Summary

Mit den Eizellen<em> Schistosoma mansoni</em> Als ein<em> In vivo</em> Modell von Helminthen-induzierten Lungenentzündung

Published: June 05, 2012
doi:

Summary

Schistosoma mansoni Eier sind potente Stimulatoren der T-Helferzellen vom Typ 2 (Th2) Immunantwort, die charakteristisch für Parasitenbefall, Asthma und allergische Entzündung. Dieses Protokoll nutzt S. mansoni Ei Injektion an einen CD4 Th2-Zytokin-induzierte Entzündungsreaktion in der Lunge, Lunge durch Granulombildung um das Ei gekennzeichnet, Eosinophilie und Makrophagen-Aktivierung Alternative zu generieren.

Abstract

Schistosoma Parasiten sind Blut-Egel, die schätzungsweise 200 Millionen Menschen weltweit ein infizieren. Bei der chronischen Infektion mit Schistosoma, die schwere Pathologie, einschließlich Leberfibrose und Splenomegalie, wird durch die Immunantwort gegen den Parasiten Eier anstatt den Parasiten selbst 2 verursacht. Parasiteneier Induktion einer Th2-Antwort durch die Produktion von IL-4, IL-5 und IL-13, die alternative Aktivierung von Makrophagen und die Ansammlung von Eosinophilen ist. Hier beschreiben wir Injektion von Schistosoma mansoni Eier als Modell, um Parasiten-spezifische Th2-Zytokin Reaktionen in der Lunge und Lymphknoten, die Bildung von Granulomen pulmonalen rund um das Ei, und Entzündung der Atemwege zu untersuchen.

Nach intraperitonealer Sensibilisierung und intravenöse Herausforderung, S. mansoni Eier werden in die Lunge über den Lungenarterien, wenn sie im Lungenparenchym eingeschlossen transportiertdurch Granulome von Lymphozyten, Eosinophilen und alternativ aktivierten Makrophagen 3-6 besteht. Verbunden mit Granulombildung, Entzündung in den bronchoalveolären Raum, Ausdehnung der Lymphknoten-und CD4-T-Zell-Aktivierung beobachtet werden kann. Hier haben wir ausführlich das Protokoll zur Isolierung von Schistosoma mansoni Eier aus infizierten Lebern (modifiziert nach 7), Sensibilisierung und herausfordernd Mäuse, und die Rückgewinnung der Organe (bronchoalveoläre Lavage (BAL), Lunge und Lymphknoten) für die Analyse. Wir berücksichtigen auch Vertreter histologischen und immunologischen Daten und Vorschläge für weitere immunologische Analyse.

Insgesamt liefert diese Methode ein in vivo Modell zu Helminthen ausgelösten immunologischen Reaktionen in der Lunge zu untersuchen, was ist breit anwendbar auf das Studium der Th2 entzündlichen Erkrankungen einschließlich Wurminfektionen, fibrotische Erkrankungen, allergische Entzündungen und Asthma. Vorteile dieses Modells für die Untersuchung von typ.e 2 Entzündung in der Lunge sind die Reproduzierbarkeit eines potenten Th2-Entzündungsreaktion in der Lunge und Lymphknoten, die Leichtigkeit der Beurteilung von Entzündungen, die durch die histologische Untersuchung der Granulome rund um das Ei, und das Potenzial für langfristige Lagerung des Parasiten Eier.

Protocol

1. Reinigende Schistosoma mansoni Eier Infect Swiss-Webster-Mäusen mit schistosome Cercarien, die das infektiöse Stadium des Lebenszyklus Schistosoma 8 ist. Alternativ erhalten schistosome-infizierten Mäusen aus dem NIAID Schistosomiasis Resource Center ( http://www.schisto-resource.org/~~V ). Lassen Mäuse für 6-7 Wochen nach der Infektion, in welcher Zeit-Punkt, Eier sind in der Leber vorhanden und können wieder…

Discussion

Hier wird ein Modell beschäftigt Schistosoma mansoni Eier zu Typ-2-Lungen-Entzündung zu induzieren beschrieben. Charakteristische Merkmale dieses Modells sind die potenten Th2-Immunantwort, Entzündung der Atemwege und Lungen Granulombildung. Da diese Parameter in Abhängigkeit vom Th2 CD4-Zell-Antworten 11 sind, ist dies ein nützliches Modell zur Untersuchung der Auswirkungen von Protein-spezifischen oder Linie-spezifische Deletionen auf Th2-Zell-Reaktionen zu untersuchen. Hier die Anzeigen würd…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health (NIH) AI091759 und dem Morbus Crohn und Colitis Foundation of America von William und Shelby Modell Family Foundation-Forschungspreis (bis Mn) unterstützt. Schistosome-infizierte Mäuse wurden von der NIAID Schistosome Resource Center (NIAID Contract N01 A130026) geliefert.

Materials

Reagent Size/Description Company Catalog #
Collagenase/Dispase 500 mg Roche Applied Science 11 097 113 001
Diff Quik Hema 3 Stain Pack Fisher Scientific Co. LLC 122-911
DMEM Liquid Gibco 11965
Falcon 50mL Pack Falcon 352070
Intramedic PE Tubing 0.58 mm Becton Dickinson and Co. 427410
Isoflurane 250 mL Abbot Animal Health 52600405
Ketamine 100 mg/mL Fort Dodge, Animal Health N/A
Mannose receptor antibody Biotin AbD Serotec MCA2235B
Metallic Strainer Standard kitchen strainer Target Laurentiis
Paraformaldehyde 16% Electron Microsc. Sciences 15710
Penicillin/ Streptomycin 100x Gibco 15070
Percoll 1 Liter GE Healthcare Biosciences 17 0891 01
RELMα antibody 50 μg Peprotech 500-P214
Surgical Thread 2.0 USP 100 yds Surgical Specialties Corp. SP118
Syringe Needle 23g, 3/4 inch BD Vacutainer Lab. Med. 305143
USA Standard Testing Sieve 150 μm, 0.0059″ W.S. Tyler, Inc. ASTME-11, Spec. No. 100
Xylazine 20 mg/mL Butler N/A

Referencias

  1. World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
  2. Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
  3. Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
  4. Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
  5. Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
  6. Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
  7. Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
  8. Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
  9. Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
  10. Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
  11. Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
  12. Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
  13. Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).

Play Video

Citar este artículo
Joyce, K. L., Morgan, W., Greenberg, R., Nair, M. G. Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation. J. Vis. Exp. (64), e3905, doi:10.3791/3905 (2012).

View Video