la glycoprotéine (G), le gène est supprimé à partir du génome viral, et réapprovisionné seulement dans les neurones cibles. Spécificité infection est obtenue en substituant une chimère G, composé du domaine extracellulaire de la glycoprotéine ASLV-A et le domaine cytoplasmique de la RABV-G (A RG /), pour la normale RABV-G ^1. Cette chimère G infecte spécifiquement les cellules exprimant le récepteur TVA ^1. Le gène codant pour la TVA peut d étéelivered par diverses méthodes ^2-8. Après RABV-G infection d'un neurone TVA exprimant, le RABV peut transmettre à d'autres neurones, synapses connectées dans un sens rétrograde par la nature de son propre G qui était co-délivré avec le récepteur TVA. Cette technique qualifie un nombre relativement important d'entrées (10.05%) ² sur un type cellulaire défini, la fourniture d'un échantillon de toutes les entrées sur un type cellulaire défini démarreur.

Nous avons récemment modifié cette technique à utiliser VSV comme un traceur transsynaptique ^9. VSV a plusieurs avantages, notamment la rapidité de l'expression des gènes. Ici, nous détaillons un nouveau système de suivi à l'aide virale utiles pour sonder les microcircuits avec une résolution accrue VSV. Alors que les stratégies originales publiées par Wickersham et al. ⁴ et Beier et al. ⁹ étiquetage de tous les permis de neurones qui projettent sur ​​un premier-infectés TVA exprimant des cellules, ici VSV a été conçu pour transmettre uniquement à la télévisionCellules exprimant A-(figure 1B). Le virus est d'abord pseudotypés avec RABV-G pour permettre l'infection des neurones en aval de TVA exprimant neurones. Après avoir infecté de cette première population de cellules, le virus ne peut infecter publié TVA cellules exprimant. Parce que la propagation virale transsynaptique est limitée à TVA cellules exprimant, la présence de l'absence de connectivité de types de cellules définies peuvent être explorées avec une grande résolution. Un diagramme expérimental de ces expériences est montré dans la figure 2. Ici, nous montrons un circuit modèle, celui de la direction de la sélectivité dans la rétine de la souris. Nous examinons la connectivité des cellules amacrines starburst (ZSC) pour les cellules ganglionnaires de la rétine (CGR).